KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性对阿霉素损伤大鼠心肌细胞结构及自噬的影响

目的构建携带KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性的大鼠模型,给予阿霉素损伤,探讨KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性对于阿霉素损伤的心肌,心肌结构、功能及细胞自噬的影响。方法利用定点突变的方法获得含有Kir6.2 KK基因型的大鼠并进行基因鉴定。将大鼠随机分为4组,即A组(WT+Saline组,SD大鼠+生理盐水)、B组(E23K+Saline组,Kir6.2KK大鼠+生理盐水)、C组(WT+DOX组,SD大鼠+阿霉素)、D组(E23K+DOX组,Kir6.2 KK大鼠+阿霉素)。采用腹腔注射阿霉素的方法构建阿霉素损伤大鼠模型,对照组腹腔注射等体积的生理盐水。应用心脏彩超进行阿霉素损伤心肌病模型的鉴定及心脏结构和功能的评价(每组8只)。分别通过HE染色及天狼星红染色心肌组织切片,测量心肌细胞面积及心肌纤维化比例,并通过PCR方法检测纤维化相关标志物CTGF、TGF-β mRNA的表达。通过Western blot法技术测定心肌细胞自噬水平。结果超声结果显示,阿霉素损伤的大鼠相比于盐水组存在明显的心肌重构及功能损伤(P<0.01),且E23K组变化较WT组更明显(P<0.01)。病理及纤维化相关标志物mRNA表达显示,阿霉素损伤的大鼠心肌纤维化程度明显加重(P<0.01),且E23K组纤维化程度较WT组更严重(P<0.01);自噬相关蛋白表达量检测显示,阿霉素损伤的大鼠,自噬相关蛋白表达量显著增加(P<0.01),且E23K组明显高于WT组(P<0.01)。结论在阿霉素损伤模型中,Kir6.2亚基E23K多态性对大鼠心脏结构、功能、纤维化程度及自噬表达均有显著影响。

扩张型心肌病患者E23K多态性与心功能的关系

目的:研究扩张型心肌病(DCM)患者KATP通道亚单位Kir6.2上E23K多态性与心功能的关系。方法:选取DCM患者89例,采用心脏多普勒超声二维成像技术,检测左室舒张末期内径(LVEDD)和左房内径(LAD),并运用PCR等分子生物学技术,对KATP通道上的亚单位Kir6.2进行扩增测序。结果:89例DCM患者中,E23K突变55例,E23K无突变34例。在E23K突变组和E23K无突变组中LVEDD分别为(65.52±1.27)mm和(61.31±1.02)mm(P=0.017);LAD分别为(46.24±1.39)mm和(42.54±1.18)mm(P=0.044)。结论:E23K突变组LVEDD和LAD较无突变组显著扩大。

三磷酸腺苷敏感性钾通道Kir6.2 E23K多态性对大鼠心脏结构及功能的影响

目的初步探讨在扩张型心肌病中E23K多态性对心脏结构及功能的影响。方法构建携带人心肌特异性启动子的α-MHC-Kir6．2KKDNA表达载体，运用显微注射法获得Kir6．2E23K多态性的大鼠模型（F0代），F0代大鼠与SD大鼠杂交，产出F1代大鼠并进行基因鉴定。将F1代雄性大鼠分为WT（WildType：不含有Kir6．2E23K多态性）组，E23K（含有Kir6．2E23K多态性）组，WT—DCM（wildType—Dilated Cardiomyopathy）组和E23K—DCM（E23K—Dilated Cardiomyopathy）组，每组10只。于8～12周时腹腔注射阿霉素构建扩张型心肌病（DCM）模型，对照组腹腔注射等量生理盐水。于模型构建完成后2周分别记录并分析4组大鼠心脏超声数据，并用天狼星红染色法检测其心肌胶原容积。结果成功构建携带人Kir6．2E23K多态性的载体α—MHC—KK并获得转基因大鼠。超声结果显示，经阿霉素诱导的大鼠（WT～DCM组和E23K—DCM组）与对照组（WT组和E23K组）相比心腔明显扩大，心功能显著降低，且E23K—DCM组大鼠较WT-DCM组大鼠心脏损伤更为明显（P〈0．05）；与WT—DCM组相比，E23K—DCM组大鼠心肌纤维化程度更为严重（P〈0．05）。结论在DCM中Kir6．2E23K多态性对大鼠心脏结构和功能均有显著影响。

Kir6.2基因E23K位点多态性与耐力训练后血糖、胰岛素和VO_2max改变的关系

目的:探讨Kir6.2基因E23K位点多态性与耐力训练所致的血糖、胰岛素和VO2max改变间的关系。方法:采用PCR-RFLP技术对214例美国各种族50至75岁男女受试者的Kir6.2位点E23K多态性进行基因型分析。受试者在专人监控下进行24周的耐力训练后,观察其E23K与血糖、胰岛素和VO2max之间的关系。结果:(1)三种基因型受试者的空腹血糖、胰岛素和VO2max的基础值无显著差异;(2)24周耐力训练后,三种基因型受试者的VO2max均显著升高(P<0.05),体重和体脂则显著下降(P<0.05),身高体重指数(BMI)和呼吸商(RER)则在男性各基因型中显著下降(P<0.05);(3)24周耐力训练后,三种基因型受试者的空腹胰岛素水平和曲线下面积(AUC)均显著下降(P<0.05),但训练并未引起空腹血糖及其AUC显著变化。(4)男性EK基因型RER显著低于EE和KK基因型,女性则表现为KK基因型显著高于EE基因型。结论:(1)无论E23K位点的基因型为EE、EK或KK,24周的耐力训练均可提高受试者的VO2max并降低体重、体脂、空腹胰岛素水平和AUC;(2)耐力训练对男性BMI和RER降低的影响更显著;(3)E23K多态性与RER的关系较VO2max和血糖水平更密切。

ATP敏感性钾通道与2型糖尿病

ATP敏感性钾通道(KATP)是调节葡萄糖代谢平衡的关键因子。KATP通道的遗传变异可改变β-细胞电活性、葡萄糖代谢平衡,增加2型糖尿病易感性,因此,编码该通道的基因可作为2型糖尿病的易感标记。K ir6.2的E23K多态性在高加索人群中与2型糖尿病易感性增加和肥胖相关。E23K多态性在高加索人群中较常见,提示其可能具有进化优势。