TMPRSS2-ERG融合基因在前列腺癌中的研究进展

在前列腺癌中,跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2,TMPRSS2)-E26转化特异性相关基因[E26 transformation-specific(ETS)-related gene,ERG]融合基因由雄激素调控基因TMPRSS2(染色体21q22.2)与ERG(染色体21q22.3)融合形成。TMPRSS2-ERG可导致ERG过表达,过表达的ERG在多种因素协同作用下可引起相关靶基因表达并激活下游信号通路,从而参与前列腺癌的发生、发展过程。TMPRSS2-ERG有望成为前列腺癌的有效治疗靶点。本文对TMPRSS2-ERG在前列腺癌中的作用机制及其在前列腺癌诊疗中的研究进展进行综述。

E26特异性转化变异体4在体外促进肝癌细胞对索拉非尼和顺铂耐药（英文）

目的研究E26特异性转化变异体4(ETV4)对肝细胞癌(HCC)顺铂和索拉非尼耐药的影响。方法顺铂耐药HCC细胞株SMMC-7721(对索拉非尼敏感)和HCC-LM3(对索拉非尼不敏感)经质粒转染诱导ETV4过表达或用siRNA干扰ETV4后,分别用DMSO、索拉非尼(5μmol/L)或顺铂(5μmol/L)刺激48h并收集总蛋白或总RNA。采用Westernblotting、流式细胞术、EdU增殖检测法检测处理后HCC细胞凋亡水平和增殖能力的变化。利用实时荧光定量PCR(q-PCR)技术检测11例HCC患者肿瘤组织及配对的癌旁组织中ETV4mRNA的表达水平。肝癌细胞株经干扰ETV4后,分别用DMSO、索拉非尼或顺铂刺激48h,利用q-RCR技术检测早期反应基因3(IER3)的mRNA表达水平。结果肝癌组织中ETV4mRNA的表达水平显著高于对应的癌旁组织。在两株肝癌细胞中过表达ETV4能显著减少索拉非尼或顺铂诱导的细胞凋亡,而干扰ETV4能显著增加索拉非尼或顺铂诱导的细胞凋亡,并显著抑制索拉非尼或顺铂刺激下的细胞增殖能力。此外,在索拉非尼或顺铂的刺激下ETV4能调节IER3的mRNA表达水平。结论ETV4过表达能促进HCC细胞对索拉非尼或顺铂产生耐药。

E26转化特异性同源因子EHF/ESE3在肿瘤中的研究进展

E26转化特异性同源因子[ETS(E26 transformation-specific)homologous factor,EHF]属于ETS家族转录因子。EHF广泛存在于细胞核内,能够单独或与其他效应分子形成转录复合物,增强或抑制下游靶基因的转录,参与细胞增殖、分化、凋亡、衰老等过程。EHF在前列腺癌、胰腺癌、食管癌及结肠癌中发挥抑癌作用,在口腔鳞癌、胃癌、卵巢癌、甲状腺癌、头颈部鳞癌及乳腺癌中发挥促癌作用。在免疫微环境方面,EHF可影响肿瘤细胞相关免疫因子的表达进而对微环境中调节性T细胞、骨髓来源的抑制细胞以及树突细胞产生调控作用。近年来,EHF在肿瘤以及免疫微环境中的病理生理功能越来越受到关注,本文就EHF结构、功能及作用机制的相关研究进展做一综述,以期为肿瘤治疗提供新的靶标及分子预测标记。

跨膜丝氨酸蛋白酶2-成红细胞特异性转化基因相关基因、成红细胞特异性转化基因变异体1及成红细胞特异性转化基因变异体4在前列腺癌中的表达及临床意义

目的分析跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)-成红细胞特异性转化基因相关基因(ERG)、TMPRSS2-成红细胞特异性转化基因变异体1(ETV1)、TMPRSS2-成红细胞特异性转化基因变异体4(ETV4)在前列腺癌中的表达及临床意义。方法2018年4月至2020年9月我院收治的82例前列腺癌患者,采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4表达。分析上述因子表达与前列腺癌临床病理特征的关系及诊断前列腺癌的价值。结果前列腺癌组织中TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4阳性表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05)。临床分期C+D、Gleason评分≥5分者TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4阳性表达率高于临床分期A+B、Gleason评分<5分(P<0.05)。RTMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4联合检测曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度分别为0.814、0.925、0.865,均高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4在前列腺癌患者中呈过度表达,通过联合检测上述因子对前列腺癌的诊断与鉴别诊断有良好的应用价值。

HAX-1通过调控MDM2/SMAD3通路对TGF-β1诱导的特发性肺间质纤维化的作用机制

目的探讨造血细胞特异性蛋白1相关蛋白X-1(HAX-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的特发性肺间质纤维化的作用及机制。方法将A549细胞分为对照组(无处理)、TGF-β1组(用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、NC si组(用阴性对照siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+pcDNA3.1组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用pcDNA3.1空质粒转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+DMSO组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,向细胞培养液中加入溶剂DMSO处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+SIS3组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,用终浓度为1μmol·L^(-1)溶于DMSO的SIS3处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)。相应处理结束后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Western blot检测HAX-1、鼠双微体基因2(MDM2)、SMAD3、p-SMAD3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)蛋白表达水平。结果TGF-β1诱导细胞后,细胞由鹅卵石形或多角形转变为梭形、纺锤形,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HAX-1、α-SMA和COL1A1蛋白表达升高(P<0.05)。干扰HAX-1可提高E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MDM2、p-SMAD3、α-SMA和COL1A1蛋白表达(P<0.05),并且细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形。MDM2过表达抵消HAX-1干扰对p-SMAD3、E-cadherin、α-SMA和COL1A1蛋白表达的影响(P<0.05)。SMAD3抑制剂SIS3处理后细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),α-SMA和COL1A1蛋白表达下降(P<0.05)。结论HAX-1在TGF-β1诱导的A549细胞中高表达,HAX-1敲低可通过MDM2/SMAD3通路抑制TGF-β1诱导的肺泡细胞纤维化过程。

红细胞转化特异性转录因子相关基因的生物信息学研究

目的利用生物信息学方法分析人红细胞转化特异性转录因子（ETS）相关基因（ERG）以及蛋白的结构，为进一步研究其功能和参与的调控机制提供理论依据。方法通过GenBank搜索ERG基因序列（NM_001136154）及蛋白序列（NP_001230357），采用生物信息学方法分析该基因在不同物种中的差异，分析该蛋白的亚细胞定位、二级结构、功能域以及相互作用蛋白。结果该基因编码一个长度为468个氨基酸的蛋白质，具有2个PNT和ETS两个功能域。ERG蛋白理论相对分子质量为53837．51，理论等电点为7．29。二级结构中α螺旋（H）占比12．35％，β折叠（E）占比3．50％，无规卷曲占比84．16％。ERG蛋白含有4个可能的N连接糖基化位点，11个潜在的酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点，5个豆蔻酰基化位点，7个蛋白激酶C（PKC）磷酸化位点以及1个酪氨酸激酶磷酸化位点。并进一步利用STRING分析了该蛋白的相互作用网络。结论利用生物信息学预测出的结构和功能信息，为ERG的相关研究提供一定的信息基础。

下调E26转化特异性转录因子的表达水平抑制胃癌细胞生长的研究

目的观察E26转化特异性同源因子（EHF）的表达对胃癌细胞生长的影响。方法通过Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测胃癌细胞BGC823、SGC7901与胃黏膜上皮细胞GES-1中EHF的蛋白和mRNA水平的表达。利用RNA干扰技术，将小干扰RNA（siRNA）si-EHF-979或对照小干扰RNAsi-NC转染到胃癌细胞BGC823和SGC7901中，将si-EHF-979转染组，没为实验组，si-NC转染组设为对照组，利用噻唑蓝（MTT）法检测胃癌细胞增殖。通过Transwell趋化实验检测EHF对胃癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。将转染si-EHF-979或si-NC的胃癌细胞BGC823接种于裸鼠的右腋窝皮下，建立下调EHF基因的胃癌细胞株的裸鼠移植瘤模型。结果与胃黏膜上皮细胞GES-1比较，人胃癌细胞株BGC823、SGC7901中EHF mRNA表达水平显著上调，差异有统计学意义（P=0．001）。EHF基因下调后胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著被抑制。裸鼠移植瘤模型显示，下调EHF的表达水平，显著抑制体内肿瘤的生长，差异有统计学意义（P=0．001）。结论EHF在胃癌细胞株中高表达，下调EHF的表达水平能够抑制胃癌细胞的生长。

乳癌组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达

目的:检测乳癌组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达。方法:收集人乳腺浸润性导管癌标本40例、癌周不典型增生组织40例及癌周正常乳腺组织40例,采用Westernblot法检测3种组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达情况。结果:3种组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达差异有统计学意义(FBCSG1=105.032,FETS-1=81.343,FMMP-2=112.570,P均<0.001),且乳癌组织中以上3种蛋白的表达均高于癌周不典型增生组织及癌周正常乳腺组织(P<0.05)。有淋巴结转移的乳癌组织中3者的表达均高于无淋巴结转移的乳癌组织(P<0.05)。乳癌组织中BCSG1的表达与ETS-1及MMP-2的表达呈正相关(r=0.664、0.810,P<0.05)。结论:BCSG1、MMP-2及ETS-1与乳癌的浸润转移密切相关。

堆型艾美耳球虫cSZ1基因在减毒沙门氏菌的表达及免疫保护效果研究

用PCR方法扩增堆型艾美耳球虫广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的阅读框架 (ORF) ,与质粒表达载体pYA3342连接后转化大肠杆菌E-coliX6 2 12 ,获得阳性重组质粒后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)X4 5 5 0。经IPTG诱导获得了cSZ1基因在减毒S typhimurium的高效表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 9 2 % ,重组蛋白分子量约为 19kDa。将重组减毒S typhimurium分别以 10 8或 10 9CFU 鸡经口免疫 4日龄岭南黄肉鸡 ,免疫后两周血清中可检测到抗cSZ1的特异性IgG ,3周时抗体水平达到峰值 ;2 5日龄时可在肠道检测到特异性IgA的分泌。免疫后 3周 ,试验鸡分别经口攻击感染 5 0 0个E acervulina孢子化卵囊 ,结果显示免疫组与非免疫组有相似的排卵囊曲线 ;计数攻虫感染后第 3 5～ 9 5天卵囊总产量 ,2个免疫组分别能降低 2 5 . 1%和 4 6 . 4 %的卵囊产生。

高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在宫颈癌中的研究进展

高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是宫颈病变发生、发展不可缺少的因素。而HPV E6/E7基因持续表达的蛋白质是导致宫颈病变恶性发展的关键[1]。现对转录产物HPV E6/E7mRNA的发病机制、宫颈癌筛查、治疗及预后中的应用进行综述。

卵巢癌浸润、转移相关细胞因子的研究进展

卵巢癌的浸润、转移主要与细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)的降解及肿瘤组织血管生成机制有关,与之关系密切的细胞因子有基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子、尿激酶型纤溶酶原激活剂、溶血磷脂酸、E26转化特异性因子-1、局灶黏附激酶、肝细胞生长因子、肿瘤转移相关因子1等。研究卵巢癌浸润、转移相关的细胞因子及其作用机制,选择合适的治疗靶点,有利于卵巢癌的治疗、预后和预防复发。

番茄红素ε-环化酶果实特异性RNAi载体的构建及对番茄的遗传转化

为了研究番茄LCYE基因对其果实中番茄红素含量的影响机制,培育高品质番茄品种,在Gen Bank中根据已知的LCYE(ID:544 129)扩增出337 bp的保守序列;根据KJ 561 284.1扩增出2 203 bp的果实特异性启动子E8;查找番茄LCYE的内含子,选择第三个长112 bp的Intron片段;利用同尾酶构建出载体p Ri E8-LCYE,与p CAMBIA1301连接构建出果实特异性RNAi表达载体p CRi E8-LCYE,测序表明载体构建正确。农杆菌介导,叶盘法转化番茄,PCR检测表明得到了转基因番茄植株。与同样条件下番茄LCYB基因干扰载体的遗传转化过程相比,表明:对LCYE基因的干扰使番茄子叶开始褐化时间提前,且褐化率更高,说明筛选培养时子叶的褐化与所干扰的基因也有关系。

苦参素对肿瘤源性内皮细胞生物学行为的作用及其分子机制

目的研究苦参素对肿瘤源性内皮细胞(Td-EC)增殖、迁移及成管能力的作用及其可能的分子机制。方法采用人肝癌HepG2细胞条件培养基将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)诱导形成Td-EC,CCK-8法检测浓度分别为0.375 mg/ml、0.75 mg/ml、1.5 mg/ml、3 mg/ml、6 mg/ml的苦参素作用Td-EC 24 h的细胞增殖抑制率,选择IC 50浓度(3.5 mg/ml)的苦参素作用Td-EC 24 h,细胞划痕实验检测Td-EC的迁移能力及体外血管形成实验检测Td-EC的管形成能力,qRT-PCR检测Ets-1 mRNA的表达变化。结果CCK-8结果显示,0.375 mg/ml、0.75 mg/ml、1.5 mg/ml、3 mg/ml、6 mg/ml苦参素作用Td-EC 24 h后,各组细胞增殖均受到抑制。经3.5 mg/ml苦参素作用后,Td-EC的迁移能力及管形成能力降低,Td-EC中的Ets-1 mRNA表达降低,与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论苦参素可抑制Td-EC的增殖、迁移及成管能力,其分子机制可能与抑制Ets-1 mRNA的表达有关。