个例安全性报告E2B规范的发展

ICH E2B目前已成为个例安全性报告(Individual Case Safety Report,ICSR)电子化传输的国际指南,被人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)国家和非ICH国家的官方和企业界广泛采用。本文介绍了E2B规范的背景及价值和近年来新发展,并结合我国目前不良反应监测系统的使用现状,讨论了在我国成为ICH成员国的背景下,实施E2B规范的现实意义。

实施E2B(R3)对我国药品安全相关机构信息系统建设影响的研究

目的探讨我国在药品安全监管领域实施E2B(R3)后,对未来相关机构开展药物警戒以及药品不良反应监测与评价等药品安全工作的信息系统建设产生的影响。方法分析E2B(R3)实施的过程和范围,探讨实施E2B(R3)对我国药品监管机构、医疗机构、相关企业在各自信息系统建设过程中可能产生的影响和挑战。结果与结论 E2B(R3)的实施是我国药品安全监管领域的重要举措,其实施对我国药品监管机构、医疗机构、相关企业的信息系统建设都产生了系列挑战,各相关机构需要在总体规划、系统建设、标准兼容等多个方面采取相应的应对措施。

我国上市后个例安全性报告实施E2B(R3)思路及探讨

目的介绍我国上市后个例安全性报告E2B(R3)实施思路。方法阐述E2B(R3)实施涵义和实施路径,探讨转化实施面临挑战及有关建议。结果与结论 E2B(R3)的实施有利于个例安全性报告信息的共享和交换,上市后个例安全性报告实施具有较大挑战,需结合我国药品不良反应监测发展水平逐步转化和实施。

ICH创始监管机构成员实施E2B(R3)指导原则现状概述

目的介绍欧盟、美国、日本等国家监管机构实施E2B(R3)指导原则的有关做法,为我国实施E2B(R3)提供参考。方法通过分析欧盟、美国、日本等国药品监管机构的不良反应数据库、指南发布情况以及报告递交方式,概述ICH创始监管机构成员国实施E2B(R3)的现状。结果与结论欧盟、美国、日本等国家积累了多年的实施经验,为我国E2B(R3)的实施提供了参考。

UBE2B在食管癌组织中的表达及其与上皮-间质转化和转移的关系

目的探讨泛素结合酶E2B(UBE2B)在食管癌中的表达及其与上皮-间质转化和转移的关系。方法利用生物信息分析癌症基因组图谱数据库中食管癌UBE2B mRNA表达水平及其对患者生存的影响。采用免疫组化法检测食管癌组织和正常组织中UBE2B蛋白的表达水平。将Eca-109细胞分别转染特异性靶向UBE2B的siRNA以敲减UBE2B的表达(si-UBE2B组)和非靶向对照siRNA(si-control组)。采用Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。采用Western blot法检测细胞UBE2B及上皮-间质转化标志蛋白[上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、Slug和Snail]表达水平。结果生物信息分析结果显示,与正常组织比较,食管癌组织中UBE2B mRNA表达水平较高(P<0.01)。生存分析结果显示UBE2B高表达组患者总体生存率明显低于UBE2B低表达组(P<0.01)。组织芯片免疫组化结果显示,食管癌组织中UBE2B蛋白阳性表达率为76.47%,高于正常组织的29.41%,差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell小室实验提示与si-control组比较,si-UBE2B组迁移细胞数和侵袭细胞数均明显降低(均P<0.01)。与si-control组比较,si-UBE2B组细胞上皮标志物E-cadherin蛋白明显升高,而间质标志物N-cadherin、Slug和Snail均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论UBE2B在食管癌中异常高表达,并且与不良预后有关。敲低UBE2B通过抑制食管癌细胞上皮-间质转化抑制细胞迁移、侵袭能力。

基于ICH E2B(R3)指南理解个例安全性报告数据质量

目的分析ICH E2B(R3)指南文件中涉及质量的内容,了解指南中关于个例安全性报告的数据质量的要求。方法通过梳理ICH E2B(R3)指南文件中数据元素与人类对事物的认知,从数据、信息、知识最后升华为智慧,整个循序递进的过程联系在一起进行分析论证,找出影响数据质量的因素与可视化维度。结果数据的质量体现在数据的完整性(数据维度)和数据的精准性(粒度),E2B(R3)指南文件中对数据关系和数据元素的要求有效保证了个例报告的质量,根据E2B(R3)指南进行相关设计可获取高质量的药物安全相关数据。结论上市许可申请人及持有人在设计安全性信息收集表时,需要根据ICH E2B(R3)实施指南从数据精确性与完整性的角度上保证数据质量,高质量的数据在安全性数据库中不断累积,从而发现潜在药品的安全性信号。

SLC35E基因家族在麻风皮损中的表达

目的:明确溶质转运体家族蛋白SLC35E在多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风皮损中的差异。方法:首先收集25例确诊为麻风感染患者的石蜡包埋皮损组织,其中多菌型麻风患者12例,少菌型13例,分析SLC35E1和SLC35E2B不同SNP位点的突变情况;同时收集12名健康对照者皮肤组织作为正常对照组,采用免疫组化染色法检测SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在上述皮损及正常对照组中的表达差异,免疫荧光染色法检测CD68、S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白在皮损组织中的共表达情况。结果:对25例麻风组织样本进行生物信息学分析,SLC35E1的SNP位点rs202071873在麻风患者中的突变率为0%,SLC35E2B的3个SNP位点rs12729295、rs117820608、rs2072923在麻风患者中的突变率分别为100%、40%,100%。免疫组化染色显示SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在麻风组织的真皮及表皮均有表达,其中CD68主要表达于麻风组织真皮,SLC35E1在真皮层的表达量与CD68基本一致,两者表达量基本呈正相关;S100在麻风患者表皮和真皮中的表达无显著差异,与SLC35E1、SLC35E2B表达量无明显相关性;与少菌型麻风相比,多菌型麻风患者SLC35E1在真皮层呈低表达(P=0.046);与健康对照组相比,多菌型麻风患者SLC35E2B在表皮层呈低表达(p=0.004);免疫荧光共染显示麻风组织皮损中CD68与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染均出现重叠结果,且与SLC35E1重叠荧光强度高于SLC35E2B;S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染未见重叠结果。结论:麻风患者皮损中可能存在SLC35E2B位点突变,SLC35E1的表达可预测多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风在真皮层感染差异,SLC35E1、SLC35E2B可能通过影响巨噬细胞功能干扰机体对麻风分枝杆菌的清除,进而影响麻风的发病。

SLC35E1和SLC35E2B蛋白在分枝杆菌感染性疾病皮损中的表达

目的观察溶质转运家族35E1(SLC35E1)和SLC35E2B蛋白在分枝杆菌感染患者皮损中的表达。方法收集2014—2018年南方医科大学皮肤病医院确诊为分枝杆菌感染患者的石蜡包埋皮损组织,其中多菌型麻风患者10例,非结核分枝杆菌感染9例,皮肤结核7例,硬红斑5例,同时收集10例健康人石蜡包埋皮损组织作为正常对照组。免疫组化染色分析SLC35E1、SLC35E2B在上述皮损及正常对照组中的表达差异。免疫荧光染色检测CD68、S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白在皮损组织中的共表达情况。结果正常对照组不表达SLC35E1、SLC35E2B,但麻风、非结核分枝杆菌感染、皮肤结核及硬红斑患者皮损真皮中二者的表达显著增高。免疫组化染色显示多菌型麻风组、非结核分枝杆菌组、皮肤结核组、硬红斑组皮损组织SLC35E1表达水平(平均光密度)分别为0.143±0.010、0.278±0.015、0.171±0.010、0.200±0.015,SLC35E2B为0.169±0.004、0.229±0.088、0.103±0.016、0.118±0.021,均较正常对照组(均为0)显著升高(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,麻风、非结核分枝杆菌感染、皮肤结核皮损SLC35E1、SLC35E2B与CD68表达重叠。结论SLC35E1、SLC35E2B在分枝杆菌感染性疾病皮损中表达显著增高。

斑块型银屑病患者外周血SLC35E2B基因的表达及其变异研究

目的通过检测斑块型银屑病患者外周血中SLC35E2B的表达情况,并利用数据库分析基因富集的功能和参与的通路,探讨SLC35E2B在银屑病发病机制中的作用。方法收集斑块型银屑病47例、正常对照14例的外周静脉血,提取样本基因组DNA,用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终SLC35E2B基因病理性突变位点,利用GO和KEGG pathway数据库分析基因富集的功能和参与的通路。结果对61例样本所得数据进行生物信息学分析得到致病性突变位点1个:SLC35E2Bc.833C>T(p.T278M),仅见于斑块型银屑病组,正常组未见;GO富集提示SLC35E2B生物学过程主要涉及调节IL-12家族细胞因子、IL-17家族细胞因子、调节对生物刺激的细胞应答、TNF的合成、调节Th1细胞相关的免疫应答以及抵抗病原微生物等多细胞生物过程;KEGG通路分析提示SLC35E2B基因主要与结核病、1型糖尿病、弓形虫病、哮喘、类风湿性关节炎等疾病相关。结论SLC35E2B可能参与银屑病发病的病理过程。

落新妇苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及机制

目的探究落新妇苷(AST)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响,以及可能的作用机制。方法将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(复方丹参片240 mg/kg)和AST低、高剂量组(30、90 mg/kg)以及AST高剂量+缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂组(AST 90 mg/kg+2-甲氧基雌二醇15 mg/kg),每组25只。除假手术组外,其他各组大鼠均建立MIRI模型,灌胃或腹腔注射相应药物或生理盐水,连续28 d。测定各组大鼠血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,测量心肌梗死体积比,观察心肌组织病理形态变化、心肌细胞凋亡率和心肌组织线粒体的超微结构,测定心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及HIF-1α、腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)、肌球蛋白样Bcl-2结合蛋白(Beclin1)的表达,并计算微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ与Ⅰ的比值(简称“LC3Ⅱ/Ⅰ”)。结果与模型组比较,阳性对照组和AST低、高剂量组大鼠的心肌组织无明显肿胀,心肌纤维排列整齐,心肌梗死体积比和c TnI、CK-MB、TNF-α、IL-6、MDA含量以及细胞凋亡率均显著降低(P<0.05),SOD活性和HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达量以及LC3Ⅱ/Ⅰ均显著升高(P<0.05)。HIF-1α抑制剂可显著削弱AST对MIRI模型大鼠上述指标的改善作用(P<0.05)。结论AST可以通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路来增强线粒体自噬,从而减轻大鼠MIRI。

银杏二萜内酯调控PI3K/Akt/Nrf2通路改善糖尿病脑病大鼠认知功能的机制研究

目的研究银杏二萜内酯(GDL)对糖尿病脑病(DE)大鼠认知功能的改善作用,并基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/核因子E2相关因子2(PI3K/Akt/Nrf2)通路探索其机制。方法采用高糖高脂饮食4周后腹腔注射35 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DE大鼠模型,设模型组、GDL(2.3 mg/kg)组、LY294002(PI3K抑制剂,3 mg/kg)组、GDL联合LY294002(2.3 mg/kg GDL加3 mg/kg LY294002)组,每组12只;另设对照组。1次/d腹腔注射给药连续14 d后,水迷宫实验检测大鼠认知功能,检测空腹血糖(FBG)和胰岛素(INS)水平,HE染色法观察海马神经元病理性改变,检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot法检测Akt、p-Akt、Nrf2、p-Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果与模型组相比,GDL组逃逸潜伏期缩短(P<0.05)、穿越平台次数增多(P<0.05),FBG和INS水平降低(均P<0.05),海马神经元病理性改变明显改善,SOD、GSH-Px活性升高(均P<0.05),MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低(均P<0.05),p-Akt、p-Nrf2、HO-1表达量及p-Akt/Akt、p-Nrf2/Nrf2比值升高(均P<0.05),p-NF-κB p65表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(均P<0.05)。LY294002明显逆转GDL对DE大鼠各检测指标的调控作用。结论GDL能够抑制DE大鼠海马组织氧化应激和炎症反应,减轻海马神经元损伤,改善认知功能,其机制可能与促进PI3K/Akt/Nrf2通路活化有关。

芒柄花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的探究芒柄花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芒柄花素低、中、高剂量组及维拉帕米组(阳性对照),除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,芒柄花素低、中、高剂量组分别灌胃10、20、40 mg/kg芒柄花素,维拉帕米组灌胃20 mg/kg维拉帕米。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清心肌损伤和炎症反应指标,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤,生化试剂盒检测氧化应激指标,Western印迹检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt、细胞内核因子E2相关因子(Nrf)2、p-Nrf2及血红素加氧酶(HO)-1的表达。结果与假手术比较,模型组磷酸肌酸激酶同工酶(CK-Mb)、肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白(cTn)I、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)均升高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物歧化酶(GSH-Px)、p-Akt/Akt、p-Nrf2/Nrf2、HO-1表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,维拉帕米组、芒柄花素中、高剂量组CK-Mb、Mb、cTnI、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA均降低,SOD、GSH-Px、p-AKT/AKT、p-Nrf2/Nrf2、HO-1表达均升高,差异有统计学意义(均P<0.05),而芒柄花素高剂量组与维拉帕米组上述指标的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论芒柄花素可保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,减轻炎症反应和氧化应激水平,可能与上调Akt/Nrf2/HO-1表达有关。

基于XML的外贸企业B2E电子商务与知识共享系统

通过将B2E电子商务理念与XML软件技术结合构建了外贸企业个性化协同工作的电子商务和知识共享系统。它超越了传统的Web门户网站的概念,建立了一个跨组织、跨部门,以外贸供应链结点为对象的交互工作平台。通过商业语义转换,以XML方式将业务系统形成的单证信息以及数据流提交给其他系统,构造了外贸企业与相关企业间的电子商务网关。

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

电针对继发性脊髓损伤后大鼠神经元自噬及相关蛋白轻链3Ⅱ和bcl-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白3表达的影响

目的观察电针治疗对大鼠继发性脊髓损伤(SCI)后神经元自噬及相关蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(甲泼尼龙治疗)及电针组(电针大椎、命门穴治疗)4组;除对照组外,其他3组均采用改良的Allen打击装置(50 g/cm)复制大鼠T10~11中度SCI模型。分别于SCI后6 h、1 d、7 d取损伤局部脊髓组织,经透射电子显微镜及Western印迹法,观察各组SCI后神经元自噬的病理变化及轻链(LC)3Ⅱ、bcl-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白(BNIP)3的表达。结果 1SCI后1 d脊髓组织中LC3Ⅱ、BNIP3表达明显升高(P<0.01);电针组和西药组SCI后脊髓组织中LC3Ⅱ、BNIP3的表达显著降低,与模型组差异显著(P<0.01);西药组与电针组差异不显著(P>0.05)。2在透射电镜观察下,对照组脊髓组织神经元细胞核膜完整,胞质中线粒体形态分布及数目正常,未发现自噬小体,溶酶体数目也未见增多;模型组脊髓组织可见线粒体肿胀明显、空泡化,溶酶体数量增多,细胞核形不规则,可发现自噬小体;西药组和电针组可见脊髓组织神经元细胞肿胀,线粒体也略肿胀,核形规则,核内染色质欠均匀,溶酶体数目未见明显增多。结论电针可降低SCI大鼠脊髓组织中LC3Ⅱ和BNIP3的表达,抑制细胞自噬,减缓脊髓损伤后的病理损害,其作用与甲泼尼龙相仿。

移动商务的发展及企业应用

本文介绍了随着移动技术的进步,客户移动应用模式目前所面临的基础性变迁。同时,对移动商务的建设现状和未来发展进行了探讨,并就企业客户市场对移动商务的潜在需求进行了分析。

腺病毒2型E1B55KD癌蛋白与hDaxx相互作用

目的 :研究腺病毒 (adenovirus ,Ad) 2型E1B 5 5KD癌蛋白 (Ad2E1B 5 5KD)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法 :利用共免疫沉淀反应研究Ad2 / 5E1B 5 5KD与hDaxx的结合反应 ,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用。结果 :酵母双杂交试验结果显示Ad2E1B 5 5KD通过C端 5 8个氨基酸 (aminoacid ,aa)与hDaxx结合并发生相互作用。共免疫沉淀反应和Westernblot结果证实Ad2 / 5E1B 5 5KD能在细胞内外与hDaxx直接结合。结论 :Ad2E1B 5 5KD与hDaxx结合并发生相互作用。

基于Web服务的B2E移动电子商务平台的设计与实现

随着电子商务技术的逐渐成熟,实施移动化成为企业考虑的重点和未来发展的趋势。在移动商务中使用Web服务,是目前较新较可行的方式,提出了一个.NET环境下的基于Web服务的B2E(企业对员工)移动商务平台的设计架构,此平台功能包括任务管理、个人事务管理、客户资料管理、订单查询等功能,采用三层结构进行设计,用户可以使用手机、PDA或桌上型浏览器,使用本平台提供的服务,以达到移动商务的目的。

用1/N展开法研究钨的能谱

用玻色子1/N展开技术研究了6个钨同位素的能谱和约化电磁跃迁概率B(E2).结果表明,展开式的高阶项十分重要,6个核的能级能量的理论值和实验值的方均根差,最大的是154keV,最小的只有11keV,符合得令人满意.而且理论能正确地符合实验方面跃迁概率的"回弯"现象.

5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制探讨

目的观察5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、5、10μmol/L)5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞,比较细胞增殖抑制率和Bcl-2腺病毒E1B19k Da相关蛋白3 mRNA(BNIP3 mRNA);将5μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞0、1、2、3、4、5、6 d,比较细胞增殖抑制率及BNIP3 mRNA。将5μmol/L 5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞4 d,并分别添加和不添加Caspase抑制剂Boc-D-FMK,测算细胞增殖抑制率。结果 5-氮杂脱氧胞苷对U87细胞增殖有抑制作用,且呈剂量及时间依赖性(P均<0.05),抑制作用最强的浓度为5μmol/L,最强的时间点为4 d;Boc-D-FMK并不能抑制由BNIP3所诱导的细胞凋亡,P>0.05。结论 5-氮杂脱氧胞苷可抑制U87细胞增殖,其机制可能与BNIP3 mRNA表达上调有关。