着丝粒蛋白F mRNA在肺腺癌细胞系、肺腺癌组织中的表达变化及相关调控信号通路分析

目的观察着丝粒蛋白F(CENPF) mRNA在肺腺癌细胞系中的表达变化,分析CENPF mRNA在肺腺癌组织中的表达变化并探讨其相关调控信号通路。方法①采用实时定量PCR法检测肺正常上皮细胞系BEAS-2B、肺腺癌细胞系(A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975) CENPF mRNA。②采用癌症基因组图谱(TCGA)的肺腺癌数据集分析CENPF mRNA表达与肺腺癌临床病理参数、预后的关系,Cox回归模型分析肺腺癌患者预后的影响因素。③采用基因集富集分析(GSEA)法分析受CENPF调控的肺腺癌相关信号通路。结果①A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975、BEAS-2B细胞CENPF mRNA相对表达量分别为4. 333±0. 271、3. 193±0. 188、2. 770±0. 091、5. 491±0. 249、1. 006±0. 071,A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975细胞CENPF mRNA相对表达量均高于BEAS-2B(P均<0. 05)。②肺腺癌、癌旁正常组织CENPF mRNA的相对表达量分别为9. 632±0. 059、6. 472±0. 093,二者比较,P <0. 001。CENPF mRNA表达与肺腺癌患者的性别、年龄、T分期、N分期及TNM分期相关(P均<0. 05)。生存分析结果显示,与CENPF mRNA低表达患者比较,CENPF mRNA高表达的肺腺癌患者的预后差(P=0. 001)。CENPF mRNA表达、临床TNM分期(HR分别为1. 667,1. 414; P均<0. 01)是影响肺腺癌患者预后的因素。③与CENPF mRNA高表达有关的肺腺癌调控信号通路有G2M检查点(P <0. 001,FDR <0. 001)、有丝分裂纺锤体(P <0. 001,FDR <0. 001)、E2F靶基因(P <0. 001,FDR <0. 001)、MYC靶基因(P <0. 001,FDR=0. 001)、m TOR信号通路(P=0. 002,FDR=0. 005)、精子形成(P=0. 002,FDR=0. 009)、未折叠蛋白反应(P=0. 002,FDR=0. 020)及PI3K/Akt/m TOR信号通路(P=0. 015,FDR=0. 117)等。结论肺腺癌组织及细胞系中存在CENPF高表达,CENPF高表达与肺腺癌患者的恶性病理特征及不良预后密切相关。CENPF mRNA高表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素。CENPF可能通过调节G2M检查点、有丝分裂纺锤体、E2F靶基因、MYC靶基因、m TOR信号通路、精子形成、未折叠蛋白反应及PI3K/Akt/m TOR信号通路在肺腺癌的发生、发展中起重要作用。

E2F-1启动子调控下肿瘤靶向性作用的研究

目的研究携带组织特异性E2F-1启动子的重组腺病毒载体的肿瘤细胞靶向性作用。方法利用AdEasy-1系统,构建含有E2F-1启动子的重组腺病毒并对重组病毒中E2F-1启动子基因进行PCR及测序鉴定。将分别携带E2F-1启动子和CMV启动子并且可以表达绿色荧光蛋白报告基因GFP基因的重组腺病毒分别转染LS174T和H292细胞,观察GFP基因表达情况;以携带肿瘤杀伤基因vpr基因的靶向性重组腺病毒rvAdE2F-1/vpr分别转染人二倍体细胞L-02、H292和肿瘤细胞SMMC-7721、LS174T,MTT法检测rvAdE2F-1/vpr对不同细胞的抑制增殖的作用;用蛋白免疫印迹的方法检测肿瘤细胞和二倍体细胞中靶蛋白E2F蛋白的表达。结果在相同的培养条件下,E2F-1启动子可使下游的GFP基因在肿瘤细胞LS174T中大量表达而在二倍体细胞H292中微量表达,CMV启动子下游的GFP基因表达量则无明显差异;且在LS174T细胞中两种启动子转录活性相似(P>0·05);E2F-1启动子调控下vpr基因的表达可以选择性的抑制肿瘤细胞增殖而对二倍体细胞无抑制作用;E2F-1蛋白在肿瘤组织中高表达而在正常组织中的表达不能用WesternBlot检测到。结论以E2F-1为启动子的重组腺病毒载体具有肿瘤细胞靶向性,并且有足够的启动效率调控杀伤基因作用于肿瘤细胞,因此是一个具有应用价值的靶向治疗体系。