口腔鳞状细胞癌E2F转录因子1的表达与临床的意义

目的:探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达和临床意义,并阐明其在细胞凋亡和周期中的作用。方法:基于R语言和癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库分析OSCC中E2F1的表达和临床病理的相关性,通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)发现E2F1参与的主要生物学过程。蛋白质印迹法(Western blotting)和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测E2F1在OSCC患者组织中的表达。通过细胞转染升高和敲低SCC15细胞系中E2F1的表达后,利用流式细胞术检测E2F1表达的改变对SCC15细胞凋亡和周期的影响。结果:E2F1在OSCC相关TCGA数据集中呈高表达,与T分期(T2或T4 vs T1)、组织学分级(G2或G3 vs G1)、临床分期(Ⅲ期vsⅠ期)、年龄(中年人vs青年人)和性别(男vs女)相关(P<0.05),多富集于细胞周期或核苷酸切除修复等基因组[P<0.05,错误发现率(false discovery rate,FDR)<0.25]。在37例OSCC患者组织中,E2F1的mRNA和蛋白均表达上调(P<0.001),表达上调的E2F1可降低SCC15细胞的凋亡率(P<0.05),以及在细胞周期中降低G1期的比率(P<0.01),并升高S期的比率(P<0.001)。结论:E2F1在OSCC中呈高表达,且可抑制细胞凋亡并促进细胞周期中G1/S期的转换。

E2F转录因子家族在脂肪生成中的调控作用

E2F转录因子(E2F transcription factor,E2Fs)是视网膜母细胞瘤蛋白(Retinoblastoma protein,p Rb,RB或RB1)家族的主要靶蛋白.作为关键的转录因子家族成员,E2Fs在调控下游基因的转录、DNA合成和细胞周期中起到至关重要的作用.近年来,关于脂肪生成的研究显示,E2F家族的多个成员参与脂肪生成调控.综述了E2Fs在脂肪生成中的调控作用,主要包括E2Fs家族成员的结构特征及在脂肪生成中的作用机制.研究发现,E2F-1与E2F-3在哺乳动物中具有促进脂肪分化的功能,E2F-2可能参与牛前脂肪细胞分化过程,具体功能尚不清楚,而E2F-4,E2F-5是脂肪生成的抑制因子,在哺乳动物中起抑制脂肪生成作用,E2F-6,E2F-7,E2F-8在脂肪生成调控中的作用尚不明确.针对E2Fs在脂肪增殖和分化中的调控作用进行综述,探讨E2Fs作为肥胖靶点的治疗策略,为后续预防和治疗肥胖及相关疾病提供理论依据.

E2F转录因子家族在宫颈癌中的表达及其与临床预后的关系

目的 研究E2F家族在宫颈癌中的表达、预后价值以及与免疫浸润之间的关系。方法 采用Oncomine数据库分析E2F转录因子家族在不同类型癌症中的表达差异。采用GEPIA 2数据库分析E2F转录因子家族在宫颈癌组织与正常组织中的表达及不同临床分期间的差异。采用Kaplan-Meier plotter数据库分析E2F转录因子家族在宫颈癌中的预后价值。使用cBioPortal数据库进行E2F转录因子家族的共表达基因和遗传学突变分析。采用WebGestalt数据库对E2F家族相关基因进行功能及通路的富集分析。采用TIMER 2.0数据库分析E2F转录因子家族与宫颈癌中免疫细胞浸润的相关性。结果 宫颈癌中E2F1、E2F2、E2F3、E2F7、E2F8的表达均较正常宫颈组织高,但与临床分期无明显相关性。预后分析显示,E2F1高表达和E2F3低表达与患者更长的总生存期(overall survival,OS)和无复发生存期(recurrence free survival,RFS)明显相关。基因变异分析显示,E2F1基因变异率为5%,为E2F家族中最高。计算宫颈癌E2F家族成员之间的相关性结果表明,E2F2与E2F7、E2F8的表达,E2F3与E2F5的表达,E2F7与E2F8的表达均呈正相关;E2F2与E2F5的表达呈负相关。GO分析显示,E2F基因家族的相关功能主要指向生物调节和能量代谢;KEGG分析显示,E2F基因家族主要与细胞分裂、衰老及细胞周期密切相关。TIMER2.0数据库分析显示,部分E2F家族成员的表达水平与CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞浸润呈正相关,与巨噬细胞浸润呈负相关。结论 E2F转录因子家族在宫颈癌中存在表达失调,家族成员E2F1,2,3,7,8是未来宫颈癌精准治疗的潜在靶点,而E2F1和E2F3可能成为评价宫颈癌预后新的生物标志物。

卵巢癌中E2F转录因子调控乳腺癌易感基因的研究进展

卵巢癌是恶性程度较高的肿瘤之一,大多数卵巢癌患者在被确诊时已是卵巢癌晚期。靶向乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene,BRCA)突变的卵巢癌治疗药物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂给卵巢癌患者的治疗带来福音,但仍存在非BRCA突变或PARP抑制剂治疗效果不佳的病例,寻找新的治疗方式是目前临床上亟须解决的问题。E2F转录因子的表达水平与卵巢癌患者的癌症分期及生存率密切相关,BRCA受E2F转录因子调控,这使其有望成为卵巢癌的治疗靶点。本文对卵巢癌中E2F转录因子对BRCA调控的研究进展作一综述。

miR-372靶向E2F转录因子5抑制宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-372(miR-372)对宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞恶性生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈鳞状细胞癌组织及其癌旁组织中miR-372和E2F转录因子5(E2F5)表达水平,构建miR-372过表达和低表达SiHa细胞系(miR-372、anti-miR-372),采用MTT法、流式细胞术、Transwell法及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况及其相关蛋白水平。在线预测miR-372与E2F5靶向关系并进行双色荧光素酶实验验证,在miR-372过表达SiHa细胞系上调E2F5,观察细胞增殖、凋亡和侵袭情况。结果:癌组织中miR-372表达低于其癌旁组织(P<0.05),而E2F5表达高于其癌旁组织(P<0.05)。miR-372过表达抑制细胞增殖、侵袭和核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin A1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)表达(P<0.05);上调细胞凋亡和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤2蛋白/Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2/Bax)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达(P<0.05)。miR-372可靶向抑制E2F5表达,E2F5过表达可缓解miR-372对SiHa细胞作用效果。结论:miR-372过表达可抑制SiHa细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡,可能与靶向作用抑制E2F5表达有关。

E2F转录因子7在甲状腺乳头状癌中的表达及生物学作用

目的探讨E2F转录因子7(E2F7)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的作用及分子机制。方法生物信息学分析E2F7与PTC的关系;免疫组织化学方法检测PTC及癌旁组织E2F7的表达;Western blot(WB)检测人甲状腺癌细胞系K1、TPC-1和BCPAP细胞以及正常人甲状腺Nthyori 3-1细胞系E2F7表达水平;以生长曲线、克隆形成实验和划痕实验检测沉默E2F7对K1细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测沉默E2F7对K1细胞周期和凋亡的影响;qRT-PCR检测其对周期蛋白cyclin D1、cyclin E1、EIF4A3及周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)基因转录的影响,以WB检测E2F7对周期蛋白和通路蛋白Akt、pAkt的影响。结果E2F7在PTC组织中表达水平较癌旁组织高表达,其中临床分期及淋巴结转移与E2F7表达水平有统计学意义(P<0.05);K1细胞E2F7的表达明显高于正常甲状腺细胞;E2F7沉默组K1细胞蛋白表达水平相比对照组明显降低(P<0.01);增殖、迁移能力较对照组受到抑制(P<0.05);E2F7沉默组周期蛋白转录和翻译水平较对照组降低;通路关键蛋白Akt和pAkt表达水平较对照组下调;E2F7沉默组细胞周期较对照组细胞周期进展出现阻滞,凋亡率升高。结论E2F7高表达与PTC发生、发展有关;E2F7基因可能通过Akt信号通路促进K1细胞增殖、抑制凋亡。

人乳头瘤病毒感染与宫颈病变患者C反应蛋白、辅助性T17细胞、前列腺素E2及E2F转录因子-1的关系研究

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈病变患者C反应蛋白(CRP)、辅助性T(Th)17细胞、前列腺素E_(2)(PGE_(2))及E2F转录因子-1(E2F-1)的关系。方法选取2017年1月至2020年1月承德市第三医院收治的120例HPV感染宫颈病变患者设为观察组,根据HPV感染类型分为低危型组(n=55)和高危型组(n=65)。选择同期60例无HPV感染的宫颈病变患者设为对照组。比较各组CRP、Th17细胞及PGE_(2)水平,分析HPV感染与宫颈病变患者CRP、Th17细胞、PGE_(2)及E2F-1的相关性。结果低危型组、高危型组CRP、Th17细胞、PGE_(2)水平及E2F-1蛋白阳性表达率均高于对照组,且高危型组均高于低危型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson检验结果显示,HPV感染与宫颈病变患者CRP、Th17细胞、PGE_(2)水平及E2F-1蛋白阳性表达率呈正相关(P<0.05)。结论HPV感染与宫颈病变患者CRP、Th17细胞、PGE_(2)水平及E2F-1蛋白阳性表达密切相关,随着疾病的进一步深入变化,CRP、Th17细胞、PGE_(2)水平及E2F-1蛋白阳性表达率不断升高,或与患者免疫调节失衡有关。

微小RNA-20b-5p/E2F转录因子5介导转化生长因子-β1调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化的作用机制研究

目的探讨前列腺癌细胞中微小RNA(miR)-20b-5p/E2F转录因子5(E2F5)介导转化生长因子-β1(TGF-β1)调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT),从而促进前列腺癌发生发展的作用机制。方法分析数据库,预测miR-20b-5p的靶基因,双荧光报告基因检测miR-20b-5p对E2F5 mRNA的3’UTR的靶向抑制。E2F5的野生型(WT)及突变型(Mut)的3’端非编码区(3’UTR)分别转染PC3和DU145细胞后,再做TGF-β处理,双荧光报告基因检测E2F5是否是TGF-β和miR-20b-5p的共同靶点。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。PC3和DU145细胞分别转染miR-20b-5p抑制剂和模拟物及其对照RNA后,Western blot检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。分别取两组前列腺增生和前列腺癌组织进行mRNA基因测序,比较两者E2F5的表达。PC3细胞敲低miR-20b-5p的同时也敲低E2F5,Western blot检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达。组间比较应用单因素方差分析。结果预测到的靶基因共有207个,并最终确定E2F5为我们的研究对象,双荧光报告基因检测发现与对照组比较miR-20b-5p对E2F5 mRNA的3’UTR的靶向抑制作用(PC3为103.00±2.00比35.67±2.51,F=1316.258,P<0.01;DU145为101.00±2.00比69.33±1.53,F=475,P<0.01)。与对照组比较TGF-β对E2F5 mRNA的3’UTR的靶向增强作用(PC3为98.67±2.08比155.67±2.08,F=1124.654,P<0.01;DU145为97.33±0.58比143.00±2.00,F=1443.769,P<0.01),E2F5是TGF-β和miR-20b-5p的共同靶点。PC3和DU145细胞分别转染miR-20b-5p抑制剂和模拟物及其对照RNA后,miR-20b-5p抑制物组E2F5表达高于对照组(PC3组为1.23±0.16比0.83±0.02,P<0.01;DU145组为0.49±0.2比0.31±0.02,P<0.01),相反,miR-20b-5p抑制物组E2F5表达低于对照组(PC3组为0.63±0.02比0.82±0.02,P<0.01。DU145组为0.14±0.02比0.30±0.02,P<0.01),说明miR-20b-5p对E2F5的靶向负调节作用。mRNA基因测序发现E2F5在前列腺癌中表达显著高于对照组,并且分析TCGA数据库显示E2F5在前列腺癌组织中高表达。敲低miR-20b-5p后E-cadherin的表达低于对照组,而同时敲低E2F5后又能够扭转这个趋势[分别为0.43±0.02和0.98±0.02,与对照组(0.95±0.02)比较,F=817.515,P<0.01],与之相反,敲低miR-20b-5p,Vimentin的表达高于对照组,而同时敲低E2F5后又能够扭转这个趋势[分别为0.75±0.02和0.18±0.02,与对照组(0.15±0.02)比较,F=832.089,P<0.01],说明E2F5通过靶向调控E2F5从而调控EMT表型蛋白E-cadherin及Vimentin表达,导致前列腺癌的发生发展。结论miR-20b-5p/E2F5介导TGF-β1调节前列腺癌细胞EMT的作用从而导致前列腺癌的进展。

E2F转录因子1抑制神经母细胞瘤细胞衰老的作用及其机制

目的探讨E2F转录因子1(E2F1)对神经母细胞瘤(NB)细胞衰老的调控作用及机制。方法人神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE (2) (CRL-2271)购自美国典型培养物保藏中心, 并将NB细胞株分为空载体(Mock)对照组、E2F1过表达组、随机干扰(sh-Scb)组、E2F1短发卡RNA (sh-E2F1)干扰组, 筛选稳定亚克隆细胞株;采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测NB细胞中E2F1表达变化;通过Kaplan-Meier Plot、ChEA3等数据库分析, 寻找NB细胞衰老相关靶基因;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色12 h后, 检测β-半乳糖苷酶活性, 计算衰老细胞阳性率;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)掺入细胞2 h后, 观测细胞增殖活性;软琼脂三维培养3周, 观测细胞克隆形成能力;基质胶侵袭24 h, 测细胞侵袭活性;组间比较采用t检验。结果过表达E2F1组的E2F1转录水平高于Mock组(3.24±0.12比1.00±0.04, t=32.06, P<0.05), 且E2F1蛋白水平也高于Mock组;而E2F1敲低组中E2F1转录本水平低于sh-Scb组(0.67±0.04比1.00±0.03, t=14.24, P<0.05;0.67±0.08比1.00±0.03, t=13.80, P<0.05), 蛋白水平也低于sh-Scb组。E2F1过表达组胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)的转录本和蛋白水平高于Mock组(2.17±0.15比1.02±0.00, t=13.00, P<0.05)且E2F1过表达组聚合酶γ基因(POLG)转录本和蛋白水平高于Mock组(2.38±0.11比1.02±0.01, t=15.20, P<0.05)。衰老细胞阳性率下降(6.66±1.52比23.33±2.51, t=9.80, P<0.05), 细胞增殖速率增高(51.66±1.52比23.00±4.00, t=11.60, P<0.05), 克隆形成数增加(334.66±6.11比157.66±4.16, t=41.46, P<0.05)且侵袭细胞数增加(318.33±8.02比126.33±5.50, t=34.18, P<0.05)。相反, E2F1干扰组中IGFBP2转录水平低于随机干扰组(0.38±0.06比1.02±0.01, t=17.05, P<0.05;0.33±0.05比1.02±0.01, t=19.76, P<0.05), IGFBP2蛋白水平也低于随机干扰组。POLG转录水平降低于随机干扰组(0.50±0.02比1.02±0.01, t=30.35, P<0.05;0.35±0.05比1.02±0.01, t=20.72, P<0.05), 蛋白水平也低于随机干扰组。衰老细胞阳性率增加(49.66±3.05比18.66±1.52, t=15.72, P<0.05;40.33±3.05比18.66±1.52, t=10.99, P<0.05), 肿瘤细胞增殖速率减慢(3.33±2.31比19.33±1.52, t=10.01, P<0.05;3.33±1.52比19.33±1.52, t=12.83, P<0.05), 克隆形成数减少(52.00±6.08比127.00±3.60, t=18.37, P<0.05;51.33±5.03比127.00±3.60, t=51.33, P<0.05)且侵袭细胞数减少(44.33±2.08比109.66±7.37, t=14.77, P<0.05;52.00±5.56比109.66±7.37, t=10.81, P<0.05)。结论转录因子E2F1能调控细胞衰老相关基因IGFBP2和POLG表达, 抑制NB细胞衰老。

膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈病变组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6和E2F转录因子1蛋白表达的关系

目的 分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈病变组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)和E2F转录因子1(E2F-1)蛋白表达的关系。方法 选取2018年1月—2020年12月杭州市第一人民医院收治的慢性宫颈炎患者134例,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ/Ⅱ级患者131例,CINⅢ级患者129例,宫颈癌患者118例,分别记为A组、B组、C组、D组,4组均取病灶组织,采用免疫组化二步法检测CDK6、E2F-1蛋白表达,比较4组高危型HPV感染率、病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达情况及阳性率;比较D组不同临床病理特征患者癌组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率;分析各组高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达的关系。结果 4组高危型HPV感染率,病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。D组中Ⅲ+Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移的患者病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率,高危型HPV感染率均高于Ⅰ+Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的患者(均P<0.05)。在4组中,高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达均呈正相关(r=0.612、0.703、0.747、0.846,均P<0.05;r=0.549、0.697、0.721、0.835,均P<0.05)。结论 宫颈病变高危型HPV感染率,病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率高,Ⅲ+Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移的患者病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率高,高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达均呈正相关。

老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达变化及与预后的关系

目的 探讨N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)、E2F8转录因子8(E2F8)蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取46例老年乳腺癌患者,术中取癌组织和癌旁组织,用免疫组化染色法检测组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达。随访患者并记录随访期间肿瘤复发、转移及死亡时间。用Spearman秩相关分析乳腺癌组织YTHDF1与E2F8蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析YTHDF1、E2F8蛋白表达与患者无进展生存预后的关系;Cox回归分析老年乳腺癌患者无进展生存预后的影响因素。结果 乳腺癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05),二者蛋白表达呈正相关(r=0.706,P<0.05)。TNM分期Ⅱ期、肿瘤最大径>2 cm、合并淋巴结转移老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于TNM分期Ⅰ期、肿瘤最大径≤2 cm、无淋巴结转移的癌组织(P均<0.05)。32例患者发生肿瘤进展,YTHDF1、E2F8蛋白表达阳性患者5年无进展生存率低于其蛋白表达阴性患者(P均<0.05)。TNM分期Ⅱ期、合并淋巴结转移、YTHDF1蛋白阳性表达、E2F8蛋白阳性表达是老年乳腺癌患者无进展生存预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论 老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白高表达,且与老年乳腺癌患者肿瘤TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移有关,是患者无进展生存预后的独立危险因素。

结直肠癌组织转录因子E2F2、黏蛋白样受体2水平与病人临床病理特征的关系及对淋巴结转移的诊断价值

目的分析转录因子E2F2和黏蛋白样受体2(EMR2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与病人临床病理特征的关系,评估二者对癌转移的诊断价值。方法2018年1月~2020年12月间住院手术的CRC病人术中切除CRC组织标本及癌旁组织标本各88例;采用实时荧光定量PCR法检测所有组织E2F2 mRNA、EMR2 mRNA表达水平;用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化氢酶连结法(SP法)检测组织中E2F2蛋白、EMR2蛋白表达,分析其与临床病理特征的关系;ROC曲线分析E2F2 mRNA、EMR2 mRNA表达水平对CRC病人淋巴结转移的诊断价值。结果CRC组织中E2F2蛋白、EMR2蛋白阳性率(76.50%、65.50%)高于癌旁组织(20.45%、26.14%),差异有统计学意义(P<0.05);CRC组织E2F2蛋白、EMR2蛋白表达与病人TNM分期、淋巴结转移及浸润深度相关(P<0.05);与无淋巴结转移病人比较,有淋巴结转移病人CRC组织中E2F2mRNA、EMR2mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);绘制ROC曲线发现,CRC组织中E2F2mRNA、EMR2mRNA表达水平单独及联合诊断淋巴结转移的AUC分别为0.782、0.844、0.877,E2F2mRNA联合EMR2mRNA诊断淋巴结转移的AUC高于二者分别单独诊断(P<0.05)。结论E2F2、EMR2与CRC病人TNM分期、淋巴结转移及浸润深度相关,二者联合对淋巴结转移具有一定诊断价值。

新生小鼠胰岛增殖及口袋蛋白家族、E2F转录因子表达变化

目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）、视网膜母细胞瘤样蛋白1（p107）、视网膜母细胞瘤样蛋白2（p130）及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 （1）小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周（P＜0.05）;单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍（P＜0.01）;而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍（P＜0.01）,8周与3周无明显差异.（2）1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少（81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P＜0.05）,而G2/M期显著增多（13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P＜0.05）,细胞增殖指数明显增加（P＜0.05）.（3）8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周（P＜0.01）;3周和8周时p107 mRNA显著低于1周（P＜0.05）,而p130 mRNA显著高于1周（P＜0.05）,E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周（均P＜0.01）;8周时E2F-3 mRNA显著低于1周（P＜0.05）;而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.（4）8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低（均P＜0.05）.结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控.

E2F转录因子家族的研究进展

肿瘤的发生发展常与细胞周期的调节失控以及RB抑癌基因的突变密切相关。E2F转录因子家族是参与细胞周期及细胞凋亡重要的调节因子。近年来,越来越多的研究表明,肿瘤的发生发展常伴有E2F转录因子家族的表达异常,其与肿瘤细胞的发生发展及细胞凋亡之间有着紧密的联系。现作者就E2F转录因子家族的研究进展作一综述。

转录因子E2F2在恶性肿瘤生物学功能中研究进展

细胞周期相关转录因子E2F2(transcription factor E2F2)是细胞周期相关转录因子E2F家族成员之一,参与细胞周期、增殖、凋亡、迁移及侵袭等过程,近几年大量的研究发现E2F2在肿瘤细胞中过表达。因此,本文对E2F2在头颈部、消化、呼吸、泌尿生殖、骨肌系统以及乳腺等恶性肿瘤中的作用以及分子机制研究进行综述,为进一步研究E2F2的生物学功能和治疗靶点的确立提供参考。

E2F转录因子7低频错义突变与结直肠癌风险的相关性研究

目的探讨E2F转录因子家族基因错义突变与结直肠癌发病风险的相关性。方法寻找E2F转录因子家族基因的错义突变,鉴定汉族人群等位基因频率>0.01的2个突变位点(E2F2的rs2075995和E2F7的rs3829295)。对1 055例结直肠癌(CRC)患者和1 936例健康对照者运用Taq Man基因分型检测,使用Logistic回归评估这2种SNPs与CRC风险的相关性。结果 E2F7的rs3829295与CRC风险显著相关。与TT基因型携带者相比,CT和CT+CC基因型携带者有较低的结直肠癌发生风险(OR分别为0.61(95%CI:0.44~0.85,P=0.003)、0.61(95%CI:0.44~0.84,P=0.003)。根据性别和年龄进行分层分析发现,rs3829295突变者中结直肠癌发生风险男性高于(OR=0.56,95%CI:0.38~0.83,P=0.004)女性(OR=0.73,95%CI:0.43~1.22,P=0.232)。结论 E2F7的错义突变与CRC风险显著相关,E2F7在结直肠癌发病中可能发挥重要作用。

基于公共数据库分析头颈部鳞癌中转录因子E2F家族表达及预后意义

目的通过生物信息学方法分析转录因子E2F家族(E2Fs)在头颈部鳞癌(HNSCC)中转录水平(mRNA)的表达,探究其在HNSCC发病中的作用。方法利用TCGA、GEPIA2和UALCAN公共数据库分析E2Fs mRNA在HNSCC中的表达及其与患者总生存期的关系,利用cBioPortal公共数据库筛选E2Fs的共表达基因构建共表达网络,通过R软件分析E2Fs及其共表达基因生物学功能。结果HNSCC中8个E2Fs的表达量显著高于癌旁组织,其中E2F4表达量最高,其次是E2F1、E2F6和E2F7。Spearman分析显示E2Fs成员间呈正相关性。基因本体论分析显示,E2Fs及其93个共表达基因主要通过DNA复制、细胞周期和范可尼贫血等信号通路,参与DNA复制和染色体分离等生物学过程。Cox单因素和多因素分析显示,E2F4(HR=1.502,95%CI:1.141~1.977)和E2F8(HR=0.698,95%CI:0.531~0.917)的高表达与HNSCC患者总生存期有关(P<0.05)。预后列线图显示E2F4高表达患者1年生存概率最低,其次是E2F8低表达患者。结论E2F家族在HNSCC中显著高表达,且E2F4和E2F8的表达水平与患者预后有关,E2Fs及其靶基因主要通过DNA复制、细胞周期和范可尼贫血等信号通路调控细胞染色体分离和DNA复制等生物学过程参与HNSCC的发生发展。

微小RNA-373靶定E2F转录因子5降低胶质瘤细胞恶性表型

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-373对胶质瘤细胞恶性表型的影响，探讨miR-373调控胶质瘤发生发展的分子机制。方法利用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测胶质瘤组织及正常脑组织中miR-373的表达水平；利用噻唑蓝（MTT）比色法及Transwell侵袭实验检测miR-373对胶质瘤细胞U251活性及侵袭能力的影响；通过生物信息学方法，筛选miR-373的靶基因，利用荧光报告载体实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-373对靶基因的直接调控作用。结果将正常脑组织和人正常星形细胞株中miR-373的表达水平标化为1，胶质瘤组织和U251、U87、A172、U118细胞中miR-373的相对表达水平分别为0.36±0.14、0.21±0.04、0.32±0.05、0.35±0.04、0.56±0.12，差异有统计学意义（t＝－7.862，P＝0.006；t＝－9.211，P＝0.004；t＝－8.090，P＝0.005；t＝－7.953，P＝0.006；t＝－6.254，P＝0.007）。miR-373转染U251细胞48 h后，细胞活性和侵袭能力与对照组比较显著降低[活性：0.25±0.03比0.63±0.08；穿膜细胞数：（41.5±5.7）个比（118.5±9.8）个；t＝－12.561，P＝0.002；t＝－10.792，P＝0.003]。过表达miR-373后，含有E2F转录因子5的3’端非编码区域（E2F5 3’UTR）的荧光报告载体的细胞组荧光值为1.49±0.21，对照组的荧光值为2.23±0.32，差异有统计学意义（t＝－9.804，P＝0.004）。结论miR-373通过靶向抑制E2F5表达降低胶质瘤细胞的恶性生物学活性。