膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

口腔鳞状细胞癌E2F转录因子1的表达与临床的意义

目的:探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达和临床意义,并阐明其在细胞凋亡和周期中的作用。方法:基于R语言和癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库分析OSCC中E2F1的表达和临床病理的相关性,通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)发现E2F1参与的主要生物学过程。蛋白质印迹法(Western blotting)和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测E2F1在OSCC患者组织中的表达。通过细胞转染升高和敲低SCC15细胞系中E2F1的表达后,利用流式细胞术检测E2F1表达的改变对SCC15细胞凋亡和周期的影响。结果:E2F1在OSCC相关TCGA数据集中呈高表达,与T分期(T2或T4 vs T1)、组织学分级(G2或G3 vs G1)、临床分期(Ⅲ期vsⅠ期)、年龄(中年人vs青年人)和性别(男vs女)相关(P<0.05),多富集于细胞周期或核苷酸切除修复等基因组[P<0.05,错误发现率(false discovery rate,FDR)<0.25]。在37例OSCC患者组织中,E2F1的mRNA和蛋白均表达上调(P<0.001),表达上调的E2F1可降低SCC15细胞的凋亡率(P<0.05),以及在细胞周期中降低G1期的比率(P<0.01),并升高S期的比率(P<0.001)。结论:E2F1在OSCC中呈高表达,且可抑制细胞凋亡并促进细胞周期中G1/S期的转换。

E2F转录因子4在肿瘤中的研究进展

E2F转录因子4(E2F4)是一种转录抑制因子,可通过调控其靶基因影响细胞周期和细胞增殖、分化等过程。过去普遍认为E2F4是肿瘤抑制因子,但近年来研究表明,E2F4可促进多种肿瘤的发生、发展和转移。本文主要对E2F4的结构、功能和在不同肿瘤中的作用及其机制进行综述,以探讨E2F4在肿瘤细胞生命活动中的意义,为肿瘤诊治和预后判断中靶点的选择提供参考。

E2F转录因子家族在脂肪生成中的调控作用

E2F转录因子(E2F transcription factor,E2Fs)是视网膜母细胞瘤蛋白(Retinoblastoma protein,p Rb,RB或RB1)家族的主要靶蛋白.作为关键的转录因子家族成员,E2Fs在调控下游基因的转录、DNA合成和细胞周期中起到至关重要的作用.近年来,关于脂肪生成的研究显示,E2F家族的多个成员参与脂肪生成调控.综述了E2Fs在脂肪生成中的调控作用,主要包括E2Fs家族成员的结构特征及在脂肪生成中的作用机制.研究发现,E2F-1与E2F-3在哺乳动物中具有促进脂肪分化的功能,E2F-2可能参与牛前脂肪细胞分化过程,具体功能尚不清楚,而E2F-4,E2F-5是脂肪生成的抑制因子,在哺乳动物中起抑制脂肪生成作用,E2F-6,E2F-7,E2F-8在脂肪生成调控中的作用尚不明确.针对E2Fs在脂肪增殖和分化中的调控作用进行综述,探讨E2Fs作为肥胖靶点的治疗策略,为后续预防和治疗肥胖及相关疾病提供理论依据.

原癌基因Pokemon及核转录因子E2F3在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨POK红系髓性致癌因子(POK erythroid myeloid ontogenic factor,Pokemon)及核转录因子E2F3(E2Ftranscrip tion factor 3)在喉鳞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Max Vision二步法观察61例喉鳞癌组织及46例癌旁正常喉黏膜组织中Pokemon及E2F3的表达,并结合患者年龄、性别、原发部位、TNM分期、临床分期及预后之间的关系进行分析。结果 Pokemon及E2F3在喉鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常喉黏膜组织中的阳性表达率(P<0.001);颈淋巴结转移(N+)、中低分化、临床晚期(Ⅲ+Ⅳ)喉鳞癌患者中Pokemon及E2F3表达强度增强(P<0.05);Pokemon及E2F3阳性表达患者的5年累积生存率较阴性表达患者低(P<0.05)。结论 Pokemon与E2F3在喉鳞癌组织中高表达,并与其预后不良相关。两者可能在喉鳞癌发生及恶性进展过程中发挥重要作用,有望成为喉鳞癌发病机制及分子靶向治疗的新指标。

转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化

为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SMα-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene6瞬时转染E2F1ODN和错配E2F1ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1ODN后,HITASY细胞中hCREG、SMα-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用.

双向调节蛋白、转录因子E2启动子结合因子1、白细胞介素6的表达与结直肠癌发生发展的相关性

目的观察结直肠癌患者的双向调节蛋白(AREG)、转录因子E2启动子结合因子1(E2F-1)、白细胞介素6(IL-6)的表达情况,并分析其临床意义。方法选取在住院接受治疗的结直肠癌患者为研究对象,同时选取同期住院接受治疗的结肠息肉患者作为对照。观察两组患者AREG、转录因子E2F-1、IL-6的表达,比较不同临床病理特征结直肠癌患者的AREG、转录因子E2F-1、IL-6的表达,分析影响AREG、转录因子E2F-1、IL-6表达的因素。结果结直肠癌患者的AREG、IL-6水平,转录因子E2F-1阳性表达率高于结直肠息肉组;有淋巴结转移、组织学分型为黏液腺癌、TNM分期为Ⅲ期+Ⅳ期的结直肠癌患者的AREG、IL-6水平,转录因子E2F-1阳性表达率较高;回归分析结果显示组织学分型和TNM分期是影响表达的因素。结论结直肠癌患者的AREG、IL-6水平,转录因子E2F-1阳性表达率较高,相关因子的表达与结直肠癌的组织学分型和TNM分期具有一定的相关性。

核转录因子E2F-1和p27在大肠癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1和p27在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例大肠癌、20例正常大肠黏膜和30例大肠腺瘤E2F-1和p27的表达情况。结果 E2F-1在大肠癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。p27在正常大肠黏膜的阳性率明显高于大肠腺瘤和大肠癌。p27表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。结论 E2F-1和p27的表达与大肠癌发生关系密切,可以作为肠癌发生、发展的生物学标志物。

转录因子E2F1在脑膜瘤中的表达和临床意义

目的研究转录因子E2F1在脑膜瘤中的表达情况及其临床意义。方法选择57例经病理确诊为脑膜瘤患者及同期行脑外科手术治疗的38例非脑膜瘤患者,应用实时定量PCR方法和Western blot方法定量检测转录因子E2F1在脑膜瘤组织和正常脑膜中的表达情况,并采用免疫组织化学染色方法检测脑膜瘤组织中E2F1蛋白的表达定位。根据E2F1的表达情况分析其与脑膜瘤分型和预后的关系。结果实时定量PCR结果显示脑膜瘤组织中E2F1 mRNA表达水平显著高于正常脑膜组织,而且恶性脑膜瘤组织中E2F1 mRNA表达高于良性脑膜组织(P<0.01),Western blot结果也证实脑膜瘤组织中E2F1蛋白表达水平显著高于正常脑膜组织(P<0.01)。免疫组织化学染色结果显示脑膜瘤组织中E2F1蛋白主要定位在细胞核中。脑膜瘤组织中E2F1强阳性表达率为65%,正常脑膜组织中E2F1强阳性表达率为10%,二者比较差异具有统计学意义(P<0.01)。不典型和恶性脑膜瘤组织中E2F1强阳性表达率显著高于良性脑膜瘤。3年内脑膜瘤复发组E2F1表达阳性率显著高于无复发组(P<0.01)。结论 E2F1在脑膜瘤组织中表达增强,并且与脑膜瘤的恶性程度和复发率呈正相关。

胃肠道肿瘤细胞E2F-1转录因子活性对细胞周期的影响

目的:探讨癌细胞E2F-1因子的表达状态及其与细胞周期的关系。方法:采用免疫荧光组织化学染色法检测8株胃肠道肿瘤细胞系E2F-1转录因子的表达,并采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果:依据E2F-1阳性表达的程度不同,将8株肿瘤细胞系分为E2F-1高表达组(包括HGC-27、BGC-823、SGC-7901、HT29)和E2F-1低表达组(包括MKN45、MKN28、SH288、SW-620)。E2F-1高表达组G1/G0期、S期、细胞凋亡比例分别为(33.48±4.61)%、(63.91±5.02)%、(1.50±0.56)%,低表达组分别为(58.58±3.41)%、(35.38±4.03)%、(5.61±1.44)%,2组间比较差异有统计学意义(t分别为6.04、5.99和2.44,P<0.05或P<0.01)。结论:肿瘤细胞E2F-1因子的表达状态对细胞周期有明显的影响。E2F-1阳性的肿瘤细胞则倾向于更高的增殖速率。

转录因子E2F与血管再狭窄的研究进展

2F是调控细胞周期进程一个关键的转录因子 ,而且在血管再狭窄的病理过程中也起着非常重要的作用。对上述问题的了解 ,将有助于血管再狭窄防治的研究。

miR-372靶向E2F转录因子5抑制宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-372(miR-372)对宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞恶性生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈鳞状细胞癌组织及其癌旁组织中miR-372和E2F转录因子5(E2F5)表达水平,构建miR-372过表达和低表达SiHa细胞系(miR-372、anti-miR-372),采用MTT法、流式细胞术、Transwell法及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况及其相关蛋白水平。在线预测miR-372与E2F5靶向关系并进行双色荧光素酶实验验证,在miR-372过表达SiHa细胞系上调E2F5,观察细胞增殖、凋亡和侵袭情况。结果:癌组织中miR-372表达低于其癌旁组织(P<0.05),而E2F5表达高于其癌旁组织(P<0.05)。miR-372过表达抑制细胞增殖、侵袭和核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin A1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)表达(P<0.05);上调细胞凋亡和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤2蛋白/Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2/Bax)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达(P<0.05)。miR-372可靶向抑制E2F5表达,E2F5过表达可缓解miR-372对SiHa细胞作用效果。结论:miR-372过表达可抑制SiHa细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡,可能与靶向作用抑制E2F5表达有关。

花青素调节JAK2/STAT3信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨花青素对自身免疫性心肌炎(AE)大鼠T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡及Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法:将60只SD大鼠分为对照(NC)组、模型(Model)组、花青素组(50 mg/kg花青素)、STAT3激活剂Colivelin组(1 mg/kg Colivelin)、花青素+Colivelin组(50 mg/kg花青素+1 mg/kg Colivelin),每组12只。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清炎性因子水平;苏木素-伊红(HE)染色检测心肌病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测脾脏维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白p3(Foxp3)mRNA表达情况;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测心肌JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果:Model组心肌明显坏死和水肿,大量炎性细胞浸润;花青素组心肌无明显的坏死和细胞肿胀;Colivelin组心肌损伤加重;与花青素组相比,花青素+Colivelin组大鼠炎性细胞浸润现象增加。与NC组相比,Model组白细胞介素(IL)-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率及磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3、磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2比例明显升高(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、Foxp3 mRNA水平明显下降(P<0.05);与Model组比较,花青素组IL-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率以及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2比例明显下降(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、Foxp3 mRNA水平明显升高(P<0.05);Colivelin组对应指标呈相反趋势(P<0.05);与花青素组相比,花青素+Colivelin组IL-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2比例明显升高(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、脾脏Foxp3 mRNA水平明显下降(P<0.05)。结论:花青素可能通过抑制JAK2/STAT3通路,恢复Th17/Treg平衡,实现对AE大鼠心肌的保护作用。

核转录因子-κB、细胞外信号调节激酶1/2、转移相关蛋白-3在乳腺肿瘤组织中的表达研究

目的分析核转录因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、转移相关蛋白-3(MTA-3)在乳腺肿瘤中的表达。方法选取我院2017年8月至2019年3月收治的60例乳腺肿瘤患者作为观察组,另取30例同期乳腺增生患者作为对照组。比较两组患者组织样本NF-κB、ERK1/2和MTA-3水平。结果观察组NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组;MTA-3阳性检出率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期越高者、肿瘤直径越大者,NF-κB、ERK1/2阳性检出率越高,MTA-3阳性检出率低越低,差异有统计学意义(P<0.05)。Luminal A型、Luminal B型及HER2阳性分子分型患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于三阴型,MTA-3阳性检出率低于三阴型,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组,MTA-3阳性检出率低于无转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺肿瘤组织中存在NF-κB和ERK1/2的高阳性表达和MTA-3和低表达,并且与乳腺增生患者病理组织表达有明显差异,结合三者指标分析对鉴别诊断乳腺肿瘤、改善乳腺肿瘤干预时机有重要意义。

转录因子E2F1调控小细胞肺癌凋亡机制的研究

目的:探讨转录因子E2F1对人小细胞肺癌细胞株H446的凋亡调节作用。方法:构建转录因子E2F1的重组质粒,经脂质体导入H446细胞,分别设置空白对照组、阴性对照组。采用适时定量PCR法和免疫印迹法(western-blot)检测转染前后细胞转录因子E2F1的m RNA与蛋白表达的变化,以及抗凋亡蛋白BCL-2的表达水平。同时采用流式细胞仪技术检测转染前后细胞凋亡率的变化。结果:成功建立E2F1干扰的小细胞肺癌细胞株,其E2F1蛋白表达较空白对照及未转染组明显降低。转染后的细胞株凋亡率较转染前及空白对照组明显下降(P<0.05)。转染后的细胞株抗凋亡蛋白Bcl-2较空白对照组及未转染组显著升高(P<0.05)。结论:转录因子E2F1在小细胞肺癌细胞株H446中起促进凋亡的作用,有可能通过影响抗凋亡蛋白Bcl-2的表达参与调控细胞凋亡过程。

肝癌细胞系中miR-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系

目的:研究肝癌细胞系中微小RNA(microRNA,miR)-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系。方法:体外培养肝细胞系HL-7702,肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7,处理细胞分miRNA NC组、miR-9 inhibitor组、顺铂(CDDP)组、CDDP+miRNA NC组、CDDP+miR-9 inhibitor组。实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-9表达水平;免疫印记(Western blot,WB)法检测E2F1蛋白水平;CCK-8法检测miR-9对细胞存活的影响;克隆计数检测miR-9对细胞数量的影响。结果:与正常肝细胞系HL-7702相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9、E2F1蛋白水平升高(P<0.05)。在HepG2、Hep3B2.1-7细胞系中,与miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低(P<0.05)。与miR-9 inhibitor组相比,CDDP组、CDDP+miRNA NC组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量升高(P<0.05);CDDP+miR-9 inhibitor组细胞克隆数量、48 h细胞OD450降低(P<0.05);与CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比,CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低(P<0.05)。在HepG2细胞系中,与miRNA NC组、CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05)。在Hep3B2.1-7细胞系中,与miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)、CDDP+miR-9 inhibitor组(6、12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05);与CDDP组相比,miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)、CDDP+miR-9 inhibitor组(3、6、12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05);与CDDP+miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组(24、48 h)、CDDP+miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05)。结论:肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9和E2F1表达上调;干扰miR-9可抑制E2F1表达,抑制细胞增殖、抑制细胞克隆形成,提高药物敏感性。

大肠癌中TGFβ1转录因子E2F1的表达及临床意义

目的探讨大肠癌中转化生长因子β1(transforming g rowth factorβ1 TGFβ1)和转录因子E2F2的蛋白表达与临床病理特征的关系及其意义。方法应用免疫组化SABC法检测40例大肠癌患者手术切除标本中癌组织及10例正常大肠组织中TGFβ1转录因子E2F1表达情况。结果10例正常组织中，除1例TGFβ1阳性外，余均为阴性。转录因子E2F1在10例正常组织中表达均为阴性。大肠癌组织中的TGFβ1与E2F1的阳性例数分别是16例(40％)和24例(60％)，TGFβ1和转录因子E2F1在大肠癌中的表达水平均明显高于正常粘膜组织中的表达(P<0．05)。两者在大肠癌中的表达存在着相关性(P<0．05)，并且与癌组织的的分化程度，有无淋巴结转移及临床分期均有明显的相关性。TGFβ1的表达还与大肠癌的组织学类型有关。两者的表达均与肿瘤的部位无关．结论TGFβ1转录因子E2F1的表达与大肠癌的发生、发展及转移有关。

转录因子E2F与胃癌关系的研究进展

转录因子E2F在控制细胞周期的进展中起关键作用 ,E2F既能作为靶基因的激活剂使细胞由G1期向S期过渡 ,又能作为靶基因的抑制剂并诱导细胞凋亡。它在胃癌的形成中是起癌基因作用还是起抑癌作用 ,其机制正处研究之中 ,本文对其研究进展进行综述。