Interaction among Rb/p16, Rb/E2F1 and HDAC1 Proteins in Gallbladder Carcinoma

The mechanism and interaction among Rb/p16, Rb/E2F1 and HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma were investigated. By using the immunoprecipitation method, the interactions among Rb, p16, E2F1, HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma cell line （Mz-ChA-1） were studied. It was found that there were Rb and E2F1 proteins in the precipitates with anti-HDAC1, and there were HDAC1 and E2F1 proteins in the precipitate with anti-Rb. It was concluded that there are specific interactions among Rb, HDAC1 and E2F1 proteins in gallbladder carcinoma, indicating the existence of the direct Rb/E2F1/HDAC1 signal transduction pathway. There is no direct relationship between p16 proteins with Rb, HDAC1, and E2F1 proteins.

转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化

为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SMα-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene6瞬时转染E2F1ODN和错配E2F1ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1ODN后,HITASY细胞中hCREG、SMα-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用.

组织芯片研究胃肠道间质瘤中E2F1、MDM2及P53的表达及意义

目的探讨E2F1、MDM2及P53在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)中的表达及与GIST临床病理特征和预后的关系。方法利用组织芯片技术及免疫组化EnVision法检测123例GIST中E2F1、MDM2及P53的表达情况,分析三者表达与临床病理特征的关系,并对三者与GIST预后的关系进行统计学分析。结果 123例GIST中108例有三种蛋白均可评估,108例中E2F1、MDM2及P53蛋白三者阳性表达率分别为62.0%,43.5%和57.4%。三者表达均与NIH分级呈显著正相关(均P<0.001);在不同发生部位、是否坏死及有无转移复发之间差异均有显著性意义(均P<0.05),且三者表达在肠道发生的GIST明显高于胃和肠道外部位(P<0.05),胃和肠道外相比差异无统计学意义(P>0.05);而在不同发生年龄及不同细胞类型间相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 E2F1、MDM2及P53表达与GIST预后有关,三者对评价GIST预后是非常有意义的标记物。

肺鳞癌中E2F1、E2F6及TPX2的表达及临床意义

目的探究E2F1、E2F6及Xklp2靶蛋白(TPX2)在肺鳞癌中的表达情况及临床意义。方法选取2019年2月至2020年10月于本院收治进行手术的肺鳞癌患者58例。取肺鳞癌组织作为研究样本,取癌旁正常组织作为对照样本。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测E2F1、E2F6、TPX2的相对表达量,卡方检验分析E2F1、E2F6、TPX2表达与肺鳞癌患者临床病理特征的关系,Pearson法分析肺鳞癌组织中E2F1、E2F6、TPX2相对表达量间的相关性。结果肺鳞癌组织中E2F1、E2F6、TPX2表达水平均明显上调(P<0.05);肺鳞癌组织E2F1的表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、吸烟史无关(P>0.05),与淋巴转移、肿瘤分化程度有关(P<0.05);E2F6的表达与患者年龄、性别、吸烟史无关(P>0.05),与肿瘤直径、淋巴转移、临床分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05);TPX2的表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、吸烟史无关(P>0.05),与淋巴转移、临床分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05);E2F1、E2F6、TPX2表达水平间相互正相关(P<0.05)。结论肺鳞癌组织中E2F1、E2F6、TPX2的表达均明显上调,彼此关系密切,均与淋巴转移、肿瘤分化程度有关,可能共同参与肺鳞癌发生发展过程。

胃肠道间质瘤中E2F1和p16^(INK4α)蛋白的表达与预后的关系

目的探讨E2F1和p16INK4α在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)中的表达及两者的相关性,为GISTs的临床治疗和预后判断提供新的病理学依据。方法应用免疫组化EnVision法检测52例GISTs中p16INK4α和E2F1的表达情况,分析二者表达与Fletcher分级、进行性疾病(progressive disease,PD)及CD117和PKC-θ表达之间的关系,并对二者与GISTs预后的关系进行统计学分析。结果E2F1蛋白阳性率73.1%,与Fletcher分级呈显著正相关(P<0.001);E2F1阳性表达与CD117阳性表达之间有显著性差别(P<0.05);E2F1阳性细胞数大于75%的病例与小于75%的三组(<10%,10%-50%,50%-75%)之间PD发生率有显著性差异(P<0.05)。p16INK4α在52例GISTs中均有不同程度的阳性表达,与Fletcher分级呈显著负相关(P<0.001);p16INK4α阳性细胞数小于50%的病例与大于50%的两组(50%-75%,>75%)PD发生率之间差异有显著性(P<0.05)。结论E2F1、p16INK4α表达与GISTs预后有关,可作为GISTs预后的标记物。

甲状腺乳头状癌中E2F1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨E2F1和P16蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及二者的关系,为甲状腺乳头状癌的发生发展及预后判断提供一定的依据。方法应用免疫组化EnVision法检测78例甲状腺乳头状癌和51例正常组织中E2F1和P16蛋白的表达情况,分析二者与临床病理因素的关系。结果 E2F1和在P16蛋白甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为78.2%和39.7%,正常组织中阳性率分别为5.9%和58.8%,二者在癌组织与正常组织间比较均有统计学差异(P<0.05);E2F1与P16蛋白阳性表达与年龄、性别及肿瘤的发病部位无关(P>0.05),与淋巴结转移及临床病理分期有关(P<0.05);E2F1和P16蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性表达呈显著负相关(r=-0.269,P<0.05)。结论 E2F1、P16蛋白与甲状腺乳头状癌的发生发展有关,E2F1阳性表达和P16表达缺失与患者的预后相关,二者联合检测可能更有利于评价患者的预后。

应用酵母双杂交系统筛选E2F1相互作用蛋白

目的:应用酵母双杂交系统从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选E2F1转录因子的相互作用蛋白。方法:以pGBKT7-E2F1为诱饵质粒筛选人正常胃黏膜细胞的cDNA文库,得到阳性克隆,反复验证,并对验证后的阳性克隆进行测序及同源性分析。结果:从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选得到20个阳性克隆,经测序和同源性分析,筛除假阳性克隆,最终得到18个不同的候选基因序列。其中,17个为可知基因序列,它们分别是:组织蛋白酶B、SIVA1、干扰素调节因子7、鸟苷酸激酶1、ATP酶抑制因子1、核糖体蛋白SA、纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA结合蛋白、精氨琥珀酸合酶1、卵泡抑素类似物3、金属硫蛋白2A、内质网钙结合蛋白1、WNT1可诱导信号通路蛋白2、CDC42效应蛋白1、可溶性半乳糖凝集素结合蛋白1、中胚层发育候选2、外切酶体成分7和含EGF腓骨蛋白样胞外基质蛋白1,尚有一未知基因片段。结论:应用酵母双杂交系统成功筛选出18种E2F1相互作用蛋白,为进一步探讨E2F1影响胃癌细胞生物学行为的分子机制奠定了基础。

乳腺浸润性癌中E2F1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨转录因子E2F1和P16蛋白在乳腺浸润性癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展及预后评估的意义,并为乳腺癌的靶向治疗提供一定的依据。方法采用免疫组织化学方法检测61例乳腺浸润性癌、49例导管内乳头状瘤及58例乳腺增生组织中E2F1和P16蛋白的表达情况。结果 E2F1在乳腺浸润性癌、导管内乳头状瘤及乳腺增生组织中的阳性率分别为78.7%、12.2%和1.7%,前者与后二者分别比较差异有统计学意义(P<0.05);P16在乳腺浸润性癌、导管内乳头状瘤及乳腺增生组织中的阳性率分别为34.4%、57.1%和70.7%,前者与后二者分别比较差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织中E2F1和P16阳性表达与患者年龄及肿瘤TNM分期差异无统计学意义(P>0.05),与淋巴结转移及组织学分级差异有统计学意义(P<0.05),E2F1和P16蛋白在癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,呈显著负相关性(r=-0.297,P<0.05)。结论 E2F1、P16蛋白可能参与了乳腺癌的发生和发展,E2F1蛋白的阳性表达与P16失表达可能是患者预后差的指标,二者联合检测更有利于评估预后,同时可为乳腺癌新的生物靶向治疗提供依据。

新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞P16-RB-E_2F_1通路的改变

目的探讨新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞(lungfibroblasts,LF)P16-RB-E2F1蛋白信号传导通路的改变。方法足月新生SD大鼠于生后12h内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14和21d随机处死动物,无菌条件下采集肺组织,进行LF细胞的原代培养,应用免疫组织化学、Westernblotting法检测P16、RB、E2F1蛋白表达;Real-timePCR法检测其mRNA含量。免疫组织化学法检测磷酸化RB蛋白(p-RBser-795)表达。结果高氧组与空气组相比,生后7d时高氧组P16蛋白及mRNA表达开始减少,E2F1表达增加(P<0.05),14d和21d时P16蛋白及mRNA表达明显减少,E2F1表达则明显增加(P<0.01);各实验组LF的总RB蛋白表达无明显差异(P>0.05),生后7d时高氧组p-RB蛋白表达增加(P<0.05),14d和21d时明显增加(P<0.01)。结论高氧可能通过肺成纤维细胞P16基因表达失活,导致RB蛋白磷酸化(Rb灭活),E2F1基因表达水平增加,LF过度增殖最终导致肺间质纤维化。

核转录因子E2F-1和p27在大肠癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1和p27在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例大肠癌、20例正常大肠黏膜和30例大肠腺瘤E2F-1和p27的表达情况。结果 E2F-1在大肠癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。p27在正常大肠黏膜的阳性率明显高于大肠腺瘤和大肠癌。p27表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。结论 E2F-1和p27的表达与大肠癌发生关系密切,可以作为肠癌发生、发展的生物学标志物。

RbAP48与恶性肿瘤的研究进展

视网膜母细胞瘤结合蛋白48(Retinoblastoma associated protein 48,Rb AP48)是一种新型肿瘤特异性蛋白,属于WD-40蛋白家族成员,作为一种Rb结合蛋白,是从不同染色质组装、装配及核小体修饰复合物(包括组蛋白乙酰化酶HDACs)分离出来的第一个被鉴定的高峰度蛋白,在Rb/E2F信号传导通路中起转录抑制作用。研究证实,Rb AP48通过HDAC1靶向作用于视网膜母细胞瘤蛋白Rb,从而结合形成Rb·HDAC1·Rb AP48三聚复合体,该复合物在G1期定位于E2F上,抑制该调节因子转录。Rb AP48在肺癌、宫颈癌、甲状腺癌、急性髓系白血病、乳腺癌、胃癌和原发性肝癌等恶性肿瘤中均表达异常,并且与肿瘤的发生发展关系密切,因此,进一步了解Rb AP48的作用及在不同种类肿瘤中的表达情况对了解肿瘤的发生发展有重要意义。

E2F1基因真核表达载体的构建及其对CD2AP启动子的影响

目的构建E2F1基因真核表达质粒,并初步探讨E2F1对CD2相关蛋白(CD2AP)启动子的作用。方法 RT-PCR扩增E2F1基因,构建含E2F1基因的重组真核表达质粒,重组质粒转染人胚肾HEK-293细胞。Western blot检测E2F1蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测E2F1过表达后人CD2AP启动子的活性。结果核酸序列分析及Western blot结果证实,成功构建含E2F1基因的重组真核表达质粒;过表达E2F1能增强CD2AP启动子的活性。结论 E2F1编码基因在HEK-293细胞中获得正确表达,且E2F1蛋白可促进人CD2AP启动子的转录活性。