E2F1基因敲除小鼠骨髓造血干、祖细胞减少

目的了解转录因子E2F1基因敲除对造血干、祖细胞的影响。方法用不同抗体标记E2F1基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞,应用流式细胞仪进行分析,比较两组之间的差异。结果对检测结果进行统计分析发现,与野生型小鼠相比,E2F1基因敲除小鼠的外周血、骨髓细胞均有改变,脾脏细胞未见明显变化,骨髓前体B细胞、髓系祖细胞、造血干细胞等均有显著变化。骨髓造血干、祖细胞减少,G1期造血干细胞减少。结论 E2F1基因敲除可使小鼠造血干、祖细胞减少。

Homer1b/c“支架”在CTNND2-/-自闭症模型鼠中的作用研究

目的:观察CTNND2-/-自闭症模型鼠前额叶皮层中支架蛋白荷马1b/c(homer protein homolog 1b and 1c,Homer1b/c)与三磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5-trisphosphate receptor,IP3R)、代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5)和香克3蛋白(sh3 and multiple ankyrin repeat domains 3,Shank3)蛋白相关复合体的变化;前额叶皮层中常见氨基酸的变化,发现自闭症模型鼠中可能参与疾病发生的关键靶点。方法:蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)法检测CTNND2-/-自闭症模型鼠前额叶皮层中支架蛋白Homer1b/c、突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein 95,PSD-95)、突触素蛋白(synaptophysin,SYP)、囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,vGluT1)的表达的变化;通过免疫荧光(immunofluorescence,IF)观察Homer1b/c与IP3R、mGluR5和Shank3蛋白的表达与共定位;免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CO-IP)技术分别观察Homer1b/c与IP3R、mGluR5或Shank3结合的变化;使用液相色谱(liquid chromatography,LC)观察前额叶皮层中常见氨基酸的变化。结果:与对照组相比,CTNND2-/-模型鼠前额叶皮层中Homer1b/c(P=0.003)、PSD-95(P=0.003)以及SYP蛋白(P=0.046)的表达均明显降低;同时,Homer1b/c与IP3R、mGluR5、Shank3蛋白相互之间结合减少;前额叶皮层中常见的兴奋性神经递质谷氨酸(glutamate,Glu)和抑制性神经递质γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的表达无明显变化(P=0.366,P=0.355),组氨酸(histidine,His)(P=0.036),酪氨酸(tyrosine,Tyr)(P=0.030)表达则明显增高。结论:CTNND2-/-自闭症模型鼠中Homer1b/c蛋白低表达,同时Homer1b/c与IP3R、Shank3、mGluR5蛋白复合物的形成减少,并推测低表达的Homer1b/c可能是导致自闭症神经元突触异常发育的关键靶点。

多不饱和脂肪酸对Δ15 Des转基因小鼠前列腺素E_(2)水平的影响

目的探讨多不饱和脂肪酸(PUFAs)对Δ15脂肪酸去饱和酶(Δ15 Des)转基因小鼠前列腺素E_(2)(PGE_(2))水平的影响。方法取C57BL/6野生型(WT)雄性小鼠和Δ15 Des转基因雄性小鼠作为对照组(n=5,WT组)和实验组(n=5,TG组),6%花生四烯酸(ARA)饲养8周,每周记录小鼠体质量变化;8周后麻醉处死2组小鼠,冰上分离小鼠肝脏、睾丸及肌肉组织,采用气相色谱(GC)检测2组小鼠各组织中脂肪酸(FAs)的组成及水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定2组小鼠各组织中PGE_(2)的水平及前列腺素E合酶1(PTGES1)、前列腺素E合酶2(PTGES2)信使RNA(mRNA)的相对表达。结果第1~8周,2组小鼠体质量均在增长,2组间比较、差异无统计学意义(P>0.05);WT组小鼠各组织中PUFAs主要是欧米伽-6 PUFAs(n-6 PUFAs);与WT组相比,TG组小鼠各组织中ARA水平降低、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)水平升高(P<0.05或P<0.01),睾丸组织中亚油酸(LA)水平升高、二十二碳四烯酸(DTA)水平降低(P<0.05);TG组小鼠睾丸、肌肉组织中PGE_(2)水平低于WT组(P<0.05或P<0.01);TG组小鼠肝脏、睾丸组织中PTGES1、PTGES2 mRNA表达低于WT组(P<0.05或P<0.01)。结论PUFAs可减少Δ15 Des转基因小鼠ARA的合成,降低与PGE_(2)相关的合成酶表达,从而调节体内PGE_(2)的水平。

搜风祛痰中药复方对AopE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响。方法:建立ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并设立空白组、模型组、西药组、稳斑汤低、中、高剂量组。13周后将小鼠麻醉处死,取经HE染色的主动脉组织在光学显微镜下进行病理学观察,并采用半定量RT-PCR技术检测Beclin-1和Bcl-2基因表达的变化。结果:与空白组相比,模型组Beclin-1mRNA表达水平明显下降(P<0.01);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Beclin-1mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,中药高剂量组Beclin1mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与空白组对比,模型组Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Bcl-2mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,稳斑汤高剂量组Bcl-2mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。光镜下观察西药组和稳斑汤各剂量组炎症反应均明显弱于模型组。结论:搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过上调ApoE基因敲除小鼠AS易损斑块中Beclin-1和Bcl-2的基因表达而干预AS不稳定斑块的形成及破裂,具有良好的心血管保护作用。

RELMɑ/FIZZ1信号通路对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的影响

目的探讨类抵抗素分子ɑ或炎症区域分子1(RELMɑ/FIZZ1)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性及血管新生的影响及其信号通路。方法 8周龄C57BL/6J ApoE基因敲除鼠20只,喂食高脂饲料12周后随机分为模型组及RELMɑ/FIZZ1组,另选10只C57BL/6J野生型小鼠作为对照组;RELMɑ/FIZZ1组于尾部血管注射重组RELMɑ/FIZZ1干预2周后结束实验。取小鼠主动脉制备石蜡包埋切片,进行HE染色,利用图像软件定量测量斑块面积、血管横截面积及校正斑块面积,采用免疫组织化学染色测定主动脉血管壁RELMɑ/FIZZ1及CD34阳性反应强度。提取主动脉RNA,采用全基因表达谱筛选出显著表达差异的基因和发生变化的细胞通路。结果与对照组相比,模型组动脉粥样硬化明显,斑块面积增加,粥样硬化斑块内RELMɑ/FIZZ1表达明显。RELMɑ/FIZZ1刺激后RELMɑ/FIZZ1及CD34阳性反应强度增强,校正斑块面积比模型组显著性增加(31.58%±6.65%比24.16%±3.59%,P<0.01),明显刺激血管新生(P<0.05)。相对于对照组,RELMɑ/FIZZ1组有显著性上调基因391个,下调基因465个;活性显著性上调信号通路12条,活性显著性下调信号通路10条,共计22条。结论 RELMɑ/FIZZ1刺激血管新生,造成粥样斑块不稳定,其机制与Atg9a、Gng8等基因显著性表达及细胞肌动蛋白骨架调节通路、缝隙连接信号通路的激活密切相关。

利用CRISPR/Cas9技术构建CYP2E1基因敲除的HEK293FT细胞系

目的:利用CRISPR/Cas9系统在HEK293FT细胞系中敲除CYP2E1基因并探讨其在检测化学物毒性中的应用。方法:设计3对分别靶向CYP2E1基因第2、第3和第7外显子的sg RNA序列并构建PX461表达载体;将携带靶向CYP2E1的sg RNA表达载体转染至HEK293FT细胞中,通过SURVEYOR检测分析sg RNA的切割效率;利用有限稀释法获得CYP2E1敲除细胞株,通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测细胞株中CYP2E1的敲除效果;并检测其对N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性效应的影响。结果:SURVEYOR检测分析靶向CYP2E1基因第3外显子的sg RNA的切割效率为23%;成功构建了2株CYP2E1基因敲除的细胞株,实时荧光定量PCR结果显示CYP2E1 m RNA表达下降,蛋白印迹结果显示CYP2E1蛋白无表达;CYP2E1基因敲除会显著降低N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性。结论:通过CRISPR/Cas9构建出CYP2E1稳定敲除的肾细胞系,为研究CYP2E1的功能和作用机制提供了有效的工具。

E2F1基因在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达及意义

目的通过检测E2F1基因在高氧致早产儿慢性肺疾病(CLD)新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达,初步探讨E2F1基因在CLD肺间质纤维化发生发展过程中的生物学作用。方法足月新生SD大鼠于生后12 h内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14、21 d随机处死动物后,无菌条件下采集肺组织,进行肺成纤维细胞的原代培养,免疫组化、Western blot法检测E2F1蛋白表达r,eal-time PCR法检测E2F1 mRNA含量。结果生后3 d空气组和高氧组E2F1蛋白及mRNA的表达(蛋白:0.251±0.054,0.249±0.074;mRNA:0.066 4±0.003 4,0.066 8±0.003 7)无统计学差异(P>0.05);生后7 d时高氧组E2F1蛋白及mRNA的表达较空气组增加(蛋白:0.248±0.041,0.278±0.034;mRNA:0.065 9±0.003 1,0.072 8±0.004 7),差异有统计学意义(P<0.05);14 d、21 d时增加明显(蛋白:0.243±0.077 vs 0.328±0.057,0.241±0.038 vs 0.377±0.063;mRNA:0.241±0.038 vs 0.377±0.063,0.065 5±0.003 8 vs 0.075 0±0.004 1,P<0.01)。结论 E2F1异常高表达参与了高氧致CLD鼠肺成纤维细胞过度增殖的病理过程,在肺间质纤维化的发生发展过程中发挥重要作用。

脂欣康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠TNF-α、IL-1β干预作用

目的观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的影响。方法将6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组与脂欣康组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康胶囊内之药粉,模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃2周后(8周龄),各组随机取出半数小鼠,雌雄各半,麻醉后由腹腔静脉抽血。另一部分继续灌胃4周后(12周龄)由腹腔静脉抽血。离心分离血清,ELISA法检测TNF-α和IL-1β。结果灌服2周后,脂欣康组小鼠血清TNF-α和IL-1β显著低于模型组(P<0.05),模型组显著高于正常对照组(P<0.05);继续用药4周后,TNF-α和IL-1β无明显增高,脂欣康组显著低于模型组(P<0.05),模型组显著高于正常对照组(P<0.05)。结论脂欣康胶囊具有显著抑制ApoE基因敲除小鼠血清TNF-α与IL-1β增高的作用。

FIZZ1在ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内的表达

目的:探讨FIZZ1在ApoE基因敲除小鼠粥样斑块内的表达。方法:C57BL/6JApoE基因敲除鼠及C57BL/6J野生型小鼠各9只,分别喂食高脂饲料及普通饲料,24周后处死,自主动脉根部至腹主动脉离断整支血管,石蜡包埋后作连续切片,行HE染色及FIZZ1免疫组化,检测血管斑块内FIZZ1表达情况,RT-PCR检测斑块内FIZZ1mRNA表达。结果:ApoE基因敲除鼠高脂饲养24周后,主动脉根部动脉粥样硬化明显,斑块体积较大,免疫组化及其RT-PCR可见FIZZ1及其mRNA在粥样硬化斑块内明显表达,同龄野生型C57BL/6J鼠血管壁内未见FIZZ1及其mRNA表达。结论:FIZZ1能在动脉粥样硬化斑块内表达。

DPP4抑制剂西格列汀对ApoE基因敲除小鼠肾脏Egr-1及FN表达的影响

目的观察DPP4抑制剂西格列汀对Apo E基因敲除小鼠肾脏组织中早期生长反应因子-1(Egr-1)及纤连蛋白(FN)表达的影响。方法 8周龄雄性Apo E基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为西格列汀干预组(sig+apo E-/-组)和实验组(apo E-/-组),每组6只,另取C57BL小鼠6只作为正常对照组(control组)。高脂饮食结合药物饲养16周后,行腹腔耐量实验,观察血糖水平,后收集24 h尿标本,用ELISA法检测24 h尿蛋白,随后取血并处死各组小鼠,血清学检测血脂变化,取肾组织行实时荧光定量PCR及免疫印迹(Western blotting),检测肾组织中Egr-1及FN的m RNA和蛋白表达水平。结果血脂检测显示,实验组和西格列汀干预组小鼠甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白均显著高于正常对照组(P<0.05),实验组和西格列汀干预组间上述指标无统计学差异(P>0.05),而高密度脂蛋白在西格列汀干预组显著高于实验组(P<0.001)和正常对照组(P<0.001)。IPGTT结果显示,apo E-/-组、sig+apo E-/-组和对照组3组间空腹血糖水平均没有显著差异(P>0.05)。24 h尿液检测结果显示:apo E-/-组24 h尿白蛋白排泄量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);西格列汀治疗后,sig+apo E-/-组小鼠24 h尿白蛋白较apo E-/-组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR和Western blotting检测显示:实验组肾皮质中,Egr-1及FN的m RNA水平和蛋白水平均高于正常对照组,而与实验组相比,西格列汀能显著降低Egr-1及FN的m RNA和蛋白水平。结论西格列汀可能通过调控Egr-1的表达从而下调FN,从而达到肾脏保护作用。

FIZZ1在载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展中的可能作用及机制

目的探讨FIZZ1在载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展中的可能作用及机制。方法20只8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组和罗格列酮组,另取10只8周龄野生型C57/BL小鼠作为对照组,3组均饲喂普通饮食,罗格列酮组给予罗格列酮10 mg/(kg.d),12周后获取静脉血和主动脉标本。静脉血用于检测血脂和高敏C反应蛋白。部分主动脉标本用于病理学检测动脉粥样硬化病变。其余标本用于免疫组织化学和RT-PCR检测FIZZ1的表达。结果模型组和罗格列酮组的血脂水平均显著高于对照组(P<0.05),前二组之间差异无显著性。高敏C反应蛋白在前两组水平均较对照组高(P<0.05),其中罗格列酮组低于模型组。罗格列酮组和模型组主动脉均形成明显的动脉粥样硬化斑块,罗格列酮干预组病变较模型组轻。免疫组织化学和RT-PCR结果发现,对照组FIZZ1没有表达,模型组和罗格列酮组均有表达,且模型组表达量较罗格列酮组显著增高。结论FIZZ1在动脉粥样硬化病变中表达增高,罗格列酮干预后表达可降低,伴随着动脉粥样硬化斑块面积缩小,提示罗格列酮具有抗动脉粥样硬化作用,其机制与调脂无关,可能与其抑制炎症反应有关。

沉默信息调节因子2相关酶1激动剂增强载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的稳定性

目的:探讨沉默信息调节因子2相关酶(SIRT)1对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响及其可能机制。方法:雄性Apo E-/-小鼠随机分为高脂对照组、SIRT1激动剂组、SIRT1激动剂+抑制剂组。高脂饮食16周后,分别予NS、SRT1720、SRT1720和尼克酰胺腹腔注射6周。油红O和苏木精-伊红染色比较3组间动脉粥样硬化斑块大小;油红、Masson染色和免疫组化分别比较3组斑块中脂质、胶原纤维、巨噬细胞和平滑肌细胞成分面积各占斑块总面积的百分比;比较3组胸主动脉粥样硬化斑块易损指数大小。激光显微切割腹主动脉冰冻切片,实时荧光定量PCR法检测SIRT1 m RNA表达。结果:与高脂对照组比,SIRT1激动剂组SIRT1 m RNA表达明显升高(P<0.05),动脉粥样硬化斑块面积明显减少(P<0.05),斑块中脂质和巨噬细胞含量明显减少(P<0.05),斑块中胶原纤维和平滑肌细胞含量明显增加(P<0.05),斑块易损指数也明显减少(P<0.05);SIRT1激动剂+抑制剂组各指标差异均无统计学意义。结论:上调SIRT1能使Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块缩小,并能增强动脉粥样硬化斑块的稳定性。

在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中同型半胱氨酸对B1和Alu重复序列甲基化的影响

目的观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200及500μmol/L同型半胱氨酸干预培养72 h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu序列甲基化水平的变化。结果饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01);在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。

CYP2E1在HBV转基因小鼠急性肝损伤时的表达及意义

目的研究HBV转基因小鼠肝脏在四氯化碳（CCl4）急性损伤情况下,肝癌相关基因细胞色素P2E1（CYP2E1）表达水平的变化。方法选择8~10周龄HBV（-）[HBV（-）组]及HBV（＋）[HBV（＋）组]转基因小鼠各24只,按照1.0μL/g体质量腹腔注射CCl4（1∶4溶于橄榄油）建立急性肝损伤模型,另外选用正常健康小鼠8只作为对照组,仅给予生理盐水腹腔注射。各组分别于注射后3、6、12、24、48 h和72 h处死小鼠。采集各组大鼠肝组织样本,光镜下观察不同时间点肝脏组织学改变,并采用荧光定量PCR法测定各组大鼠肝组织中CYP2E1基因相对的m RNA水平,采用免疫组织化学和蛋白印迹技术观察各组大鼠肝脏组织中CYP2E1的表达水平。结果与对照组比较,HBV（-）组和HBV（＋）组,CCl4致急性肝损伤时,CYP2E1的m RNA及其蛋白表达水平明显升高,在注射CCl472 h达到峰值。与HBV（-）组比较,HBV（＋）组小鼠肝脏损伤程度较重,CYP2 E1基因和蛋白的表达水平均明显增高。结论 CCl4所致急性肝损伤HBV转基因小鼠CYP2E1基因的表达明显增加。该研究结果为HBV所致的肝损伤及肝癌的发病机制提供了依据。

中药虎杖和山楂提取物对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞PPARγ、ABCA1及CD36 mRNA表达的影响

目的观察中药虎杖、山楂配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内过氧化体增殖物激活型受体γ、三磷酸腺苷结合盒转运子A1及CD36 mRNA表达的影响,从基因水平探讨虎杖和山楂配伍对动脉粥样硬化泡沫细胞形成的干预机制。方法培养载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞,分为空白组、虎杖苷组、山楂提取物组、虎杖苷+山楂提取物组、洛伐他汀组、罗格列酮组及模型组。除空白组外,其他各组均同时加入氧化型低密度脂蛋白及脂多糖。各组细胞在培养箱内共孵育(泡沫化)2天,以逆转录聚合酶链反应法检测0 h、24 h和48 h各组细胞内过氧化体增殖物激活型受体γ、三磷酸腺苷结合盒转运子A1及CD36的mRNA表达。结果与空白组比较,干预24 h和48 h后,模型组及各用药组三个指标的表达均显著增高(P<0.01);与模型组比较,干预24 h后,虎杖苷+山楂提取物组和罗格列酮组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达显著增高,虎杖苷组、虎杖苷+山楂提取物组和罗格列酮组三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA表达显著增高(P<0.05或P<0.01),各用药组CD36 mRNA表达无显著差异(P>0.05);干预48 h后,各用药组过氧化体增殖物激活型受体γ和三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA表达均显著增高,CD36 mRNA表达显著降低,且虎杖苷+山楂提取物组优于虎杖苷组、山楂提取物组及洛伐他汀组(P<0.05或P<0.01)。结论虎杖和山楂配伍可能具有与罗格列酮相似的过氧化体增殖物激活型受体γ激动作用,通过上调载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA表达、下调CD36 mRNA表达的调控途径显著抑制巨噬细胞泡沫化过程,阻止动脉粥样硬化进程。

E2F1基因在急性白血病中的表达及其临床意义

目的:研究E2F1基因在急性白血病中的表达变化及其临床预后意义。方法:选取从2015年3月-2016年3月在本院确诊为急性白血病(AL)的72例患者,同时选取24例健康体检者作为对照,采用RT-PCR和Western blot方法分析2组E2F1基因表达变化,同时采用统计学分析E2F1基因表达与AL患者临床指标的关系及其预后意义。结果:AL患者中E2F1基因m RNA和蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。E2F1基因高表达患者的WBC、β2-M G、LDH水平均明显高于E2F1基因低表达的患者(P<0.05),但E2F1基因的表达与患者的性别、发热、疲劳、骨髓原始细胞比例、外周血原始细胞水平无相关性(P>0.05)。E2F1基因的低表达的患者完全缓解率显著高于E2F1基因的表达高的患者(P<0.05),而E2F1基因的低表达的患者耐药性低于E2F1基因高表达的患者(P<0.05)。治疗后症状缓解患者的E2F1基因的表达水平下降明显(P<0.05)。治疗后M1、M2、M5患者的E2F1基因的表达水平下降明显(P<0.05)。经Kaplan-M eier生存分析发现,E2F1基因低表达的患者组的OS和DFS优于高表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明,年龄和E2F1基因是OS独立影响因素(P<0.05);性别和E2F1基因是DFS独立影响因素(P<0.05)。结论:E2F1基因在AL患者中表达水平较高,其高水平表达与患者的预后不良密切相关。E2F1基因有望作为临床治疗AL患者的生物学靶点。

PHPS1促进ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的不稳定性研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2特异性抑制剂苯肼基吡唑啉酮磺酸盐1(PHPS1)对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响。方法2019年1—12月于河北省人民医院临床研究中心进行实验。6~8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠18只,随机数字表法分为模型组(生理盐水灌胃,0.25 mg·kg^(-1)·d^(-1))和PHPS1组(PHPS1灌胃,0.25 mg·kg^(-1)·d^(-1)),各9只。4周后处死小鼠取血清,检测总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及IL-1β、TNF-α水平;主动脉根部病理切片HE染色评估斑块大小;免疫组化评估斑块内巨噬细胞、平滑肌含量;天狼星红染色评估斑块内胶原表达情况;TUNEL染色评估斑块内细胞凋亡情况;Movat染色评估斑块内坏死核心面积;Western-blot检测内质网应激凋亡相关通路蛋白表达量。结果与模型组比较,PHPS1组血脂水平差异无统计学意义(P>0.05),炎性因子IL-1β和TNF-α水平明显升高(t/P=2.934/0.010,2.240/0.040);斑块面积、斑块内巨噬细胞含量显著增加(t/P=4.869/0.001,4.241/0.001);斑块内平滑肌和胶原含量差异无统计学意义(P>0.05);TUNEL和Movat染色显示凋亡阳性区域和斑块内坏死核心面积显著增大(t/P=7.636/0.000,17.212/0.000);Western-blot结果显示内质网应激蛋白p-PERK、ATF4表达升高,凋亡相关蛋白CHOP、cleaved-caspase3、bax表达显著上升,bcl-2蛋白表达显著下降(P均<0.01)。结论蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2可通过抑制斑块细胞的内质网应激从而抑制凋亡进而稳定动脉粥样硬化斑块。

CYP2E1基因在2型糖尿病大鼠肝脏的表达

[目的 ]运用基因芯片技术 ,比较正常大鼠和糖尿病大鼠肝脏中细胞色素p45 0 2E1(CYP2E1)基因表达的差异。[方法 ]对雄大鼠腹腔注射链脲佐菌素 (STZ) ,并予以高脂饮食制造 2型糖尿病模型 ;从其肝脏抽提总RNA ,进行反转录 ,并用Cy3 dUTP和Cy5 dUTP分别对正常组与实验组探针进行荧光标记 ,探针与基因表达谱芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。 [结果 ]糖尿病组与对照组的肝脏相比 ,Cy5 /Cy3比值为 10 0 82 ,有统计学意义 ,CYP2E1mRNA表达升高。[结论 ]

弥漫大B细胞淋巴瘤中SENEX基因与Rb/E2F1通路的相关性及临床病理意义

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中SENEX基因表达与Rb/E2F1通路的相关性及临床病理意义。方法选择2016年1月至2019年12月该院首次确诊的84例DLBCL患者作为DLBCL组,选择经病理诊断为淋巴结反应性增生的40例患者作为对照组,检测SENEX、pRb、E2F1的表达水平,分析SENEX、pRb、E2F1与DLBCL病理特征、预后的关系。结果DLBCL组患者肿瘤组织中SENEX、pRb、E2F1表达水平均高于对照组(P<0.05),且三者之间均呈正相关(P<0.05);肿瘤最大径≥5 cm、有B症状、国际预后指数(IPI)为3~5、Ann Arbor分级为Ⅲ~Ⅳ级的患者肿瘤组织中SENEX、pRb、E2F1表达水平均高于肿瘤最大径<5 cm、无B症状、IPI为0~2、Ann Arbor分级为Ⅰ~Ⅱ级的患者(P<0.05);DLBCL组中SENEX、pRb、E2F1表达水平≥中位数的患者累积生存率均低于SENEX、pRb、E2F1表达水平<中位数的患者(P<0.05)。结论DLBCL中SENEX表达水平增加与疾病进展及预后不良有关,激活下游Rb/E2F1通路是SENEX发挥作用的可能分子机制。

病理性瘢痕组织中E2F1基因的表达及其意义

目的:检测E2F1基因在病理性瘢痕组织中的表达,以正常皮肤和正常瘢痕组织作对照,初步探讨E2F1在病理性瘢痕形成中的生物学作用。方法:应用RT-PCR方法检测正常皮肤,正常瘢痕,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中E2F1 mRNA的水平。结果:增生性瘢痕、瘢痕疙瘩组织中E2F1 mRNA水平显著高于正常皮肤、正常瘢痕组织,有统计学意义(P<0.01)。结论:E2F1基因在病理性瘢痕组织中增高,促进瘢痕组织中修复效应细胞的增生,对病理性瘢痕的形成可能起着重要作用。