结直肠癌组织转录因子E2F2、黏蛋白样受体2水平与病人临床病理特征的关系及对淋巴结转移的诊断价值

目的分析转录因子E2F2和黏蛋白样受体2(EMR2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与病人临床病理特征的关系,评估二者对癌转移的诊断价值。方法2018年1月~2020年12月间住院手术的CRC病人术中切除CRC组织标本及癌旁组织标本各88例;采用实时荧光定量PCR法检测所有组织E2F2 mRNA、EMR2 mRNA表达水平;用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化氢酶连结法(SP法)检测组织中E2F2蛋白、EMR2蛋白表达,分析其与临床病理特征的关系;ROC曲线分析E2F2 mRNA、EMR2 mRNA表达水平对CRC病人淋巴结转移的诊断价值。结果CRC组织中E2F2蛋白、EMR2蛋白阳性率(76.50%、65.50%)高于癌旁组织(20.45%、26.14%),差异有统计学意义(P<0.05);CRC组织E2F2蛋白、EMR2蛋白表达与病人TNM分期、淋巴结转移及浸润深度相关(P<0.05);与无淋巴结转移病人比较,有淋巴结转移病人CRC组织中E2F2mRNA、EMR2mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);绘制ROC曲线发现,CRC组织中E2F2mRNA、EMR2mRNA表达水平单独及联合诊断淋巴结转移的AUC分别为0.782、0.844、0.877,E2F2mRNA联合EMR2mRNA诊断淋巴结转移的AUC高于二者分别单独诊断(P<0.05)。结论E2F2、EMR2与CRC病人TNM分期、淋巴结转移及浸润深度相关,二者联合对淋巴结转移具有一定诊断价值。

E2F2和SDC4在急性胰腺炎患者中的表达及临床意义

目的探讨E2F转录因子2(E2F2)和多配体蛋白聚糖-4(SDC4)对急性胰腺炎患者病情评估及预后诊断的价值。方法将2018年4月至2020年4月西安市中心医院收治的45例轻症急性胰腺炎患者作为轻症组,56例重症急性胰腺炎患者为重症组;将同期20名来我院进行健康体检者作为对照组。比较各组研究对象的一般资料及临床特征;比较三组研究对象的E2F2、SDC4 m RNA和蛋白表达水平;分析E2F2、SDC4表达水平与急性胰腺炎患者JPN评分的相关性;分析血清SDC4、E2F2水平和JPN评分对急性胰腺炎的诊断价值。结果轻症组和重症组的腹痛、恶心呕吐发生率无明显差异(P>0.05);重症组的腹胀、全身性并发症发生率高于轻症组(P<0.05);轻症组和重症组的血清淀粉酶、脂肪酶、降钙素原、乳酸脱氢酶(LDH)以及C反应蛋白(CRP)水平高于对照组(P<0.01);重症组的血清淀粉酶、脂肪酶、降钙素原、LDH、CRP水平及JPN评分高于轻症组(P<0.01)。轻症组和重症组的E2F2、SDC4 m RNA和蛋白表达水平显著高于对照组,且重症组高于轻症组(P<0.05)。E2F2和SDC4表达水平与急性胰腺炎患者JPN评分呈正相关(P<0.001);E2F2表达水平与SDC4表达水平呈正相关(P<0.001)。血清E2F2和SDC4水平对急性胰腺炎的诊断价值较高,与JPN评分相似。结论E2F2和SDC4可作为评估急性胰腺炎患者发病及预后的潜在指标。

转录因子E2F2在恶性肿瘤生物学功能中研究进展

细胞周期相关转录因子E2F2(transcription factor E2F2)是细胞周期相关转录因子E2F家族成员之一,参与细胞周期、增殖、凋亡、迁移及侵袭等过程,近几年大量的研究发现E2F2在肿瘤细胞中过表达。因此,本文对E2F2在头颈部、消化、呼吸、泌尿生殖、骨肌系统以及乳腺等恶性肿瘤中的作用以及分子机制研究进行综述,为进一步研究E2F2的生物学功能和治疗靶点的确立提供参考。

miR-365通过靶向E2F2抑制胃癌细胞增生和肿瘤形成

目的研究胃癌相关miR-365调控胃癌细胞增生和肿瘤发生的功能,并通过验证下游靶分子E2F2研究miR-365的作用机制。方法采用Northern blotting法检测miR-365在小鼠各组织器官中的表达谱;real-time PCR检测miR-365在人胃癌组织中的表达变化;细胞实验和裸鼠成瘤实验研究miR-365过表达对胃癌细胞增生的抑制作用;生物信息学分析miR-365下游靶分子E2F2;构建E2F2 3’UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测miR-365对E2F2基因表达的调控和结合位点;Western blotting法检测miR-365对E2F2蛋白表达的调控作用。结果 miR-365在包括胃在内的多种消化道组织中表达;miR-365在人胃癌组织中表达显著下调;miR-365过表达显著抑制多种胃癌细胞的增生和裸鼠皮下的成瘤能力;E2F2是miR-365的靶分子,miR-365通过E2F2 3’UTR上的结合位点抑制E2F2的蛋白表达。结论 miR-365在人胃癌组织和小鼠胃癌模型中表达下调,并通过下游靶分子E2F2抑制胃癌细胞增生和肿瘤形成。

MicroRNA-218下调肝细胞癌中的E2F2基因表达抑制细胞增殖的研究

目的探讨MicroRNA-218(miRNA-218)下调肝细胞癌中的E2F2基因表达,从而抑制细胞增殖的机制。方法从细胞库中取得人类肝癌细胞株HepG2、Huh7、MHCC-97H、BEL-7402和正常肝细胞株L02。随后进行细胞培养和转移、反转录多聚酶链反应、免疫印迹分析、细胞增殖和集落形成试验、细胞周期分析和相应的统计学处理。结果 miR-218表达水平在癌细胞中下调。MTT生长曲线表明,当miR-218过度表达时(Huh7中的miR-218 P=0.001;在MHCC-97中的miR-218 P=0.013)细胞增殖能力明显降低。双荧光素酶实验证实,转染了miRNA-218模拟物的细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01),荧光酶报告基因含有E2F2野生型的第3′非翻译区。这些结果表明E2F2是miR-218的直接作用对象。与阴性对照组相比,转染了miR-218模拟物的Huh7和MHCC-97细胞株中的E2F2的相对mRNA表达显著下调(P<0.05)。结论 miR-218通过直接作用于E2F2基因的第3′非翻译区调节E2F2的表达,从而抑制HCC细胞增殖。

E2F2过表达使内耳感觉细胞重新进入细胞周期

目的将调控细胞周期和增殖的E2F2基因导入成年哺乳动物耳蜗中,使其过表达,从而使耳蜗内的终末静止细胞重新进入细胞周期,向可分裂细胞转变,达到实现增加毛细胞数量的目的。方法将人来源的E2F2基因构建到腺病毒载体上,通过圆窗导入耳蜗;全耳蜗铺片、耳蜗切片观察E2F2过表达后耳蜗细胞的形态特点,用BrdU标记及ki67免疫组化方法检测其增殖情况。结果腺病毒携带的E2F2基因通过圆窗导入耳蜗后,能够在耳蜗毛细胞和支持细胞上表达。特别是在螺旋神经节细胞表达更强。转染E2F2基因后,耳蜗内的细胞BrdU标记呈阳性结果,且有ki67表达。结论过表达E2F2有可能使处于终末期的耳蜗细胞重新进入细胞周期,此方法为毛细胞再生研究提供了新的思路。

人E2F2基因重组腺病毒的构建及在293细胞中的表达

目的构建含有人E2F2基因和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的腺病毒载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法根据已知的E2F2基因序列设计并合成相应的双链DNA,将其与酶切线性化的pDC315-EGFP载体片段连接,构建穿梭质粒pDC315-GFP-E2F2,并将其与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组产生重组腺病毒。对重组腺病毒进行扩增、纯化及滴度测定,用聚合酶链反应和测序方法验证穿梭质粒pDC315-GFP-E2F2穿梭质粒的构建;通过荧光显微镜和Westernblot(蛋白质印迹)方法,分别检测质粒pDC315-GFP-E2F2和重组腺病毒表达E2F2蛋白情况。结果经聚合酶链反应鉴定和测序分析,证实穿梭质粒pDC315-GFP-E2F2与设计一致;经荧光显微镜检测,分别由穿梭质粒pDC315-GFP-E2F2、重组腺病毒转染的HEK293细胞均可观察到GFP表达;经Western Blot检测出在72kDa～95kDa处有条特征带,其大小和E2F2-GFP融合蛋白(～76kDa)相吻合;滴度测定为1×1011PFU/ml(PFU,plaque forming unit,空斑形成单位)。结论成功构建了人E2F2基因重组腺病毒载体,并能在HEK293细胞中表达。

E2F2在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义

目的观察E2F2在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达水平,并分析其与HCC患者的性别、年龄、血清AFP浓度、病理学分级、TNM分期及预后的关系。方法下载并处理癌症基因组图谱(TCGA)中有关HCC的基因组学数据和所研究个体的临床资料,利用SPSS统计软件分析E2F2在HCC组织和癌旁组织中的表达水平,探讨E2F2表达水平与HCC患者性别、年龄、血清AFP水平、病理学分级、TNM分期等临床资料的关系以及对HCC患者预后情况的影响。结果E2F2在HCC组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);血清AFP浓度高的患者E2F2表达水平高于血清AFP水平低的患者,差异有统计学意义(P<0.05);病理学分级中Ⅲ~Ⅳ级HCC患者E2F2表达水平高于Ⅰ~Ⅱ级HCC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。E2F2高表达组患者整体生存率低于E2F2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论E2F2参与肝细胞肝癌的进展过程,是早期诊断肝细胞肝癌的肿瘤分子标志物及预后判断因子。

核转录因子E2F2在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨核转录因子E2F2在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测33例卵巢浆液性囊腺癌、11例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、13例卵巢浆液性囊腺瘤以及12例正常卵巢组织中E2F2蛋白的表达。结果:E2F2蛋白在卵巢浆液性囊腺癌、交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤以及正常卵巢组织中的阳性表达率分别为72.73%(24/33)、54.55%(6/11)、15.38(2/13)%和8.3%(1/11),E2F2蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织、交界性浆液性囊腺瘤组织中的阳性表达率明显高于在浆液性囊腺瘤、正常卵巢组织中的阳性表达率(P均<0.05),卵巢浆液性囊腺癌组的阳性表达率值虽然高于交界性浆液性囊腺瘤组,但是两组之间差异无统计学意义(P>0.05),浆液性囊腺瘤的阳性表达率接近正常卵巢组的2倍,但是两组之间的阳性表达率差异也无统计学意义(P>0.05);在卵巢浆液性囊腺癌组织中,E2F2蛋白的阳性表达率随手术病理分期的增加而增加(P<0.05),但与病理分级以及有无淋巴结转移无关(P均>0.05);在卵巢浆液性囊腺癌组织中,E2F2蛋白的表达水平随手术病理分期的增加、病理分级降低而增加(P均<0.05),与有无淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:在卵巢浆液性囊腺癌组织、交界性浆液性囊腺瘤组织中核转录因子E2F2呈现明显的高表达,且其表达水平与手术分期、病理分级相关,提示E2F2在卵巢癌的发生发展中起到促进作用。

miR-155靶向调控SP1、E2F2mRNA转录水平的功能验证

目的观察微小RNA155(miR-155)对端粒酶逆转录酶(h TERT)调控相关蛋白特异性蛋白1(SP1)及转录因子E2F2重组质粒表达的影响,为进一步研究miR-155调控肿瘤细胞h TERT表达的机制提供实验基础。方法采用生物信息学预测软件Target Scan和Miranda预测SP1和E2F2 mRNA 3'-UTR是否是人miR-155的作用靶点。针对SP1和E2F2 mRNA 3'-UTR设计互补的两条寡核苷酸,包括目标序列(即SP1、E2F2野生型序列)及突变序列(SP1-mu、E2F2-mu),构建SP1和E2F2 mRNA 3'-UTR报告基因载体p MIR-SP1、p MIR-E2F2、p MIR-SP1-mu和p MIRE2F2-mu。培养HEK-293细胞,采用脂质体法将SP1和E2F2的野生型和突变型p MIR-Luc质粒共转染HEK-293细胞24 h。将细胞分为SP1空白对照组、SP1目标序列组、SP1突变序列组、E2F2空白对照组、E2F2目标序列组、E2F2突变序列组,均加入0.2μg重组质粒、0.01μg对照质粒和0.375μL寡核苷酸,培养24 h。采用双荧光素酶报告基因系统检测双荧光素酶活性,以萤火虫荧光素酶活性值(F)/海肾荧光素酶活性值(R)比值评价miR-155与SP1及E2F2 mRNA 3'-UTR结合效果。结果在线预测结果示,SP1 mRNA 3'-UTR和E2F2 mRNA 3'-UTR均有与miR-155完全互补配对的序列,确定二者均为miR-155的靶基因。经鉴定,SP1和E2F2报告基因重组质粒构建成功。SP1目标序列组F/R低于SP1空白对照组及SP1突变序列组(P均<0.05),E2F2目标序列组F/R低于E2F2空白对照组及E2F2突变序列组(P均<0.05)。结论成功构建了SP1和E2F2报告基因重组质粒,证实miR-155能够靶向结合SP1和E2F2 mRNA 3'-UTR,在转录后水平抑制SP1和E2F2的表达。

E2F2在类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞中的表达研究

目的研究E2F2在类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞(RA FLs)中的表达,分析其表达与类风湿关节炎病理特征的关系,以及调控E2F2表达的机制。方法采用瞬时转染的方法将E2F2 siRNA转染入RA FLs后,应用RT-PCR法筛选干扰效率最高的siRNA,并应用MTS法检测干扰E2F2表达后对RA FLs增殖的影响,采用ELISA法检测E2F2下游基因表达的变化。采用RT-PCR法检测分别使用TNF-α和PDTC刺激RA FLs以及共同使用TNF-α和PDTC刺激RA FLs后E2F2的表达。通过染色质免疫沉淀法(Ch IP)检测调控E2F2表达的方式。结果在si E2F2后,与对照组相比E2F2在mRNA水平表达显著降低(P<0.01),细胞增殖能力减弱(P<0.05)。在RA FLs中TNF-α通过NF-κB信号通路调控E2F2表达。结论在RA FLs中E2F2存在高表达现象,并且E2F2的高表达参与RA的病变过程,TNF-α通过NF-κB信号通路调控E2F2表达,可做为治疗类风湿关节炎的新靶点。

miR-125a靶向E2F2抑制口腔鳞状细胞癌干细胞干性的初步研究

目的:研究miR-125a在口腔鳞状细胞癌(FOSCC)组织中的表达及与OSCC患者临床病例特征的关系,并探讨miR-125a对E2F2的靶向调控作用和对OSCC干细胞(CSCs)干性的影响。方法:qRT-PCR检测miR-125a在40例OSCC组织和20例正常口腔黏膜组织中的表达水平,并分析OSCC组织中miR-125a的表达与临床病例特征的关系。磁珠分选OSCC细胞系Cal-27中的CSCs。Western blot检测OCT4、Nanog、SOX2干性标志蛋白及miR-125a在CSCs中的表达;脂质体分别转染miR-125a mimic和对照NC 48 h后,MTS检测各组CSCs增殖能力,软琼脂克隆检测各组CSCs肿瘤球形成能力,Transwell实验检测各组CSCs转移能力。Targetscan7.1软件及双荧光素酶报告基因试验,研究miR-125a对E2F2基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-125a对CSCs中E2F2 mRNA表达的影响。结果:qRT-PCR结果显示miR-125a在OSCC组织中的表达显著低于正常口腔黏膜组织,其低表达与OSCC肿瘤直径大、TNM分期晚期及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。OCT4、Nanog、SOX2干细胞标志物在CSCs中表达显著上调;miR-125a在CSCs中的表达均显著低于OSCC细胞Cal-27和人口腔黏膜角化细胞HOK(P<0.05);转染miR-125a mimic后,CSCs细胞增殖、肿瘤球形成及转移能力均下降(P<0.05)。TargetScan7.1软件和双荧光素酶报告基因试验证实E2F2为miR-125a的靶基因,miR-125a mimic组E2F2 mRNA表达降低(P<0.05)。结论:miR-125a在OSCC组织和细胞系中均低表达,且低表达与肿瘤直径大、TNM分期晚期及淋巴结转移相关,miR-125a可能通过负调控E2F2抑制CSCs的干性。

miR-101-3p靶向E2F2调控黑色素瘤细胞增殖的分子机制探讨

目的探讨miR-101-3p靶向E2F转录因子2(E2F2)调控黑色素瘤细胞增殖的作用机制。方法使用GEPIA、OSskcm等数据库联合分析E2F2在黑色素瘤中的表达,并评估转录因子E2F2在黑色素瘤预后中的价值;利用短发夹RNA(shRNA)抑制黑色素瘤细胞MV3中E2F2表达后,分别采用PI染色和流式细胞术检测细胞周期的改变;Western blot实验检测细胞周期蛋白E(CyclinE)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达水平;免疫荧光实验检测细胞中自噬相关蛋白LC3B的表达水平;裸鼠荷瘤实验观察黑色素瘤在体内生长的变化。经miR-101-3p mimics处理后,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测MV3细胞中miR-101-3p的表达水平,同时利用qPCR和Western blot实验检测E2F2的表达水平;通过MTT、BrdU法检测MV3细胞增殖水平。结果E2F2表达升高的患者预后更差(P<0.05);与shGFP组相比,shE2F2组中处于G0/G1期的细胞比例显著增多(P<0.05),CyclinE和CDK2的表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3B荧光信号明显减少(P<0.05),体内黑色素瘤形成质量显著降低(P<0.05);采用miR-101-3p mimics处理后,MV3细胞中miR-101-3p的表达水平明显升高(P<0.05),E2F2的mRNA和蛋白表达均显著低于NC mimics处理组(P<0.05),同时MTT结果表明miR-101-3p mimics组MV3细胞的活力显著降低(P<0.05),BrdU标记试验结果显示miR-101-3p mimics组细胞中BrdU阳性信号明显减少(P<0.05)。结论miR-101-3p可靶向E2F2并抑制其表达,进而降低黑色素瘤细胞增殖水平。

E2F2表达水平与前列腺癌患者的预后及免疫浸润的相关性

【目的】探讨E2F2表达水平与前列腺癌患者的预后及免疫浸润的相关性。【方法】基于癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库,分析E2F2在前列腺癌中的表达情况,通过基因集富集分析和免疫浸润分析E2F2表达水平与前列腺癌患者预后的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析E2F2诊断前列腺癌的价值。【结果】E2F2在前列腺癌肿瘤组织中表达水平高于前列腺正常组织,差异有统计学意义(P<0.001);前列腺癌肿瘤组织E2F2表达水平高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。T_(3~4)分期的前列腺癌患者E2F2表达水平高于正常组织及T_(2)分期,N_(1)分期的E2F2表达水平高于正常组织及N_(0)分期,差异有统计学意义(P<0.05);不同M分期及不同预后患者E2F2表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,E2F2表达水平与前列腺癌患者的总生存率、无进展间隔均呈负相关(均P<0.05);E2F2表达水平与前列腺癌患者的疾病特异性生存率无显著相关性(P>0.05)。ROC曲线分析显示,E2F2诊断前列腺癌的AUC为0.731(95%CI为0.653~0.809)。Spearman相关性分析显示,E2F2表达水平与T辅助淋巴细胞2、T辅助淋巴细胞、树突状细胞、T细胞富集群呈正相关(均P<0.05);E2F2表达水平与自然杀伤细胞、肥大细胞富集群呈负相关(均P<0.05)。【结论】前列腺癌患者E2F2表达水平显著升高,E2F2过表达与预后不良及细胞免疫浸润密切相关。

MRI预测乳腺癌转录因子E2F2高表达的价值

目的探讨MRI诊断乳腺癌转录因子E2F2高表达的价值,以及进一步评估乳腺癌的生物侵袭性。方法该研究为横断面研究。回顾性分析2014年10月至2020年12月在南通大学第二附属医院病理诊断为乳腺癌的92例患者的临床及影像资料。患者均为女性,年龄32~82(56±11)岁,均接受MRI,包括T 1WI、T 2WI、扩散加权成像(DWI)和动态增强MRI。根据免疫组化结果将患者分为转录因子E2F2高表达组和E2F2低表达组。采用独立样本t检验、Mann-Whitney U检验或χ2检验比较2组患者的临床资料、MRI特征及病理学特征。将单因素分析中P≤0.1的特征纳入多因素logistic回归筛选预测乳腺癌转录因子E2F2高表达的独立危险因素。结果92例患者中E2F2高表达组68例、E2F2低表达组24例。2组在瘤周水肿、时间-信号强度曲线类型构成比、雌激素受体表达、人表皮生长因子受体2表达、脉管内癌栓及分子分型构成比方面差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素logistic回归分析显示仅瘤周水肿(OR=7.061,95%CI 1.837~27.144,P=0.004)是预测乳腺癌转录因子E2F2高表达的独立危险因素。结论MRI上显示瘤周水肿是预测乳腺癌转录因子E2F2高表达的独立危险因素,其与乳腺癌的侵袭性有关。

E2F2和Ki67在腮腺黏液表皮样癌的表达及其临床意义

目的探讨人腮腺黏液表皮样癌(MEG)中E2F2和Ki67的表达及意义。方法采用RT-PCR和Western blot方法检测20例腮腺MEG手术新鲜标本(A组)和20例正常腮腺组织(B组)中E2F2和Ki67 mRNA和蛋白的表达。结果 A组E2F2和Ki67的mRNA表达均高于B组[(14.16±1.18)×10^(-2) vs.(1.09±0.24)×10^(-2) 和(12.04±0.65)×10^(-4) vs.(0.58±0.29)×10^(-4)](P<0.05)。A组E2F2和Ki67的蛋白表达高于B组(P<0.05)。结论 E2F2和Ki67在腮腺MEG中高表达,对MEG临床诊治具有一定的意义。

linc00346和E2F2在肝癌中的表达及其与预后的关系

目的研究linc00346和E2F2在肝癌中表达特征以及对肝癌患者预后的影响。方法从癌症基因组图集(the cancer genome atlas,TCGA)下载肝癌表达谱数据,肝癌与癌旁组织中linc00346和E2F2表达差异分析采用配对t检验,肝癌组织linc00346和E2F2共表达分析采用Pearson相关,linc00346和E2F2对患者预后分析采用Log-Rank检验以及Cox回归。结果肝癌组织中linc00346和E2F2表达水平分别是癌旁组织的2.24倍和3.72倍,差异均有统计学意义(均有P<0.05)。linc00346和E2F2存在共表达关系,相关系数r为0.20(P<0.001)。单因素Cox回归发现linc00346和E2F2高表达组患者死亡风险分别是低表达患者的1.77倍(95%CI:1.23~2.55)和2.19倍(95%CI:1.51~3.17)。多重Cox回归结果显示E2F2表达能够影响肝癌患者的预后。结论 linc00346和E2F2在肝癌组织中高表达,肝癌患者linc00346和E2F2高表达其预后效果差,这为探索抗肿瘤治疗提供一个新的潜在靶点,具有重要的临床意义。

E2F2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探究E2F2基因在子宫内膜癌中的表达及与生物学行为的相关性.方法 选择2015年3月至2018年4月本院妇科获取的30例正常子宫内膜标本、25例子宫内膜增生标本及73例子宫内膜癌组织纳入研究.采用RT-PCR及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法测定3种组织E2F2 mRNA表达情况,并分析子宫内膜癌组织E2F2蛋白表达与临床病理参数之间的关系.结果 子宫内膜癌组织E2F2 mRNA表达量高于子宫内膜增生组织及正常子宫内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);正常子宫内膜、子宫内膜增生及子宫内膜癌组织E2F2蛋白阳性表达率分别为10.00%、16.00%及52.05%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移及肌层浸润≥1/2的子宫内膜癌患者E2F2蛋白阳性表达程度显著高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移及肌层浸润<1/2的患者(P<0.05).结论 子宫内膜癌组织E2F2表达上调,其表达程度与患者FIGO分期、分化程度、淋巴结转移及肌层浸润相关.

E2F2基因在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长与代谢的影响

目的探讨转录因子E2F2在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞系U87生长与代谢的影响。方法使用中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库分析E2F2基因在胶质瘤组织中的表达水平。在胶质瘤细胞系U87中用RNA干扰技术敲低E2F2表达后,采用RT-PCR与Western blot分别验证E2F2mRNA与蛋白的表达变化。采用流式细胞术检测细胞周期,CCK8法检测细胞增殖变化,糖检测分析试剂盒分别检测细胞葡萄糖消耗量与乳酸生成量,RT-PCR与Western blot验证E2F2下游基因CCNE1的表达。结果胶质瘤组织中E2F2的表达高于正常脑组织。转染si-E2F2后,U87细胞E2F2表达水平明显下降,细胞周期阻滞于G1期(P<0.05),细胞生长受到抑制(P<0.05),细胞的葡萄糖消耗量和乳酸生成量降低(P<0.05),其下游蛋白CCNE1表达下降(P<0.05)。结论胶质瘤中E2F2表达明显增高;抑制E2F2表达可以明显抑制胶质瘤细胞增殖及代谢能力。

osa-miR168a-5p靶向调节人源ADD1及E2F2基因表达的研究

目的探究植物osa-miR168a-5p靶向调节人源相关基因表达的影响。方法采用TargetScan预测osa-miR168a-5p的靶基因,并筛选相关靶基因进行后续验证。构建靶基因mRNA 3'-UTR荧光素报告基因及相应的突变体,采用双荧光素酶报告基因活性分析系统验证osa-miR168a-5p与靶基因的关系。结果利用Targetscan预测的osa-miR168a-5p靶基因结果显示,ADD1与E2F2mRNA3'-UTR区域均存在osa-miR168a-5p结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,使用osa-miR168a-5p mimics内源性增加osa-miR168a-5p能够抑制ADD1及E2F2报告基因的表达,将ADD1及E2F2 mRNA 3'UTR区与osa-miR-168a-5p的结合位点突变后,内源性osa-miR-168a-5p增加所引起的报告基因表达下调的作用消失。结论osa-miR168a-5p能够直接调节人源ADD1及E2F2基因表达,因此食物中的osa-miR168a进入人体很可能直接靶向人源ADD1及E2F2基因发挥相应的生物学效应。