原癌基因Pokemon及核转录因子E2F3在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨POK红系髓性致癌因子(POK erythroid myeloid ontogenic factor,Pokemon)及核转录因子E2F3(E2Ftranscrip tion factor 3)在喉鳞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Max Vision二步法观察61例喉鳞癌组织及46例癌旁正常喉黏膜组织中Pokemon及E2F3的表达,并结合患者年龄、性别、原发部位、TNM分期、临床分期及预后之间的关系进行分析。结果 Pokemon及E2F3在喉鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常喉黏膜组织中的阳性表达率(P<0.001);颈淋巴结转移(N+)、中低分化、临床晚期(Ⅲ+Ⅳ)喉鳞癌患者中Pokemon及E2F3表达强度增强(P<0.05);Pokemon及E2F3阳性表达患者的5年累积生存率较阴性表达患者低(P<0.05)。结论 Pokemon与E2F3在喉鳞癌组织中高表达,并与其预后不良相关。两者可能在喉鳞癌发生及恶性进展过程中发挥重要作用,有望成为喉鳞癌发病机制及分子靶向治疗的新指标。

E2F3和AR在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:检测E2F3、AR在前列腺组织中的表达水平,分析两者的表达与前列腺癌病理分级和临床分期的关系。方法:利用免疫组织化学方法检测50例前列腺癌组织、50例良性前列腺增生组织中E2F3、AR蛋白的表达;采用SPSS13.0进行统计学处理。结果:E2F3在良性前列腺增生组织、前列腺癌组织中的阳性表达率分别为20.00%(10/50)及66.00%(33/50),差异有统计学意义(P<0.05),且在前列腺癌组织中的表达与肿瘤临床分期和病理恶性程度呈正相关(rs分别为0.471和0.329,P<0.05)。前列腺癌组织中AR表达水平低于良性前列腺增生组织(P<0.05),且在前列腺癌组织中的表达与肿瘤临床分期和病理恶性程度呈负相关(rs分别为-0.403和-0.391,均P<0.01)。E2F3在前列腺癌组织中的表达与AR在前列腺癌组织中的表达无相关关系(rs=-0.017,P>0.05)。结论:E2F3在前列腺癌的发生、发展中起着重要作用。

浸润性膀胱癌组织中E2F3表达与CD8^+ T细胞浸润数量的相关性分析

目的探讨膀胱癌组织中E2F转录因子3(E2F3)表达与CD8^+T细胞浸润的特点及其与膀胱癌恶性生物学行为之间的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测110例不同病理分期、分级的膀胱癌组织和相应正常膀胱组织中E2F3的表达情况及CD8^+T细胞浸润特征,Western blot法检测82例膀胱癌组织及相应正常膀胱组织中E2F3、CD8蛋白水平,直线相关分析方法分析E2F3表达与CD8^+T细胞浸润的相关性。结果膀胱癌组织中E2F3高表达,膀胱癌组织中E2F3表达随肿瘤分期、分级增加逐步增高,而相应肿瘤内CD8^+T细胞浸润数目逐步减少,E2F3高表达组肿瘤内CD8^+T细胞浸润数目显著低于E2F3低表达组。E2F3阳性率及CD8^+T细胞的浸润数量减少与肿瘤病理分期、分级、肿瘤大小、伴有淋巴结转移或远处转移等肿瘤临床侵袭性指标密切相关。相关性分析显示肿瘤E2F3表达水平与肿瘤内CD8^+T细胞浸润数目呈负相关。生存分析表明E2F3高表达患者术后5年预后更差。结论膀胱癌组织中E2F3水平与肿瘤侵袭性关系密切,与肿瘤内CD8^+T细胞浸润数量呈负相关。

miR-3529-3p通过下调E2F3基因表达抑制卵巢癌SKOV-3细胞增殖的机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-3529-3p抑制卵巢癌SKOV-3细胞增殖的作用机制。方法研究时间为2021年1月至5月。分别转染NCmimic(NC组)和miR-3529-3p mimic(miR-3529-3p组)至卵巢癌SKOV-3细胞。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染效率。CCK-8法检测每组细胞的光密度值。集落形成实验检测每组细胞的集落形成数。miRNAMap数据库预测miR-3529-3p的靶基因。qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测靶基因的表达。采用独立样本t检验。结果miR-3529-3p组和NC组SKOV-3细胞中miR-3529-3p表达分别为(1.01±0.07)和(9.55±1.50),NC组miR-3529-3p表达显著低于miR-3529-3p组(t=5.68,P<0.01)。CCK-8法显示miR-3529-3p过表达抑制SKOV-3细胞增殖(P<0.05)。与NC组相比,miR-3529-3p组集落形成数显著减少(P<0.05)。miR-3529-3p的靶基因可能是E2F转录调节因子3(E2F transcription factor 3,E2F3)。与NC组比较,miR-3529-3p组SKOV-3细胞中E2F3基因表达明显降低(P<0.01)。结论miR-3529-3p可抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,其可能的分子机制是通过靶向抑制E2F3表达实现。

E2F3、MCM2及HIF-1α在结直肠癌中的表达及其相关性

目的:探讨转录因子E2F3、微型染色体维持蛋白(minichromosome maintenance proteins 2,MCM2)及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α)在结直肠癌、结直肠腺瘤、大肠正常黏膜组织中的表达及他们与结直肠癌临床病理因素之间的关系.方法:收集2007-01/2008-12佳木斯大学附属第一医院普通外科、肿瘤外科及消化内科肠镜室行手术切除并经病理证实的结直肠癌病理标本40例.应用免疫组织化学SP方法检测E2F3、MCM2及HIF-1α在结直肠癌(40例)、结直肠腺瘤(20例)及大肠正常黏膜组织(20例)中的表达.结果:E2F3的阳性表达率在结直肠腺瘤组织与结直肠癌组织中均显著高于正常组织(30.0%vs0.0%,57.5%vs0.0%,P<0.01).MCM2的阳性表达率在结直肠腺瘤组织与结直肠癌组织中均显著高于正常组织(45.0%vs5.0%,87.5%vs5.0%,P<0.01);HIF-1α的阳性表达率在结直肠腺瘤组织与结直肠癌组织中均高于正常组织(30.0%vs5.0%,67.5%vs5.0%,P<0.05).E2F3、MCM2、HIF-1α的表达水平与结直肠癌的浸润程度、淋巴结转移、Dukes分期、组织学分级相关(均P<0.05),与患者的年龄、性别及肿瘤的大小则无相关性.在结直肠癌组织中E2F3与MCM2的表达呈正相关(r=0.440,P<0.01),与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.375,P<0.05);HIF-1α与MCM2的表达呈正相关(r=0.383,P<0.05).结论:E2F3、MCM2及HIF-1α在结直肠癌组织中均为高表达且呈正相关,提示在结直肠癌的发展过程中,三者可能通过各自不同功能作用于肿瘤细胞,还可能通过一种或多种途径协同促进肿瘤的发展演变.检测结直肠癌组织中三者的表达,可为结直肠癌早期诊断、评价预后提供理论依据,为防癌普查及基因靶向治疗提供一种新的途径.

脑膜瘤组织中PTTG1、E2F3、EphA2蛋白水平与患者预后的关系研究

目的探讨脑膜瘤组织中垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)、E2F转录因子3(E2F3)和上皮细胞激酶(EphA2)蛋白水平与患者预后的关系。方法选择65例脑膜瘤患者作为观察组,另取同期收治的63例脑膜瘤旁组织作为对照组,测定PTTG1、E2F3、EphA2蛋白在脑膜瘤组织和瘤旁组织中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的相关性。结果观察组PTTG1表达水平,E2F3和EphA2表达阳性率显著高于对照组(P<0.01);病理分级较高的脑膜瘤中PTTG1、E2F3、EphA2蛋白表达强度显著增强,与病理分级呈正相关(P<0.05);PTTG1、E2F3、EphA2蛋白表达阴性组3年无进展生存期显著高于阳性组(P<0.01)。结论脑膜瘤组织中PTTG1、E2F3、EphA2蛋白表达水平显著高于脑膜瘤旁组织,且与病理分级正相关,且阴性表达的患者预后较好。

基于miR-138-5p/E2F3信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响

目的:基于微小RNA-138-5p(miR-138-5p)/E2F转录因子3(E2F3)信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响。方法:设H1299细胞组、氟尿嘧啶组(25μg·ml-1)、柠檬苦素低、高剂量组(40,80μg·ml-1),以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,Transwell小室测定细胞侵袭迁移水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Westernblot)法测定细胞miR-138-5p、E2F3 mRNA及蛋白水平。结果:与H1299细胞组比较,氟尿嘧啶组、柠檬苦素低、高剂量组光密度(OD)值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与氟尿嘧啶组比较,柠檬苦素低剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著降低(P<0.05);柠檬苦素高剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.05)。柠檬苦素高、低剂量组间各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:柠檬苦素能抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖、侵袭迁移,促进非小细胞肺癌H1299细胞凋亡;其机制可能与柠檬苦素通过促进H1299细胞miR-138-5p表达,抑制E2F3 mRNA和蛋白表达,进而抑制miR-138-5p/E2F3通路的激活有关。

miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路抑制膀胱癌T24和EJ细胞的增殖

目的研究微小RNA-503-5p(miR-503-5p)对膀胱癌T24细胞和EJ细胞生长的影响和机制。方法 T24细胞和EJ细胞转染miR-503-5p模拟物或阴性对照微小RNA(miR-NC)并验证转染效率,生物信息学软件预测miR-503-5p的靶基因。通过荧光实时定量PCR检测miR-503-5p靶基因E2F转录因子3(E2F3)及下游基因mRNA的表达水平,Western blot法检测视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)/E2F信号通路蛋白E2F3、细胞周期蛋白E(cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、Rb和磷酸化的Rb(p-Rb)蛋白水平,流式细胞术检测膀胱癌细胞周期的变化,MTT法和平板克隆形成实验检测膀胱癌细胞的增殖能力。结果转染miR-503-5p模拟物后,膀胱癌细胞中miR-503-5p的水平显著增加。过表达miR-503-5p可明显降低膀胱癌细胞中E2F3mRNA及Rb/E2F信号通路基因的表达水平,将膀胱癌细胞周期阻滞于G0/G1期,膀胱癌细胞的增殖能力明显降低。结论过表达miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路的转导,抑制膀胱癌细胞的增殖。

非小细胞肺癌组织中miR-217、E2F3的表达变化及其与预后的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小RNA(miRNA)-217、E2F转录因子3(E2F3)的表达变化及其与预后的关系。方法选取104例接受姑息或根治性切除的NSCLC患者,采用实时荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中的miR-217、E2F3 mRNA。分析miR-217、E2F3表达与NSCLC患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier曲线绘制不同miR-217、E2F3 mRNA表达NSCLC患者术后5年生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后不良影响因素。结果与NSCLC癌旁组织比较,癌组织中miR-217表达降低,E2F3 mRNA表达升高(P均<0.05)。NSCLC癌组织中miR-217与E2F3 mRNA表达呈负相关,与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。中位随访时间49个月,术后5年总生存率为32.69%,miR-217高表达、E2F3 mRNA低表达患者术后5年总生存率均高于miR-217低表达、E2F3 mRNA高表达患者(P均<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=1.534)、淋巴结转移(HR=1.183)、E2F3 mRNA≥2.613(HR=1.440)为NSCLC患者预后不良独立危险因素,miR-217≥0.464(HR=0.715)为独立保护因素(P均<0.05)。结论NSCLC组织中miR-217表达下调,E2F3 mRNA表达上调,与TNM分期、淋巴结转移有关,二者可能共同参与影响NSCLC患者预后。

miR-144-3p靶向调控E2F3抑制膀胱癌T24细胞的增殖与侵袭

目的:探讨miR144-3p在膀胱癌组织及细胞中的表达及其对T24细胞增殖与侵袭的影响。方法:选用2018年2月至2018年12月空军军医大学唐都医院手术切除的36例膀胱癌组织及10例正常膀胱上皮组织标本,以及人膀胱癌细胞株T24和正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1,用qPCR法检测膀胱癌组织和细胞中miR144-3p的表达水平。用脂质体转染技术分别将miR-144-3p mimics、miR-NC等转染进T24细胞,通过MTT法、流式细胞术和Transwell小室法分别检测T24细胞的增殖、细胞周期和侵袭能力。利用TargetScan软件预测miR-144-3p与E2F转录因子3(E2F transcription factor 3,E2F3)的结合位点,用双荧光素报告基因实验验证miR-144-3p与E2F3的靶向关系,WB实验检测细胞中miR-144-3p与E2F3的表达水平。结果:miR-144-3p在膀胱癌组织和细胞中低表达(均P<0.01),其中肌层浸润性膀胱癌组织中的表达水平低于非肌层浸润膀胱癌组织(P<0.05)。双荧光素报告基因实验证实,miR-144-3p与E2F3表达存在靶向调节关系。miR-144-3p过表达可抑制T24细胞的增殖和侵袭能力(均P<0.01),同时下调E2F3的表达水平(P<0.01);当上调E2F3表达时,对细胞侵袭和增殖的抑制作用则被逆转。结论:miR-144-3p在膀胱癌组织中低表达,其通过靶向调控E2F3表达从而抑制膀胱癌细胞的增殖与侵袭。

前列腺癌组织中miRNA-34c、E2F3的表达变化及意义

目的探讨前列腺癌组织中微小RNA-34c(miR-34c)与E2F转录因子3(E2F3)的表达变化及其临床意义。方法用RT-PCR法检测56例前列腺癌组织及40例良性前列腺增生组织中miR-34c、E2F3 mRNA表达,分析miR-34c、E2F3 mRNA表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系,分析miR-34c与E2F3 mRNA表达的相关性。结果前列腺癌组织中miR-34c的相对表达量低于前列腺增生组织(t=2. 495,P=0. 011),E2F3相对表达量高于前列腺增生组织(t=-3. 780,P=0. 000)。miR-34c、E2F3 mRNA表达与Gleason评分、TNM分期有关(P均<0. 05),而与年龄、初始前列腺特异抗原水平及有无转移灶无关(P均> 0. 05)。前列腺癌组织中miR-34c与E2F3 mRNA表达呈负相关(r=-0. 694,P=0. 000)。结论前列腺癌组织中miR-34c呈低表达、E2F3呈高表达;二者可能协同参与前列腺癌的发生发展。

E2F3在浸润性膀胱癌中的表达关系以及对患者生存的影响

目的 探讨转录因子家族（E2F）3以及Retinoblastoma（RB）在膀胱癌组织中的表达情况,并明确RB通路失活与E2F3高表达在膀胱癌组织中的关系及对膀胱癌患者预后的影响.方法 通过免疫组织化学法验证E2F3和RB在112例膀胱癌组织中的表达,分析其表达水平与患者的临床分期、病理分级之间的关系.结果 在112例不同分期的膀胱癌组织样本中,有83例膀胱癌样本表现为RB的失活,这种表达差异具有统计学意义（P＜0.01）,E2F3高表达只出现在浸润性膀胱癌中（x2 =8.67,P＜0.01）,并且与RB失活关系密切（r=0.031,P=0.014）.生存曲线显示,E2F3过表达对膀胱癌患者预后有着一定的影响（P＜0.05）.结论 E2F3在浸润性膀胱癌中高表达,并且与RB失活存在着密切的关系,同时E2F3高表达的膀胱肿瘤患者预后更差.

胃癌患者血浆中miR-203a及其靶基因的表达差异与临床意义

目的探讨血浆miR-203a及其靶基因在胃癌患者手术前后的表达变化及其与临床病理的相关性。方法选取在昆明医科大学第一附属医院接受手术治疗的胃癌患者和健康体检者各120例,收集胃癌患者手术前后的血浆和健康志愿者的血浆。利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血浆中miR-203a、E2F转录因子3(E2F3)、毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ATM)和转录因子蜗牛同源物2(SNAI2)的表达量。统计分析其与胃癌患者病理特征和手术疗效的相关性。结果与健康对照组比较,胃癌患者血浆中miR-203a的表达量显著上升(P<0.01),而E2F3、ATM和SNAI2的表达量则显著下降(P<0.01)。手术后,miR-203a的表达量显著下调(P<0.01),而E2F3、ATM和SNAI2的表达量则显著上调(P<0.05)。miR-203a、E2F3、ATM和SNAI2的相对表达量与胃癌分化程度和TNM分期均显著相关(P<0.05)。miR-203a低表达组患者的术后生存率优于高表达组(P<0.05),而E2F3、ATM和SNAI2高表达组患者的术后生存率较高。结论胃癌患者血浆中miR-203a与其靶基因的表达呈负调控关系,手术前后表达差异显著,与临床病理特征和治疗预后有显著相关性。

PANTR1在乳腺癌中的表达特征及其对细胞体外增殖和侵袭能力的影响

目的探究POU3同源盒基因3(POU3F3)相关长链非编码RNA PANTR1在乳腺癌中的表达特征,及其与乳腺癌细胞体外增殖、侵袭能力的关系。方法临床收集48例乳腺癌患者的肿瘤组织及癌旁组织。将MCF-7细胞分为空白组和过表达组,并用分别介导pGEX-Blank 2μg及pGEX-PANTR1载体2μg进行转染。将MDA-MB-231细胞分为对照组、干扰组和回复组,并用Lipofectamine 10μL分别介导pGEX-Blank 1μg+pSilencer2.1-U61μg,pGEX-Blank 1μg+pSilencer2.1-siPANTR11μg,pGEX-Pum11μg+pSilencer2.1-siPANTR11μg进行转染。用逆转录聚合酶链反应检测组织及细胞中PANTR1 mRNA的表达水平,用CCK-8实验检测细胞增殖能力,用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果乳腺癌组织中PANTR1 mRNA相对表达量为0.017±0.001,显著高于癌旁组织的0.006±0.001,差异有统计学意义(P<0.01)。空白组、过表达组、对照组、干扰组和回复组的PANTR1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.11,17.98±1.23,1.00±0.09,0.22±0.04和0.27±0.04,96 h时细胞相对增殖能力分别为12.97±0.82,17.74±1.36,18.33±1.64,13.78±1.02和22.79±2.08,侵袭细胞数分别为(46.32±5.58),(98.60±6.27),(53.74±6.11),(22.39±3.07)和(68.35±7.49)个,过表达组的上述指标与空白组比较,干扰组的上述指标与对照组比较,回复组的上述指标与干扰组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PANTR1在乳腺癌组织中高表达,可激活Pum1/E2F3通路及提高乳腺癌细胞的增殖、侵袭能力。