微RNA-142-5p与E2F7基因的关系及其影响胰腺癌增殖、侵袭、转移的机制研究

目的探讨微RNA-142-5p(miRNA-142-5p)与E2F7基因的关系及其影响胰腺癌(PC)增殖、侵袭、转移的机制。方法选择2016年12月至2019年1月于新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的35例PC患者的癌及癌旁组织,采用实时定量PCR检测并比较PC患者癌及癌旁组织中miR-142-5p的表达情况,比较人PC细胞系(CFPAC-1、SW1990、Capan-1、PANC-1)和正常胰管上皮细胞系(HPDE)中miR-142-5p的表达情况。采用实时定量PCR检测并比较PC患者癌及癌旁组织中E2F7 mRNA的差异,比较Capan-1、PANC-1细胞E2F7 mRNA的差异,采用蛋白质印迹法比较Capan-1、PANC-1细胞中E2F7蛋白的差异。通过Starbase数据库预测miR-142-5p与E2F7基因的结合位点,同时设置转染miR-142-5p模拟物的miR-142-5p mimics组和转染无意义序列的NC组,两组分别共转染E2F7基因野生型(wt)及突变体(mut),采用双萤光素酶实验验证miR-142-5p与E2F7基因的靶向关系。将Capan-1细胞设为NC组、si-E2F7组、E2F7组及miR-142-5p mimics+E2F7组,采用CCK-8、流式细胞仪、划痕实验、Transwell实验观察各组细胞活力、凋亡、迁移、侵袭情况。选取20只雄性BALB/c裸鼠(4~6周龄)用于建立裸鼠异种移植模型,采用随机数字表法将其分为NC裸鼠组、si-E2F7裸鼠组、E2F7裸鼠组及miR-142-5p mimics+E2F7裸鼠组,每组5只。将5×10^(6)个相应处理的PC细胞与100μl的人工基膜混合后皮下注射于裸鼠前腿下方的皮肤,于注射后第30天处死四组动物,比较四组肿瘤体积及重量,采用苏木精-伊红染色观察肿瘤转移能力。结果PC患者癌组织miR-142-5p表达低于癌旁组织,E2F7 mRNA表达高于癌旁组织,CFPAC-1、SW1990、Capan-1、PANC-1细胞miR-142-5p表达低于HPDE细胞(P<0.05)。Capan-1、PANC-1细胞E2F7 mRNA及其蛋白表达高于HPDE细胞(P<0.05)。Starbase数据库分析结果显示,miR-142-5p与E2F7基因的3’非翻译区存在互补。双萤光素酶报告基因结果显示,共转染E2F7-wt后,miR-142-5p mimics组萤光素酶活性低于NC组(P<0.05);共转染E2F7-mut后,miR-142-5p mimics组萤光素酶活性与NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。E2F7组E2F7 mRNA及其蛋白表达、细胞活力、划痕愈合面积、相对侵袭细胞数均高于NC组,细胞凋亡率低于NC组(P<0.05)。miR-142-5p mimics+E2F7组E2F7mRNA及其蛋白表达、细胞活力、划痕愈合面积、相对侵袭细胞数均低于E2F7组,细胞凋亡率高于E2F7组(P<0.05)。E2F7裸鼠组肿瘤体积、重量高于NC裸鼠组,miR-142-5p mimics+E2F7裸鼠组肿瘤体积、重量低于E2F7裸鼠组(P<0.05)。苏木精-伊红染色显示,E2F7裸鼠组肿瘤具有较强的转移能力,而miR-142-5p mimics+E2F7裸鼠组肿瘤的转移能力较差。结论miR-142-5p可能通过靶向E2F7基因影响PC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。

干扰E2F7对C2C12成肌细胞增殖的影响

【目的】探究转录因子E2F7在骨骼肌细胞发育过程中的作用。【方法】以C2C12成肌细胞为研究对象,通过设计小干扰RNA干扰C2C12成肌细胞中E2F7的表达,分为干扰组和对照组,并利用RT-PCR、CCK-8和EdU等技术检测在C2C12成肌细胞中干扰E2F7后对成肌细胞增殖的影响。【结果】E2F7 mRNA表达水平在C2C12成肌细胞增殖期极显著高于分化期(P<0.01);与对照组相比,干扰组的细胞活率和新生细胞比率皆极显著高于对照组(P<0.01);干扰E2F7显著提升了C2C12成肌细胞中Cyclin E的表达水平(P<0.05),极显著促进Cyclin D和CDK4的表达(P<0.01);并且干扰E2F7可显著促进E2F2 (P<0.05)和极显著促进E2F1及E2F3的表达(P<0.01),同时极显著促进与成肌细胞增殖相关microRNAs (miR-7、miR-25、miR-27和miR-92a)的表达(P<0.01)。【结论】干扰E2F7可促进C2C12成肌细胞的增殖,E2F7可能是通过调控经典E2Fs信号通路和成肌细胞增殖相关microRNA发挥作用。

低浓度MNNG诱发细胞周期相关基因DK6及E2F7表达研究

目的研究低浓度N-甲基-N′-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞的细胞周期相关基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的基因及其调控机制。方法用实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在0.2μmol/L MNNG处理后细胞周期相关基因CDK6及E2F7基因表达的改变。数据用AB I公司的SDS2.1软件分析。结果MNNG处理后,细胞周期相关基因CDK6及E2F7表达显著下调(P<0.05)。结论低浓度MNNG攻击可使人羊膜FL细胞周期发生异常。

miR-26a通过调控E2F7、Myc抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力

目的:研究miR-26a对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-26a调控增殖与迁移的可能机制。方法:应用实时荧光定量PCR法(QPCR)检测乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞中miR-26a的表达水平,并检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-26a与E2F7 mRNA的表达水平。应用脂质体介导的方法,以miR-26a mimics与E2F7 siRNA瞬时转染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-26a表达水平,Western blot法检测E2F7、Myc蛋白的表达水平。MTT法检测MDAMB-231细胞的增殖能力,划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力。结果:乳腺癌细胞中miR-26a的表达水平均低于正常乳腺细胞MCF-10A,且三阴型乳腺癌细胞表达水平降低最明显。三阴型乳腺癌组织中miR-26a相对于正常乳腺组织表达减低,而E2F7 mRNA表达则显著升高。miR-26a mimics转染后miR-26a表达水平显著升高,miR-26a过表达可抑制E2F7、Myc蛋白的表达;E2F7 siRNA转染后E2F7表达水平减低,Myc蛋白表达亦减低。MTT实验结果示miR-26a过表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,划痕实验示miR-26a过表达可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力。结论:miR-26a可能通过抑制E2F7、Myc调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与迁移能力。

基于TCGA数据库分析E2F7在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:通过数据挖掘分析E2F7在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织中的表达特征及临床意义。方法:基于GEPIA、LinkedOmics数据库分析E2F7在ccRCC中的差异性表达及其与患者预后的关系。应用WebGestalt工具分析与E2F7表达相关的基因。结果:E2F7 mRNA在ccRCC组织中表达水平高于正常肾组织。Linkedomics数据库分析显示E2F7 mRNA在ccRCC病理分期中存在表达差异(P<0.05),且随着病理分期的升高,表达水平有上调趋势。E2F7 mRNA在不同T、M、N分期(P<0.05)中存在差异性表达。生存分析表明,E2F7的表达水平与ccRCC患者的总体生存率(Logrank P=0.023)与无复发生存率(Logrank P=0.041)显著相关,此外,E2F7表达水平与BUB1B、CDC6、CCNE2、CCNE1(r分别为0.8277、0.7204、0.6778、0.6125,P均<0.01)基因呈显著正相关,与PINK1、KAT5、HSD17B8(r分别为-0.5110、-0.5084、-0.5029,P均<0.01)基因呈显著负相关。E2F7表达相关基因富集分析与DNA复制、细胞周期以及NF-kappa B信号通路(NF-kappa B signaling pathway)相关。结论:在ccRCC中E2F7的表达与患者的病理分期、T分期、N分期、M分期及预后有一定的相关性,因此E2F7可能成为ccRCC的预后标志物及潜在治疗靶点。

肝细胞癌中转录因子E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响

探讨肝细胞癌(HCC)中非典型性E2F家族成员E2F7在肝癌细胞生长、分化中的作用及可能涉及的分子机制.本研究运用实时荧光定量PCR检测38例原发性肝细胞癌及对应的癌旁组织中E2F7基因mRNA的表达情况;分别通过基因过表达和RNA干扰技术上调或下调E2F7基因表达,并运用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肝癌细胞株MHCC-H中β-catenin及其靶基因cmyc的表达情况;双荧光素酶报告基因系统检测E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响;核浆分离实验检测过表达E2F7基因对β-catenin入核的影响;免疫共沉淀实验检测异位表达E2F7与内源β-catenin的相互作用.结果显示,肝细胞癌组织中E2F7基因的表达量显著高于相应的癌旁组织(P<0.001);转录因子E2F7可与β-catenin相互作用并促进β-catenin进入细胞核.转录因子E2F7可以促进Wnt/β-catenin信号通路的活性.

利用TCGA数据集分析E2F7在肺腺癌中的表达及临床意义

目的研究转录因子E2F7在肺腺癌及其癌旁组织中的表达及临床意义。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载337例肺腺癌组织(肿瘤组)与59例癌旁组织(癌旁对照组)RNAseq数据及对应的肺腺癌患者临床数据,对数据中E2F7表达进行分析处理。分析比较E2F7表达与肺腺癌临床病理特征的相关性及对预后的影响并通过COX风险比例模型评估肺腺癌患者预后的独立危险因素。结果E2F7在肿瘤组中的表达水平高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P<0.05),T分期、N分期以及Stage分期是E2F7表达的相关因素(P<0.05),生存分析显示肺腺癌中高表达E2F7的患者预后差(P<0.05),多因素COX风险比例模型结果显示,高E2F7表达水平、Stage分期是肺腺癌患者预后差的独立危险因素(P<0.05)。结论E2F7可能通过多种途径促进肺腺癌的发生、发展,进而影响肺腺癌患者的预后生存,因此,E2F7可作为肺腺癌患者的预后标志物或潜在治疗靶点。

E2F7mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究E2F7在胃癌组织中的表达情况，探讨其与胃癌患者临床病理参数及预后的关系。方法随机收集45例胃癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织，应用实时荧光定量PCR法检测其E2F7mRNA表达水平。应用免疫组化法检测93例患者癌组织及对应癌旁组织中E2F7蛋白表达水平，并分析E2F7与患者临床病理参数及术后生存时间的关系。结果实时荧光定量PCR结果显示，胃癌组织中E2F7mRNA表达水平明显高于癌旁组织（P〈0．01）。免疫组化结果显示，胃癌组织中E2F7蛋白的阳性表达率（68．8％）同样高于癌旁组织（41．9％）（P〈0．01）。E2F7表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期关系密切（P〈0．01），而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、发生部位、有无远处转移无关（P〉0．05）。E2F7蛋白高表达的胃癌患者其术后生存时间与E2F7低表达患者无明显差别（P〉0．05）。结论E2F7mRNA及蛋白在胃癌组织中表达均升高，且与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期关系密切，反映了胃癌的进展情况，有进一步探究的价值。

胰腺导管腺癌组织中miR-27、E2F7的表达及临床意义

目的分析胰腺导管腺癌组织微小RNA(miR)-27及E2F转录因子7(E2F7)的表达及意义。方法应用实时定量PCR检测93例胰腺导管腺癌组织及癌旁组织中miR-27和E2F7基因的表达,免疫印迹检测癌组织及癌旁组织中E2F7的蛋白表达。Pearson线性相关分析癌组织中miR-27和E2F7基因表达的相关性。生物信息学软件预测miR-27和E2F7相互作用位点。统计学分析miR-27、E2F7基因的表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析miR-27、E2F7基因的不同表达与患者预后的关系。结果与癌旁组织相比,胰腺导管腺癌组织中miR-27相对表达水平降低(P<0.05),E2F7基因及蛋白表达水平明显较高(P<0.05)。癌组织中miR-27与E2F7基因相对表达水平呈显著负相关(r=-0.612,P<0.001)。生物信息学软件预测E2F7基因的3′非编码区第788~795个碱基存在与miR-27相互作用的位点。不同肿瘤TNM分期、有或无淋巴结转移的胰腺导管腺癌患者癌组织中miR-27与E2F7基因相对表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),而不同性别、年龄、病理分级、肿瘤最大径、肿瘤位置的患者癌组织中miR-27与E2F7基因相对表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-27低表达组、E2F7基因高表达组患者的1年总体生存率(OS)分别低于miR-27高表达组、E2F7基因低表达组患者(χ2=5.129、6.514,P=0.015、0.002)。结论胰腺导管腺癌组织中miR-27表达降低,而E2F7表达升高,两者共同参与胰腺导管腺癌的发展,有可能成为提示胰腺导管腺癌患者预后的肿瘤标志物。

MiR-29a靶向E2F7调控横纹肌肉瘤细胞增殖

目的探讨miR-29a调控横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)细胞A-204增殖的作用及分子机制。方法人RMS细胞系A-204购自中国医学科学院细胞库。依据转染的DNA将细胞分为对照组、miR-29a组、E2F7组和miR-29a+E2F7组。采用CCK-8实验检测RMS细胞系A-204细胞的增殖活性,生物信息学方法预测miR-29a的潜在靶点,通过荧光素酶报告基因实验验证其靶向作用,反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription-real time quantitative PCR,RT-qPCR)实验及蛋白质免疫印迹实验检测靶点分子E2F7的表达,流式细胞术检测细胞周期,细胞体外克隆形成实验检测细胞生长活性。结果在RMS细胞系A-204细胞中,与对照组相比,miR-29a组的A-204细胞在转染后的48 h和72 h细胞增殖活性显著下降,差异具有统计学意义[(1.97±0.15)比(1.69±0.11)、(4.69±0.32)比(2.73±0.28),t=3.70、7.98,P值均<0.05)]。荧光素酶报告基因实验检测结果表明,与对照组相比,miR-29a组的E2F7荧光素酶活性显著下降,差异具有统计学意义[(44.90±5.62)比(11.67±4.55),t=7.96,P<0.05]。RT-qPCR及Western blot检测结果显示,与对照组相比,miR-29a组E2F7 mRNA及蛋白表达水平显著下调,差异具有统计学意义[(0.95±0.04)比(0.59±0.07),(1.04±0.06)比(0.28±0.02),t=7.73、16.89,P值均<0.05];流式细胞染色结果显示,与对照组相比,E2F7组细胞G1期细胞比例显著下降,G2/M期比例显著升高,差异具有统计学意义[%:(82.60±2.75)比(70.83±1.99)、(18.54±0.73)比(12.66±0.37),t=6.00、12.44,P值均<0.05];细胞克隆形成实验结果表明,与对照组相比,E2F7组细胞克隆数显著下降,差异具有统计学意义[个:(59.70±3.90)比(68.80±4.30),t=3.01,P<0.05]。与miR-29a组相比,miR-29a+E2F7组A-204克隆形成数明显增加,G1期细胞比例显著升高,G2/M期细胞比例显著下降,组间差异具有统计学意义[(32.70±4.20)比(54.70±6.20),(79.59±1.58)%比(90.12±2.34)%、(12.34±0.52)%比(5.59±0.28)%,t=5.09、6.46、19.80,P值均<0.05]。结论 mi R-29a可以通过下调E2F7的表达阻断RMS细胞有丝分裂,抑制细胞增殖。

树豆酮酸A可减轻db/db小鼠非酒精性脂肪肝损伤

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指肝中储存过多的脂肪,与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病(type-2 diabetes mellitus,T2DM)、血脂异常等代谢综合征密切相关。肝纤维化是NAFLD进一步发展为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的关键过程,减少肝内的脂肪积累,从而延缓或阻止NAFLD向纤维化的进展是治疗的关键。树豆酮酸A(cajanonic acid A,CAA)在2型糖尿病中能够有效改善胰岛素抵抗,发挥降糖减脂作用。本研究旨在探究CAA对NAFLD肝损伤的保护作用。通过采用db/db自发性NAFLD小鼠模型,将db/db小鼠分为NAFLD组和CAA给药组,CAA组予50 mg/(kg·d)灌胃给药,同期C57BL小鼠作为正常对照组(NC组),每组6只。小鼠生化指标检测和组织病理染色发现,CAA干预可有效缓解db/db小鼠的糖脂代谢紊乱、肝功能损伤(P<0.05)及肝脂肪变性和减少脂质沉积(P<0.05)。ELISA法结果显示,经过CAA治疗后肝组织上清液中白细胞介素1β(Interlecukin-1β,IL-1β)的水平显著降低(P<0.05),提示CAA具有明显抗炎作用,并且CAA干预显著减轻小鼠肝的纤维化程度,天狼星红染色发现,CAA组胶原沉积显著减少(P<0.05),进一步Western印迹结果表明,CAA组纤维化相关基因纤连蛋白(fibronectin,FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白质水平表达降低,E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-ca)的表达升高(P<0.05)。E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)被证实在肝中是葡萄糖和脂质代谢的主要因子,在肥胖小鼠中表达增加,并且可通过PPARγ的转录调节参与脂肪组织代谢,我们猜测,E2F1是CAA改善NAFLD肝脂质沉积和纤维化的中间作用靶标。通过免疫组织化学染色观察E2F1和其同家族拮抗转录因子E2F转录因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)在小鼠经CAA处理后在肝组织核质中均表达,通过Western印迹法和实时荧光定量PCR进一步检测蛋白质和mRNA的表达发现,在CAA组中E2F1较NAFLD组基因表达降低(P<0.05),E2F7基因表达增加(P<0.05),并且spearman秩相关分析提示,E2F1和E2F7呈显著负相关(P<0.05)。以上结果表明,树豆酮酸A可有效减轻db/db小鼠非酒精性脂肪性肝损伤,改善糖脂代谢紊乱,抑制脂质过度沉积,减轻肝纤维化以缓解NAFLD进一步发展,同时E2F1和E2F7可能参与了CAA改善脂质代谢和纤维化的过程。

E2F家族转录因子在肿瘤发生中的作用

肿瘤严重威胁人类健康,转录因子是肿瘤治疗的潜在靶点。作为重要的转录因子家族,E2F在细胞增殖与调控进程中发挥重要作用。然而,E2F家族转录因子在肿瘤发生进程中的表达规律、基因功能和分子互作等关键信息尚不清晰。基于此,本研究对TCGA数据库中我国10种高发肿瘤的转录组测序数据、突变数据和蛋白质互作数据进行整合分析,探究E2F家族转录因子的表达、结构、功能、突变和系统发生特征。结果显示,E2F家族转录因子中的E2F1和E2F7基因在多种肿瘤样本中规律性上调表达,参与调控细胞周期、细胞衰老等信号通路;其中,E2F1作为重要的调控因子与其他蛋白的相互作用最多。值得指出的是,E2F家族转录因子的基因突变类型在肿瘤类型和患者性别中均存在差异,基因扩增占比最大。系统发生分析显示,E2F家族转录因子的结构在包括果蝇、线虫和人类在内41个物种中保守,并且它们在物种演化过程中表现出基因扩张倾向。综上所述,本研究阐明了E2F家族转录因子在我国高发肿瘤中的表达规律、突变特征和演化规律,提示E2F家族转录因子是相关肿瘤疾病的新型分子诊断标志物,为抗肿瘤靶向药物研发提供理论依据。

E2F转录因子7在甲状腺乳头状癌中的表达及生物学作用

目的探讨E2F转录因子7(E2F7)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的作用及分子机制。方法生物信息学分析E2F7与PTC的关系;免疫组织化学方法检测PTC及癌旁组织E2F7的表达;Western blot(WB)检测人甲状腺癌细胞系K1、TPC-1和BCPAP细胞以及正常人甲状腺Nthyori 3-1细胞系E2F7表达水平;以生长曲线、克隆形成实验和划痕实验检测沉默E2F7对K1细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测沉默E2F7对K1细胞周期和凋亡的影响;qRT-PCR检测其对周期蛋白cyclin D1、cyclin E1、EIF4A3及周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)基因转录的影响,以WB检测E2F7对周期蛋白和通路蛋白Akt、pAkt的影响。结果E2F7在PTC组织中表达水平较癌旁组织高表达,其中临床分期及淋巴结转移与E2F7表达水平有统计学意义(P<0.05);K1细胞E2F7的表达明显高于正常甲状腺细胞;E2F7沉默组K1细胞蛋白表达水平相比对照组明显降低(P<0.01);增殖、迁移能力较对照组受到抑制(P<0.05);E2F7沉默组周期蛋白转录和翻译水平较对照组降低;通路关键蛋白Akt和pAkt表达水平较对照组下调;E2F7沉默组细胞周期较对照组细胞周期进展出现阻滞,凋亡率升高。结论E2F7高表达与PTC发生、发展有关;E2F7基因可能通过Akt信号通路促进K1细胞增殖、抑制凋亡。

口腔鳞状细胞癌患者预后相关基因标志物的生物信息学分析

目的通过生物信息分析方法筛选口腔鳞状细胞癌与癌旁组织之间的差异表达基因,初步确定潜在生物标志物。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中下载口腔鳞状细胞癌相关芯片数据集GSE23558、GSE37991、GSE30784,利用GEO在线分析工具筛选差异表达基因,并对其进行基因本体、京都基因与基因组百科全书分析。利用STRING在线数据库,构建差异基因蛋白互作(protein⁃protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape筛选关键基因。进而使用Kaplan Meier在线软件对差异表达基因进行预后分析,并使用GEPIA(http://gepia.cancer⁃pku.cn/)验证其表达情况。结果共筛选出212个差异表达基因,进一步分析发现16个核心基因,其中与预后相关的核心基因包括:极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)、极光激酶B(aurora kinase B,AURKB)、细胞凋亡抑制因子5(baculoviral IAP repeat containing 5,BIRC5)、细胞分裂周期蛋白6(cell division cycle 6,CDC6)、E2F转录因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)、泛素样含PHD和环指域蛋白1(ubiquitin⁃like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1),这些关键基因与癌旁组织相比在口腔鳞状细胞癌组织呈高表达并且患者生存时间均较短,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论AURKA、AURKB、BIRC5、CDC6、E2F7和UHRF1可作为口腔鳞状细胞癌患者预后潜在的标志物。

miR-197在乳腺癌细胞中对三苯氧胺敏感性的影响

目的研究miR-197在乳腺癌细胞中对三苯氧胺敏感性的影响并探讨相关机制。方法收集25例乳腺癌患者癌组织及乳腺癌细胞系HCC1937、MDA-MB-453、MDA-MB-231和HCC1937/TAM,用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测miR-197的表达水平。将乳腺癌细胞株HCC1937和HCC1937/TAM分为空白组、mimic-miR-197组、sh-E2F7组与inhibitor-miR-197+sh-E2F7组,分别转染mimic-miR-197、sh-E2F7和inhibitor-miR-197,并使用三苯氧胺处理细胞。转染48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡水平,用蛋白质印迹法(Western blot)检测E2F7的表达水平。结果空白组、mimic-miR-197组、sh-E2F7组和sh-E2F7+inhibitor-miR-197组HCC1937细胞存活率分别为(60.80±3.72)%,(44.44±3.68)%,(51.09±3.92)%,(67.72±3.26)%;凋亡率分别为(4.95±0.48)%,(10.39±0.49)%,(9.77±0.38)%,(4.18±0.43)%。空白组、mimic-miR-197组、sh-E2F7组和sh-E2F7+inhibitor-miR-197组HCC1937/TAM细胞存活率分别为(57.60±4.59)%,(48.48±3.38)%,(39.74±4.95)%,(53.64±3.58)%;凋亡率分别为(3.44±0.24)%,(8.93±0.23)%,(8.33±0.27)%,(3.02±0.23)%。在HCC1937和HCC1937/TAM细胞中,mimic-miR-197组和sh-E2F7组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-197通过靶向下调E2F7的表达增强乳腺癌细胞三苯氧胺敏感性。

E2F转录因子7低频错义突变与结直肠癌风险的相关性研究

目的探讨E2F转录因子家族基因错义突变与结直肠癌发病风险的相关性。方法寻找E2F转录因子家族基因的错义突变,鉴定汉族人群等位基因频率>0.01的2个突变位点(E2F2的rs2075995和E2F7的rs3829295)。对1 055例结直肠癌(CRC)患者和1 936例健康对照者运用Taq Man基因分型检测,使用Logistic回归评估这2种SNPs与CRC风险的相关性。结果 E2F7的rs3829295与CRC风险显著相关。与TT基因型携带者相比,CT和CT+CC基因型携带者有较低的结直肠癌发生风险(OR分别为0.61(95%CI:0.44~0.85,P=0.003)、0.61(95%CI:0.44~0.84,P=0.003)。根据性别和年龄进行分层分析发现,rs3829295突变者中结直肠癌发生风险男性高于(OR=0.56,95%CI:0.38~0.83,P=0.004)女性(OR=0.73,95%CI:0.43~1.22,P=0.232)。结论 E2F7的错义突变与CRC风险显著相关,E2F7在结直肠癌发病中可能发挥重要作用。