E2F1在胃癌中的表达及其与Survivin、P53的相关性

目的探讨转录因子E2F1基因的表达与胃癌生物学行为及生存素(Survivin)和P53表达的相关性。方法应用免疫组织化学(SP法)检测61例胃癌组织中E2F1、Survivin和P53的表达,并以20例胃低级别上皮内瘤变为对照。结果①E2F1、Sur-vivin和P53在胃癌组织中的阳性率分别为75.4%、85.2%和68.9%,显著高于低级别上皮内瘤变组织中的30.0%、40.0%和15.0%,有显著差异(P<0.05)。②E2F1的表达在胃癌组织分化程度、浸润深度、TNM分期淋巴结转移、远处转移中差异无显著性(P>0.05)。Survivin和P53在胃癌有无远处转移和TMN分期之间差异有显著性(P<0.05),且Survivin在有无淋巴结转移间差异有显著性(P<0.05)。③在胃癌中E2F1的表达强度分别与Survivin和P53的表达强度呈等级正相关(rs1=0.519,P1<0.01;rs2=0.602,P2<0.01)。结论E2F1可能作用于胃癌发生的早期阶段,Survivin和P53可能作用于胃癌发生的晚期阶段,三者在胃癌的发生、发展中可能起协同作用。

E2F1转录因子对小鼠全层皮肤缺损创面中M2型巨噬细胞的调节机制

目的探讨E2F1转录因子对小鼠全层皮肤缺损创面中M2型巨噬细胞的调节机制。方法引进E2FI基因敲除杂合子C57BL/6小鼠、野生型C57BL/6小鼠,自行繁殖并于小鼠出生后2周通过PCR法鉴定出E2F1基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠。采用随机数字表法分别选取12只经鉴定后生长至6~8周龄的雄性E2F1基因敲除纯合子C57BL/6小鼠、野生型C57BL/6小鼠,设为E2F1基因敲除组与野生型组,在每只小鼠背部制成1个全层皮肤缺损创面。伤后2、7 d,每组分别采用随机数字表法选取6只小鼠处死,切取创面组织,采用免疫荧光法观察CD68和CD206双阳性M2型巨噬细胞表达并计算CD206阳性细胞百分比,蛋白质印迹法检测CD206蛋白表达,实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测精氨酸酶1 mRNA表达。另取2组伤后7 d创面组织标本,分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的蛋白和mRNA表达。前述实验均重复4次。另取野生型组小鼠伤后7 d创面组织标本3个,采用免疫共沉淀法及蛋白质印迹法检测E2F1与PPAR-γ的关系,重复2次。对数据行非配对t检验。结果E2F1基因敲除纯合子C57BL/6小鼠和野生型C57BL/6小鼠PCR产物大小分别为227、172 bp,与所设计DNA片段大小一致。伤后2、7 d,与野生型组比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD68和CD206双阳性M2型巨噬细胞较多;与野生型组的(0.129±0.017)%、(0.282±0.071)%比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD206阳性细胞百分比[(0.234±0.032)%、(0.584±0.023)%]明显增加(t=3.29、3.54,P<0.05)。伤后2、7 d,与野生型组的0.43±0.06、0.97±0.08比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD206蛋白表达(1.00±0.23、1.63±0.26)明显增加(t=2.41、2.45,P<0.05)。伤后2、7 d,与野生型组的0.163±0.026、0.108±0.017比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中精氨酸酶1 mRNA表达(0.482±0.105、0.195±0.031)明显增加(t=3.04、2.86,P<0.05)。伤后7 d,与野生型组的0.20 ±0.04、0.20±0.04比较,E2F1基因敲除组小鼠创面组织中PPAR-γ蛋白与mRNA表达(0.61±0.12、0.51±0.13)均明显增加(t=3.36、2.86,P<0.05)。伤后7 d,野生型组小鼠创面组织检测显示,PPAR-γ对E2FI存在单向作用。结论E2F1转录因子通过抑制PPAR-γ,的表达影响M2型巨噬细胞的极化,从而抑制小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程。