SCF E3泛素化连接酶的研究进展

Skp1-Cullins-F-box蛋白复合物(SCF复合物)E3泛素化连接酶是最大的泛素化连接酶家族成员,该蛋白复合体可以促进多种蛋白通过泛素化降解,对细胞周期、DNA复制等多种生物过程具有重要的调节作用。SCF E3泛素化连接酶在人类肿瘤中的异常激活可以诱导细胞无限制的增殖和基因组的不稳定,因此,E3泛素化连接酶复合物成员可以作为抗肿瘤治疗的靶点。本文主要介绍SCF E3泛素化连接酶作为抗癌药物的靶点和新型肿瘤抑制剂MLN4924的抗肿瘤作用。

含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1在肝癌中表达的意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的 观察含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1（HACE1）在肝癌中的表达水平与预后的关系及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学检测100例肝癌和癌旁组织HACE1的表达,Kaplan-Meier和Log-rank分析HACE1表达水平与患者预后的关系;利用脂质体质粒转染建立Huh7-HACE1细胞株,通过细胞计数试剂盒（CCK-8）观察HACE1过表达对Huh7细胞增殖的影响,应用Transwell检测HACE1过表达对Huh7细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中HACE1表达低于和高于癌旁组织的患者分别为68和32例,两者5年生存率对比（70.8％比90.3％）和5年复发率对比（59.7％比30.6％）差异有统计学意义（P＜0.01）.细胞增殖实验结果显示4d后Huh7-HACE1组吸光度（A）值显著低于对照组（P＜0.05）;Transwell结果显示Huh7-HACE1组侵袭能力显著低于对照组（P＜0.05）.结论 HACE1基因在肝癌组织表达水平显著低于癌旁组织,其表达水平与肝癌预后相关;过表达HACE1可抑制肝癌Huh7细胞的增殖和侵袭能力.该基因可能在肝细胞肝癌的发生发展中起重要作用.

泛素化E3连接酶在植物抗非生物胁迫中功能的研究进展

泛素化修饰由E1、E2和E3完成,在植物抗非生物胁迫中起重要作用。E3连接酶把E1和E2激活的泛素蛋白传递给特异性的底物,从而降解并调控蛋白影响植物抗胁迫能力。植物抗非生物胁迫的E3连接酶主要包括RING-finger和U-box型两大类,本文分别对抗盐、干旱、温度3种胁迫及ABA信号中上述两类E3连接酶作用和机制作了综述,并提出部分有待于研究的问题以供参考。

Parkin介导的线粒体自噬在高糖高脂导致的心肌细胞损伤中的保护作用

目的明确Parkin(一种E3泛素化连接酶)介导的线粒体自噬对高糖高脂导致的原代心肌细胞损伤的保护作用。方法以LV-lac Z(Lac Z空病毒)或LV-Parkin(Parkin过表达慢病毒)转染SD大鼠原代心肌细胞48 h,再用含葡萄糖(5.5 mmol/L NG)的培养基或含棕榈酸盐(500μmol/L HF)和葡萄糖(25 mmol/L HG)的高糖高脂培养基培养心肌细胞24 h。实验分组:(1)阴性对照组(NG-Lac Z),(2)正常Parkin过表达组(NG-Parkin),(3)高糖高脂阴性对照组(HG-HF-Lac Z),(4)高糖高脂Parkin过表达组(HG-HF-Parkin)。用Western blot法检测PTEN介导的假定激酶蛋白1(PINK1)、Parkin、P62(一种自噬相关蛋白)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平。采用JC-1染色法检测活细胞内线粒体膜电位水平。免疫荧光法检测自噬体数量,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果与对照组相比,高糖高脂处理的原代心肌细胞自噬相关蛋白LC3-II,P62表达水平上调(P<0.05),PINK1表达未发生统计学差异,Parkin表达水平下调(P<0.05),自噬体数量增多,线粒体膜电位下降功能损伤,心肌细胞凋亡率升高(P<0.05)。而用高糖高脂处理LV-Parkin转染的心肌细胞,LC3-II蛋白表达水平进一步升高(P<0.05),而P62表达水平显著下降(P<0.05),自噬体数量进一步增多,细胞内线粒体膜电位水平上升,心肌细胞凋亡率下降(P<0.05)。结论高糖高脂可引起SD大鼠原代心肌细胞自噬流量降低,自噬小体增多,线粒体自噬发生障碍。Parkin过表达慢病毒通过激活心肌细胞内线粒体自噬途径,提高自噬流量,改善线粒体功能,降低心肌细胞凋亡率。

MARCH1在免疫及肿瘤等方面的研究进展

膜相关环状蛋白家族(membrane associated RING-CH,MARCH)是一类含有环指结构域的E3泛素化连接酶,MARCH1是其成员之一。早期研究认为MARCH1主要通过泛素化主要组织相容性复合体Ⅱ和CD86影响抗原提呈过程,新近研究发现除在免疫系统中的重要作用外,MARCH1在肿瘤的发生发展中也扮演重要角色。研究报道MARCH1在卵巢癌、肝癌中作为癌基因促进肿瘤的恶性生物学行为,但在膀胱癌中MARCH1作为miR-653的下游靶点发挥抑癌作用,可见在不同肿瘤中MARCH1的作用不尽相同。此外,MARCH1参与人类免疫缺陷病毒、多器官功能障碍综合征、糖尿病等疾病的进展也有少量报道。

MARCH2简述

MARCH(membrane-associatedRING-CHfingerprotein)家族是在21世纪初发现的一类E3泛素连接酶,有11个家族成员,在生物体内通过对底物蛋白进行泛素化修饰从而发挥多种调控作用。膜相关RING-CH蛋白2(membrane-associatedRING-CHproteinⅡ),简称MARCH2,常见的靶点有转铁蛋白受体(transferrinreceptor,TfR)、突触融合蛋白6(syntaxin 6,STX-6)、CD86(B7-2)、人DLG1(discslargetumoursuppressor)和囊性纤维跨膜传导调节因子(cysticfibrosistransmembrane conductanceregulator,CFTR)以及β2肾上腺素能受体(β2-adrenergicreceptors,β2-AR),在病毒免疫逃避、肿瘤发生及激动剂脱敏等方面发挥着作用。其主要通过泛素化修饰在哺乳动物的蛋白修饰及泛素化降解过程,发挥着举足轻重的作用,尤其是调控细胞内囊泡运输的蛋白及表面受体。但目前对MARCH2的功能研究仍有许多空白之处尚待填补。本文就MARCH2的起源、结构及功能进行阐述,为后续基础及临床研究提供一定的依据。

水稻酵母双杂交文库构建及PID2胞内结构域互作蛋白的筛选

为了进一步挖掘水稻PID2胞内互作蛋白质,阐明Pid2介导的稻瘟病抗性机制。本研究利用SMART技术,构建了受稻瘟病诱导后不同时间段的含抗性基因Pid2水稻材料的cDNA文库;通过PCR扩增获得PID2胞内结构域编码片段Pid2-JM,构建了诱饵表达载体pGBK-Pid2-JM,并进一步利用酵母双杂交技术筛选Pid2-JM的互作蛋白。结果表明,构建的cDNA酵母文库细胞密度为9.0×10;Cells/mL,文库插入片段在500~2000 bp之间,重组率为100%,诱饵载体无自激活活性;利用诱饵载体经筛选文库后,新发现一个能与Pid2-JM互作的U-box类E3泛素连接酶PBP1,经回转试验验证了PBP1与Pid2-JM可在烟草细胞内互作。综上,本研究成功构建了稻瘟病诱导下的水稻酵母双杂交文库,并筛选到一个能与PID2胞内结构域互作的U-box类E3泛素连接酶,该结果为进一步揭示水稻抗稻瘟病信号转导机制提供参考。