烟草CYP82E4基因启动子功能分析

烟碱转化是指在烟叶成熟期,烟叶中的烟碱大量转化成降烟碱,烟叶品质发生显著变化的过程。前期研究表明烟碱转化由烟碱去甲基酶一步催化完成,其编码基因为CYP82E4(NtE4)。为解析NtE4启动子功能,探究其调控机制,本研究通过在线数据库分析NtE4启动子上的顺式作用元件,预测其上游靶向转录因子;通过5’端缺失构建启动子融合GUS基因的重组表达载体并瞬时转化本氏烟,确定启动子活性区域。结果表明,NtE4启动子包含2个脱落酸、11个乙烯响应元件,9个WRKY和7个NAC结合位点等;-500~-1000 bp是NtE4启动子核心区域,-500~-1967 bp存在较多增强启动子活性的元件;预测ERF、WRKY和NAC为NtE4基因上游靶向转录因子;荧光定量表达分析显示ERF5、WRKY50和NAC29在叶片衰老过程中具有和NtE4相似的表达趋势。本研究将为阐明烟叶衰老过程中NtE4介导的烟碱转化机制提供理论依据。

动态监测血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D水平对喘息性支气管炎患儿疗效的预测价值

目的探讨血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、白三烯E4(LTE4)、表面活性蛋白D(SP-D)水平对喘息性支气管炎患儿疗效的预测价值。方法回顾性2020年3月至2023年3月医院收治的268例喘息性支气管炎患儿,根据治疗7 d后疗效分为有效组(217例)和无效组(51例)。比较两组治疗前及治疗3、5 d后血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D水平、肺功能指标[呼吸频率(RR)、达峰容积比(VPEF/VE)、达峰时间比(TPTEF/TE)]。分析血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D水平与肺功能指标及疗效相关性,分析血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D水平联合检测对喘息性支气管炎患儿疗效的预测价值,各指标不同水平对喘息性支气管炎患儿治疗无效的影响。结果治疗3、5 d后,与有效组相比,无效组血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D、RR高(P<0.05),VPEF/VE、TPTEF/TE低(P<0.05)。治疗3、5 d后,血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D与疗效、VPEF/VE、TPTEF/TE呈负相关(P<0.05);治疗3、5 d后血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D与RR呈正相关(P<0.05);血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D水平联合预测喘息性支气管炎患儿治疗无效的AUC均大于各单一指标预测(P<0.05)。血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D高水平患儿治疗无效危险度高于低水平(P<0.05)。结论血清嗜酸性粒细胞趋化蛋白、LTE4、SP-D水平能反映喘息性支气管炎患儿肺损伤及病情严重程度,联合检测可作为早期预测治疗结局的重要辅助途径。

基于e4教学模式的中药化学实验教学改革与实践

目的:探讨在中药化学实验课程中采用“以学生为中心”的探索(explore)、阐述(elaborate)、实施(execute)、评估(evaluate)即e4教学模式的效果。方法:选取我校中药学专业二年级学生,随机选择一个班作为教改组(采用传统教学+e4教学模式),另一个班作为对照组(采用传统教学模式),每组各38名学生。比较2组学生的实验成绩、毕业实习成绩,采用问卷调查学生对课程的评价。结果:对照组和教改组基础验证性实验中成绩比较差异无统计学意义(P>0.05);教改组毕业实习成绩[开题报告(85.68±5.10)分、中期评价(84.58±5.69)分、论文答辩(84.82±4.29)分]明显高于对照组[开题报告(79.50±7.35)分、中期评价(81.08±5.00)分、论文答辩(80.29±5.08)分],差异均有统计学意义(P<0.05),问卷调查反馈显示90%以上的学生对教学模式和实验流程的安排比较满意。结论:中药化学实验课程教学改革可以有效加强学生对中医药思维的理解和深化,提高学生传承中医药学理论与技术的能力。

新疆维吾尔自治区妇女宫颈感染人乳头瘤病毒16型E4和L2的遗传变异分析

目的探讨人乳头瘤病毒16(HPV16)E4、L2基因变异及氨基酸变化,分析HPV16的进化特征。方法从医院收集40例HPV16感染阳性的宫颈脱落细胞样本和40例宫颈组织细胞样本,提取样本的病毒DNA,对40例宫颈脱落细胞的DNA进行HPV16 E4和L2 Sanger测序及对40例宫颈组织细胞DNA高通量测序,构建HPV16 E4和L2基因系统进化树,分析HPV16 E4和L2基因的变异特征。结果有72个HPV16 E4变异样本,10个核苷酸变异位点(4种错义变异和7种同义变异),74个HPV16 L2变异样本,40个核苷酸变异位点(23种错义变异和18种同义变异)。宫颈癌(CC)中T4177C、A4288C、A4654C变异频率明显高于非宫颈癌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论①新疆维吾尔自治区主要流行病毒株为欧洲株,少数为亚洲株。②HPV16 L2基因中T4177C、A4288C、A4654C在宫颈癌中的变异频率高于非宫颈癌,且G4181A与亚洲株相关。

尿CysLTE4和血清IL-8水平变化与支气管肺发育不良的关系

目的:探讨早产儿尿半胱氨酸白三烯E4(CysLTE4)和血清白介素-8(IL-8)水平变化与支气管肺发育不良的关系。方法:选取2021年1月至2022年12月蚌埠医学院第一附属医院新生儿重症监护病房(NICU)收治的胎龄<32周、出生体重<1500 g、且住院时间≥28天的58例早产儿作为研究对象。根据生后28 d是否发生BPD分为BPD组(n=21)和非BPD组(n=37),采集纳入病例出生第1、7、14、21、28天的尿液、血液标本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿半胱氨酸白三烯E4(CysLTE4)、血清白介素-8(IL-8)水平。结果:生后第1天,BPD组尿CysLTE4、血清IL-8与非BPD组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随着日龄增长,两组尿CysLTE4和血清IL-8水平均呈现上升趋势,其中尿CysLTE4水平在第14天达高峰,血清IL-8水平在第21天达高峰,但同日BPD组尿CysLTE4和血清IL-8水平均高于非BPD组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CysLTE4和IL-8与早产儿BPD的发生密切相关,动态监测早产儿尿CysLTE4和血清IL-8水平对BPD的早期诊断、早期干预及降低严重并发症的发生率、改善早产儿预后具有重要的临床意义。

血清人附睾蛋白E4、CA125、CA199联合诊断子宫内膜癌的价值

目的:探讨血清人附睾蛋白(HE4)、CA125和CA199联合检测对子宫内膜癌的诊断价值。方法:选择118例子宫内膜癌患者(A组)与82例子宫良性疾病患者(B组),检测血清HE4、CA125和CA199水平,比较不同指标联合检测的阳性率。结果:A组血清HE4、CA125、CA199水平、阳性率均显著高于B组(P<0.05)。A组血清HE4的阳性率最高,B组无HE4阳性患者。联合检测以HE4+CA125+CA199灵敏度、准确度最高,分别为94.9%、92.5%。HE4、CA125和CA199水平及阳性率随FIGO分期均呈增高趋势(P<0.05),且各期HE4阳性率均高于CA125、CA199阳性率(P<0.05)。结论 :HE4可用于鉴别子宫良恶性疾病,且较CA125、CA199对子宫内膜癌具有更高的诊断价值。联合检测HE4、CA125、CA199在鉴别子宫良恶性疾病基础上,提高子宫内膜癌诊断的阳性率、准确度。

HE4、CA125及CA199在鉴别子宫内膜癌肌层浸润深度及病理分期中的临床应用价值

目的:探讨鉴别子宫内膜癌不同浸润深度及分期的血清分子标志物。方法:检测212例子宫内膜癌患者血清人附睾蛋白E4(human epididymal protein E4,HE4)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原125(carbohydrateantigen125,CA125)、糖类抗原199(carbohydrate antigen 199,CA199)、糖类抗原724 (carbohydrate antigen 724,CA724)及甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的表达水平,并分析其与病理参数之间的关系,进一步分析HE4、CEA、CA125、CA199、CA724及AFP在子宫内膜癌不同浸润深度及分期患者血清中的阳性表达率,计算各指标单独与联合诊断的灵敏度及特异度并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线比较诊断效能。结果:血清HE4、CA125和CA199的表达水平和阳性率在子宫内膜癌浸润深度<1/2肌层与浸润深度≥1/2肌层组间,及FIGO分期Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期的组间,具有统计学差异。HE4+CA125+CA199在诊断浸润深度≥1/2及Ⅲ/Ⅳ期组中的灵敏度、特异度、准确率均相对较高。HE4+CA125+CA199联合诊断浸润深度≥1/2及Ⅲ/Ⅳ期的ROC曲线下面积均高于HE4单项诊断、CA125单项诊断、CA199单项诊断、HE4+CA125联合诊断、HE4+CA199联合诊断、CA125+CA199联合诊断。结论:血清联合检测HE4、CA125及CA199表达量有助于鉴别预测子宫内膜癌浸润深度及较高分期。

泛素连接酶UBE4B的研究进展

泛素化是一类重要的蛋白质翻译后修饰,参与了体内多种生命活动。UBE4B作为泛素连接酶U-box家族的一员,含有一种约70个氨基酸组成的特征性U-box结构域,负责底物识别和结合。UBE4B还具有一种特殊的E4活性,可以在E1、E2和E3存在的情况下继续对泛素链进行延长。UBE4B参与了胚胎发育、神经元保护等一系列重要生命过程,它还可降解多种具有重要生理功能的底物,如p53、EGFR、FEZ1及Ataxin-3等,与癌症、神经退行性疾病、肥胖等疾病的发生发展有关。因此研究UBE4B参与的底物调控对于疾病治疗和新药开发有重大意义。从UBE4B的结构特征、生理功能、相关疾病与底物功能等方面,对近20年的研究进展进行了综述及展望,为后续深入研究UBE4B对生命活动的影响提供理论基础。

β-淀粉样蛋白和载脂蛋白E4升高神经元胞内游离钙

目的 研究 β 淀粉样蛋白 (Aβ)和载脂蛋白E4(ApoE4)对神经元胞内游离Ca2 +浓度的影响 ,探索它们对神经元的毒性效应。方法 制备 0～ 3d新生SD大鼠的海马和皮层神经元悬液 ,负载上fura 2 /AM ,实验组分别加入Aβ2 5～ 3 5、ApoE4以及Aβ2 5～ 35+ApoE4孵育液温孵 3min后 ,用荧光双波长分光光度计测定神经元 [Ca2 +]i;采用显微准弹性激光散射技术 (MQLS) ,分析Aβ2 5～ 35及ApoE4对单个神经元散射光强度自相关函数 (ACF)的影响 ,通过公式由ACF拟合出反映细胞膜流动性的频移线宽Г。结果 Aβ2 5～ 35和ApoE4均能升高海马和皮层神经元静息 [Ca2 +]i(P <0 0 5 ) ,其中 5 μmol·L-1Aβ2 5～ 35的作用大于 1μmol·L-1Aβ2 5～ 3 5的作用 (P <0 0 5 ) ;Aβ2 5～ 35和ApoE4也能增强KCl去极化诱导的海马和皮层神经元 [Ca2 +]i 升高 (P <0 0 5 )。Aβ2 5～ 3 5(1μmol·L-1) +ApoE4(0 1μmol·L-1)共同作用也使神经元静息 [Ca2 +]i及KCl去极化诱导的神经元 [Ca2 +]i升高 (P <0 0 5 ) ,但两者共同作用未见其升 [Ca2 +]i 效应进一步增大。Aβ2 5～ 3 5和ApoE4均降低海马和皮层神经元的频移线宽Г。结论 Aβ2 5～ 35和ApoE4均能升高神经元静息[Ca2 +]i 及降低神经元膜流动性 ,但两者共同作用未能显示升

硃砂烟CYP82E4基因表达模式及烟碱转化率分析

为解析硃砂烟基本特征特性,以"硃砂2号"为研究材料,调查其田间农艺性状及硃砂烟叶产出规律,通过qPCR分析CYP82E4基因表达模式,并检测硃砂烟叶生物碱含量。结果表明,硃砂2号农艺性状与云烟87无显著差异,烤后硃砂烟叶比率随着叶位增高逐步上升。硃砂2号烟叶中CYP82E4基因高水平表达,导致大量烟碱被转化生成去甲基烟碱,浅红、中等红色、深红三种类型硃砂烟叶的烟碱转化率分别为86.95%、90.86%、93.85%,远高于云烟87的5.12%。硃砂烟子代植株中CYP82E4基因高表达、高烟碱转化率性状能够稳定遗传,烤后烟叶均呈现明显的硃砂烟外观特征。本研究揭示了硃砂烟基本特征特性,为进一步研究硃砂烟的成因及化学特性提供理论支撑。

血清HE4,CA125联合ROMA指数在卵巢癌预测和诊断中的应用价值

目的 探讨血清肿瘤标志物人附睾分泌蛋白4（HE4）,CA125和ROMA指数在卵巢癌预测和诊断中的应用价值.方法 用化学发光法检测手术前卵巢癌患者96例和卵巢良性肿瘤患者60例及健康体检者75例的血清中HE4,CA125水平,并计算出卵巢癌风险预测模型（ROMA）值,联合绝经状态预测患卵巢癌的风险性.结果 卵巢癌组HE4,CA125和ROMA值三项指标的中位水平分别为222.2 pmol/L,153.9 U/ml和73.0％,与卵巢良性肿瘤组及正常对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.将HE4和CA125的cut-off值定在140 pmol/L和35 U/ml,绝经前、后妇女ROMA指数cut-off值定为11.4％和29.9％,则HE4,CA125和ROMA指数预测和诊断卵巢癌的灵敏度分别为72.9％,89.6％和87.5％;特异度分别为98.3％,55.0％和90.0％;准确度分别为87.1％,81.9％和90.5％;联合检测HE4,CA125与ROMA指数预测和诊断卵巢癌的灵敏度、特异度分别为97.0％和92.8％.结论 联合检测血清HE4和CA125并计算出ROMA指数有助于预测腹盆腔肿块患者患卵巢癌的风险性,鉴别卵巢肿瘤的良恶性,提高卵巢癌的早期诊断率.

过敏性紫癜患儿尿白三烯E4测定的临床意义

目的探讨过敏性紫癜患儿尿白三烯E4测定的临床意义。方法用ELISA检测45例过敏性紫癜患儿(其中18例为紫癜性肾炎患儿)和20例健康儿童尿LTE4水平。结果对照组尿LTE4:(132.07±20.71)ng/L,HSP尿LTE4:(704.31±118.66)ng/L,HSPN尿LTE4:(1185.21±208.39)ng/L,三者比较差异有显著统计学意义(P<0.01);HSP、HSPN、对照组间尿LTE4两两比较,差异有有显著统计学意义(P<0.01).结论白三烯在过敏性紫癜的发病机制中有不可忽视的作用,白三烯可预测HSP的严重性及预后,白三烯受体拮抗剂在过敏性紫癜治疗上可能有一定的作用。

烟草CYP82E4v1基因调控降烟碱的生物合成

为明确烟草烟碱去甲基酶基因CYP82E4v1在降烟碱生物合成中的调控作用,通过农杆菌介导,将含CYP82E4v1超量表达的植物表达载体pLF-35S-CYP和干涉表达的植物表达载体pLF-35S-CYPi分别遗传转化烟草品种K326,共获得转基因植株61株,其中超量表达植株42株,干涉表达植株19株。HPLC测定表明,超量表达植株降烟碱含量比对照烟草品种K326高88.9%,而干涉表达植株降烟碱含量比对照烟草低61.1%,表明CYP82E4v1的超量表达能提高烟草降烟碱含量,该基因的表达受到抑制时降烟碱合成受阻。Real-Time PCR分析结果表明,超量表达植株中CYP82E4v1基因的表达为对照烟草的20倍以上,在干涉表达植株中其表达量仅为对照烟草的6%。同时,在干涉表达植株中其他降烟碱合成基因,如CYP82E5v2和CYP82E10等也受到不同程度的抑制。此外,在构建植物表达载体时,引入衰老基因SAG12启动子驱动重组酶基因FLP的"Gene-deletor"表达元件,在烟草叶片发育后期以清除转基因植株中外源GUS∷NPT II基因,从而获得了降烟碱含量低且不含筛选标记基因的转基因烟草植株。

呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿尿白三烯E4测定的意义

目的探讨呼吸道合胞病毒（RSV）毛细支气管炎患儿尿白三烯E4（LTE4）测定的临床意义。方法收集30例毛细支气管炎患儿鼻咽分泌物,用直接免疫荧光法进行RSV检测。选取其中证实为RSV阳性的24例作为病例组;选取同期入院的非感染性外科疾病手术前患儿19例为对照组。二组患儿年龄分布和性别构成均无显著性差异。收集二组患儿尿液和血液,采用竞争性酶联免疫吸附试验技术检测尿LTE4水平,同时行外周血嗜酸性粒细胞计数,并进行比较;对病例组患儿尿LTE4与外周血嗜酸性粒细胞计数进行相关性分析。结果病例组患儿尿中LTE4水平[181.0（145.8-224.7）μg/mol Cr]明显高于对照组[73.6（52.0-104.3）μg/mol Cr]（t=4.77 P〈0.01）;病例组外周血嗜酸性粒细胞计数[（0.25±0.22）×10^9L^-1]略低于对照组[（0.34±0.16）×10^9L^-1],差异无统计学意义（t=1.53 P〉0.05）。病例组患儿尿LTE4水平与外周血嗜酸性粒细胞之间无相关性（r=0.1279 P〉0.05）。结论白三烯在RSV毛细支气管炎的发病机制中有不可忽视的作用,白三烯受体拮抗剂在RSV毛细支气管炎治疗上可能有一定的作用。

HPV-16E4原核表达系统的建立和表达特性研究

目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16)E4基因(E4),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性。方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增E4完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4)。经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果克隆到完整E4基因为342bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%。在28℃和37℃,0.1mmol/L的IPTG诱导18h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Westernblot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His)。结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础。

家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4基因的组织表达和序列特征及重组蛋白的酶活性分析

昆虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)主要行使对异生或内源有毒物质进行代谢解毒的功能。选择家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4的编码基因Bmgste4为靶标,研究其组织表达谱、序列结构特征及原核表达重组蛋白的酶活性。RT-PCR检测不同组织表达特征的结果显示,Bmgste4基因在家蚕5龄第3天幼虫的头部、触角、下颚须、表皮、脂肪体、丝腺以及雄性个体的马氏管和雌性个体的卵巢中均有表达,而在血细胞、中肠以及雄性个体的精巢和雌性个体的马氏管中不表达。多序列比对结果显示BmGSTE4具有完整和保守的GST二级结构特征,N端氨基酸残基保守,特别是谷胱甘肽结合位点。构建插入Bmgste4基因开放阅读框片段的重组表达质粒p28-Bmgste4,并转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行原核表达后,利用分光光度法测定重组蛋白对通用底物1-氯-2,4-二硝基苯的酶活参数:Km=0.58 mmol/L,Vmax=24.55μmol/(mg.min)。这些结果为进一步研究家蚕体内解毒和抗药性机制以及开发鳞翅目害虫新型生物防治药剂提供了基础信息。

银杏内酯B对胆固醇和载脂蛋白E4损伤海马神经元活性和生长的影响

目的探讨高胆固醇和载脂蛋白E4(apoE4)对海马神经元生长和活性的影响及银杏内酯B的保护作用。方法采用无血清培养基体外培养初生大鼠海马神经元,采用神经元特异性烯醇化酶免疫荧光进行鉴定。用160μg/ml的银杏内酯B处理海马神经元16h,40μg/ml25-OH-胆固醇和30μg/mlapoE4继续处理24h。MTT比色实验观察海马神经元生长活力的改变;Image-Proplus分析系统观察神经元最长突起长度和胞体长短经的改变。结果25-OH-胆固醇和apoE4降低海马神经元活性,抑制海马神经元突起的生长,与单纯apoE4和单纯胆固醇相比有显著性差异;银杏内酯B对神经元活性有提高趋势,但与模型组无显著差异(P>0.05),银杏内酯B可以有效促进损伤神经元突起生长,与模型组相比有显著差异(P<0.05)。结论高胆固醇在apoE4环境下损伤海马神经元,促进老年性痴呆的发生,银杏内酯B对损伤神经元在一定程度上有保护作用。

银杏内酯B对胆固醇和apoE4共处理海马神经元APP的影响

目的探讨银杏内酯B对高胆固醇和apoE4共损伤海马神经元APP基因和蛋白水平的影响。方法应用高胆固醇和apoE4共处理海马神经元,形成高胆固醇细胞损伤模型。采用实时定量RTPCR的方法检测APP mRNA的表达,采用Western-blot测定APP蛋白水平。结果高胆固醇可以上调APP mRNA的表达,提高APP蛋白水平;银杏内酯B下调APP mRNA和蛋白水平的基因表达。结论高胆固醇可以通过促进β-淀粉样蛋白形成,参与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发生、发展,银杏内酯B可以有效抑制β-淀粉样蛋白形成,为AD的治疗提供了一个可行途径。

大豆异黄酮对AD大鼠海马Apo-E4的影响

目的:探讨大豆异黄酮(SIF)对AD大鼠海马Apo-E4的影响。方法:采用Aβ双侧海马注射建立阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,HE染色观察大鼠海马组织形态结构变化,ELISA法测定海马组织Apo-E4含量。结果:大豆异黄酮可改善AD大鼠的学习记忆能力(P<0.01),减少海马神经元丢失,显著性降低Apo-E4含量(P<0.01)。结论:大豆异黄酮可能通过降低AD大鼠海马Apo-E4的含量改善AD大鼠学习记忆能力。