北京地区宫颈癌HPV16上游调控序列、E6、E7癌基因序列初步分析

为检测HPV16上游调控序列(Upstream regulatory region,URR)、E6、E7癌基因变异在北京地区宫颈癌患者癌组织中的分布特征,探讨该地区宫颈癌发生同HPV16变异株间的相关性,文章以提取的31例HPV16检测阳性宫颈癌组织DNA为模板,设计针对性引物扩增URR、E6、E73个目的片段,PCR产物直接测序并通过GenBank对比分析变异和分支鉴定情况。在所分析的宫颈癌组织中,URR是突变频率最高的片段,其次为E7,最保守的序列为E6。共发现热突变位点8个,分别为URR序列上G7521A(100%)、C7435G(96.77%)、C24T(45.16%)、A7729C(45.16%)、G7839A(45.16%);E6序列上T178G(41.94%);E7序列上A647G(45.16%)、T846C(45.16%)。HPV16分支分布频率最广的是As型(54.84%),其次为E型(45.16%)。研究结果提示,HPV16URR序列上G7521A、A7729C、G7839A,E6序列上T178G、T350G,E7序列上A647G、G658A等位点的变异可能与病毒致癌潜能及宫颈癌的发生相关。北京地区宫颈癌患者中As和E型可能是两种最主要的HPV16分支,这有可能会为HPV疫苗的研制和感染治疗提供有价值的信息。As型和E型病毒在不同年龄组和不同肿瘤分期组的患者中分布频率有差异,这可能会为揭示宫颈癌年轻化趋势提供新的线索。

人乳头瘤病毒16 E2、E6癌基因在子宫颈癌中的表达及E2缺失分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16型E2、E6癌基因的表达及含量变化在子宫颈癌发生中的作用,以及E2基因的缺失与子宫颈病变的关系。方法收集山西省肿瘤医院经病理学确诊的141例子宫颈癌新发病例作为病例组,同时选择在同一医院住院、经组织病理学确诊的137例子宫肌瘤患者为良性肿瘤对照组,从社区妇科体检的1582名妇女中随机抽取129名妇女为健康对照组。利用多重PCR对从子宫颈组织和脱落细胞中提取的DNA进行HPV16 E2、E6基因扩增,在VILBER凝胶成像仪上利用Bio-1D++软件分析E2、E6基因的相对含量。结果HPV16 E6阳性率在子宫颈癌组、子宫肌瘤组和健康对照组分别为46.8%、24.1%和2.3%,HPV16 E2阳性率分别为36.2%、19.0%和0.0%,差异均有统计学意义。子宫颈癌组和子宫肌瘤组中E2缺失率分别为22.73%和21.21%,健康对照组未检出E2阳性者。HPV16 E6和E2含量均为病例组高于对照组,在子宫颈癌组内E6含量明显高于E2(t=2.70,P=0.009),两者的比值为1.24。结论子宫颈癌患者HPV16 E2、E6癌基因的阳性表达率和表达量均高于子宫肌瘤患者和健康妇女,E6癌基因的高表达在子宫颈癌发生中起重要作用,而E2基因的缺失在子宫颈癌变过程中可能发挥着不可忽视的作用。

人乳头瘤病毒16型E6和E7癌基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响

人乳头瘤病毒的16型E6和E7癌基因已广泛用于建立哺乳动物的永生化细胞,但能否用于建立鸡的永生化细胞尚不清楚。试验究克隆人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌基因,分别构建这两个病毒癌基因的逆转录病毒表达载体,包装成逆转录病毒颗粒,感染鸡前脂肪细胞后,采用MTT比色法检测E6和E7基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响。结果表明,与对照组相比,E7基因显著促进鸡前脂肪细胞增殖,而E6基因则作用不明显。本研究为E6和E7基因在鸡细胞永生化研究奠定基础。

人乳头瘤病毒癌基因E6和E7对细胞影响的研究进展

高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续感染是宫颈癌发生的主要危险因素,HPV感染细胞可通过癌基因E6和E7靶向细胞途径引起多种细胞改变,主要包括调节细胞周期进展、逃避细胞凋亡、诱导DNA损伤、影响细胞代谢等,最终在细胞内发挥其致瘤作用。本文将主要对高危型人乳头瘤病毒癌基因E6和E7引起的细胞改变进行综述。

反义HPV16 E6/E7-EGFP重组质粒的构建及其对宫颈癌SiHa细胞的促凋亡作用

目的:构建HPV16早期基因E6/E7的反义重组质粒,探讨其对SiHa细胞的促凋亡作用。方法:将HPV16E6/E7基因片段反向克隆于真核表达载体pEGFP-C1并转染SiHa细胞,用RT-PCR方法检测转染后SiHa细胞E6、E7基因mRNA的表达,West-ernblot方法检测转染后E6/E7蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率。结果:成功构建携带HPV16E6/E7基因反义片段的真核表达载体,转染该质粒后,SiHa细胞E6、E7基因的mRNA和蛋白均明显下调;转染后细胞凋亡率为(59.3±11.3)%,明显高于转染空载体组[(9.4±1.8)%]和未转染组[(2.1±0.4)%](P<0.05)。结论:反义HPV16E6/E7基因可下调宫颈癌细胞中E6/E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了实验依据。