北京地区宫颈癌HPV16上游调控序列、E6、E7癌基因序列初步分析

为检测HPV16上游调控序列(Upstream regulatory region,URR)、E6、E7癌基因变异在北京地区宫颈癌患者癌组织中的分布特征,探讨该地区宫颈癌发生同HPV16变异株间的相关性,文章以提取的31例HPV16检测阳性宫颈癌组织DNA为模板,设计针对性引物扩增URR、E6、E73个目的片段,PCR产物直接测序并通过GenBank对比分析变异和分支鉴定情况。在所分析的宫颈癌组织中,URR是突变频率最高的片段,其次为E7,最保守的序列为E6。共发现热突变位点8个,分别为URR序列上G7521A(100%)、C7435G(96.77%)、C24T(45.16%)、A7729C(45.16%)、G7839A(45.16%);E6序列上T178G(41.94%);E7序列上A647G(45.16%)、T846C(45.16%)。HPV16分支分布频率最广的是As型(54.84%),其次为E型(45.16%)。研究结果提示,HPV16URR序列上G7521A、A7729C、G7839A,E6序列上T178G、T350G,E7序列上A647G、G658A等位点的变异可能与病毒致癌潜能及宫颈癌的发生相关。北京地区宫颈癌患者中As和E型可能是两种最主要的HPV16分支,这有可能会为HPV疫苗的研制和感染治疗提供有价值的信息。As型和E型病毒在不同年龄组和不同肿瘤分期组的患者中分布频率有差异,这可能会为揭示宫颈癌年轻化趋势提供新的线索。

人乳头瘤病毒16型E6和E7癌基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响

人乳头瘤病毒的16型E6和E7癌基因已广泛用于建立哺乳动物的永生化细胞,但能否用于建立鸡的永生化细胞尚不清楚。试验究克隆人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌基因,分别构建这两个病毒癌基因的逆转录病毒表达载体,包装成逆转录病毒颗粒,感染鸡前脂肪细胞后,采用MTT比色法检测E6和E7基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响。结果表明,与对照组相比,E7基因显著促进鸡前脂肪细胞增殖,而E6基因则作用不明显。本研究为E6和E7基因在鸡细胞永生化研究奠定基础。

口腔鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒16型转化基因E_7的检测

【目的】准确检测口腔鳞状细胞癌及正常口腔粘膜中人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)的感染状况 ,探讨人乳头瘤病毒 16型与人口腔鳞状细胞癌之间的关系。【方法】从 30例未经治疗的口腔鳞状细胞癌患者肿瘤组织及 30例健康志愿者正常口腔粘膜切取标本 ,液氮冷冻保存 ;常规提取组织DNA ,设计HPV16E7转化基因特异性引物 ,进行聚合酶链反应 ,对PCR结果进行检测 ,记录结果。【结果】 30例口腔鳞状细胞癌患者中检测到 11例HPV16阳性 ,感染率 36 7% ;30例正常对照组中检测到 4例HPV16阳性 ,感染率 11 1%。经 χ2 检验 ,两者差别有显著性。【结论】人乳头瘤病毒 16型与人口腔鳞状细胞癌有一定关系 ,但HPV16在人口腔鳞状细胞癌发生发展过程中所起的作用还有待进一步研究。

人乳头瘤病毒癌基因E6和E7对细胞影响的研究进展

高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续感染是宫颈癌发生的主要危险因素,HPV感染细胞可通过癌基因E6和E7靶向细胞途径引起多种细胞改变,主要包括调节细胞周期进展、逃避细胞凋亡、诱导DNA损伤、影响细胞代谢等,最终在细胞内发挥其致瘤作用。本文将主要对高危型人乳头瘤病毒癌基因E6和E7引起的细胞改变进行综述。

人乳头状瘤病毒16 E7 DNA在结直肠腺癌组织中的表达

结直肠癌与人类乳头状瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染有一定的关系,但由于检测方法、标本选择及样本数量不同,各研究结果之间差异很大。为进一步明确结直肠癌变与HPV16感染的关系,采用多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)对82例原发性结直肠腺癌患者手术切除的新鲜癌及癌旁正常粘膜组织进行了前瞻性对照研究,检测了组织中HPV16E7DNA的表达并进行测序鉴定。结果显示,结直肠腺癌组织HPV16E7的表达阳性率(42/82)明显高于癌旁正常粘膜组织(4/82);直肠癌组织中HPV16E7的表达(64.10%)明显高于升结肠癌(18.18%),即癌灶部位距肛门越近,感染率越高;HPV16阳性率与Dukes分期相关,Dukes分期越晚感染率越高;与癌组织分化程度无相关性。结果提示结直肠癌的发生、发展可能与HPV16感染有关。

反义HPV16 E6/E7-EGFP重组质粒的构建及其对宫颈癌SiHa细胞的促凋亡作用

目的:构建HPV16早期基因E6/E7的反义重组质粒,探讨其对SiHa细胞的促凋亡作用。方法:将HPV16E6/E7基因片段反向克隆于真核表达载体pEGFP-C1并转染SiHa细胞,用RT-PCR方法检测转染后SiHa细胞E6、E7基因mRNA的表达,West-ernblot方法检测转染后E6/E7蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率。结果:成功构建携带HPV16E6/E7基因反义片段的真核表达载体,转染该质粒后,SiHa细胞E6、E7基因的mRNA和蛋白均明显下调;转染后细胞凋亡率为(59.3±11.3)%,明显高于转染空载体组[(9.4±1.8)%]和未转染组[(2.1±0.4)%](P<0.05)。结论:反义HPV16E6/E7基因可下调宫颈癌细胞中E6/E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了实验依据。

人乳头状瘤病毒16 E7 DNA在结直肠腺癌组织中的表达(英文)

目的分析不同部位、分期的结直肠腺癌及正常黏膜组织中人乳头状瘤病毒(human pap illomavirus,HPV)16型E7的表达状况。方法应用PCR及免疫组化方法检测82例手术切除的结直肠癌新鲜标本及距肿瘤近端10cm以远的正常黏膜组织中HPV 16 E7 DNA及蛋白的表达。结果结直肠癌组织HPV 16 E7 DNA表达阳性率为51.22%(42/82),明显高于正常黏膜组织的4.88%(4/82),P<0.05;直肠癌组织中HPV16 E7 DNA表达阳性率为64.10%(25/39),明显高于升结肠癌的18.18%(2/11),P<0.05;HPV 16 E7 DNA表达阳性率与Dukes分期有关(P<0.05),与癌组织分化程度无关。免疫组化染色显示,HPV 16 E7蛋白主要为细胞核表达,胞浆亦可见少量表达,进一步确认了HPV 16的感染,且HPV 16 E7蛋白与HPV 16 E7基因的表达具有相关性,免疫组化敏感性较PCR方法为低。结论结直肠癌组织HPV 16 E7 DNA及蛋白的表达阳性率明显高于正常黏膜组织,提示部分结直肠癌存在HPV 16感染。癌灶部位距肛门越近,感染率越高;Dukes分期越晚感染率越高。

82例结直肠癌组织HPV16 DNA表达的研究

目的:分析不同部位、分期的结直肠腺癌及癌旁正常粘膜组织中人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)16的表达。方法:应用PCR方法检测82例手术切除的结直肠癌新鲜标本及癌旁正常黏膜组织中HPV16E7DNA的表达。结果:结直肠癌组织HPV16E7DNA的阳性表达率(42/82)明显高于癌旁正常黏膜组织(4/82,P<0.01);直肠癌组织中HPV16E7的表达(64.10%)明显高于升结肠癌(18.18%,P<0.05);HPV16阳性率与Dukes分期相关(P<0.01),与癌组织分化程度无相关性。结论:结直肠癌组织HPV16E7DNA的表达率明显高于癌旁正常黏膜组织,提示部分结直肠癌存在HPV16感染。癌灶部位距肛门越近,感染率越高;Dukes分期越低感染率越高。