基于生物信息学分析E74样转录因子3在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及作用机制

目的采用生物信息学方法探讨E74样转录因子3(ELF3)mRNA在卵巢浆液性囊腺癌中的表达水平,及其对卵巢浆液性囊腺癌的诊断、预后评估价值,并分析其可能的作用机制。方法从癌症基因组图谱数据库(TCGA)中获取2006至2021年内收录的379例卵巢浆液性囊腺癌组织样本和88例正常卵巢组织样本的临床信息以及ELF3 mRNA表达数据分析其表达差异,获取基因表达综合数据库(GEO)GSE38666数据集中12例正常卵巢上皮细胞及18例卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞的测序结果进行ELF3 mRNA表达水平验证。比较卵巢浆液性囊腺癌组织与正常卵巢组织、卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞与正常卵巢上皮细胞ELF3表达情况;比较不同临床病理特征患者卵巢浆液性囊腺癌组织ELF3 mRNA表达水平;分析ELF3 mRNA表达水平对卵巢浆液性囊腺癌的诊断价值;比较ELF3 mRNA高表达与低表达患者预后;富集分析ELF3在卵巢浆液性囊腺癌中可能参与的信号通路。结果卵巢浆液性囊腺癌组织ELF3 mRNA表达水平高于正常卵巢组织(P<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞ELF3 mRNA表达水平高于正常卵巢上皮细胞(P<0.05)。不同国际妇产科协会(FIGO)等级、初始治疗效果、种族、组织学分级、肿瘤发生部位、血管侵犯、肿瘤残留的患者卵巢浆液性囊腺癌组织ELF3 mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05),年龄>60岁的患者卵巢浆液性囊腺癌组织ELF3 mRNA表达水平低于年龄≤60岁的患者(P<0.05)。ELF3 mRNA表达水平诊断卵巢浆液性囊腺癌的ROC曲线显示AUC为0.988,最佳截断值为4.450,灵敏度为0.988,特异度为0.977。ELF3 mRNA低表达患者总生存期和疾病特异性生存期均优于高表达患者(均P<0.05)。ELF3 mRNA表达相关的基因可能参与G蛋白偶联受体(GPCR)配体结合和神经元系统两条信号通路。结论ELF3 mRNA表达水平在卵巢浆液性囊腺癌中具有较高的诊断、预后评估价值,高表达患者预后较差,并可能通过GPCR配体结合和神经元系统两条信号通路发挥作用。

miR-147b通过调控ELF3表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的探索微小RNA(miR)-147b在卵巢癌中的作用及其生物学机制。方法选择在衡水市人民医院手术切除治疗并经病理确诊的高级别浆液性卵巢癌患者60例为卵巢癌组,同期选择健康体检者24例做对照组,实时荧光定量-聚合酶链反应(qPCR)检测miR-147b含量。Western印迹检测E74样因子(ELF)3蛋白表达。运用A2780细胞作为体外模型,通过转染miR-147b质粒和si-miR-147b调控miR-147b表达量,分组为阳性对照组、miR-147b组、阴性对照组、si-miR-147b组。通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)检查细胞增殖、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色细胞、凋亡相关蛋白试剂盒检测凋亡的相关指标。结果与对照组比较,卵巢癌组血清中miR-147b表达量显著增加(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ卵巢癌组miR-147b表达量明显高于Ⅰ~Ⅱ卵巢癌组(P<0.05)。miR-147b高表达组总生存率(OS)和无病生存率(DFS)明显低于miR-147b低表达组(P<0.05)。与阳性对照组比较,miR-147b质粒miR-147b mRNA表达量明显增加,也可促进卵巢癌细胞增殖;与阴性对照组比较,si-miR-147b质粒miR-147b mRNA表达量明显减少,明显抑制卵巢癌细胞增殖(P<0.05,P<0.001)。与阴性对照组比较,si-miR-147b组磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3)K、p-蛋白激酶B(Akt)表达明显降低;与阳性对照组比较,miR-147b组p-PI3K、p-Akt表达明显升高(均P<0.001)。与阳性对照组比较,miR-147b组葡萄糖消耗、乳酸产生和三磷酸腺苷(ATP)数量明显升高;与阴性对照组比较,si-miR-147b组葡萄糖消耗、乳酸产生和ATP数量明显降低(P<0.05,P<0.001)。在卵巢癌体外模型中,与阳性对照组比较,miR-147b过度表达明显促进细胞外酸化率(ECAR),明显降低耗氧率(OCR)相对水平;与阴性对照组比较,si-miR-147b组ECAR明显降低,OCR相对水平明显升高(均P<0.001)。与阳性对照组比较,miR-147b组细胞凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)活性水平和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3/9活性水平明显降低(均P<0.001)。与阴性对照组比较,si-miR-147b组细胞凋亡率、LDH活性水平和Caspase-3/9活性水平明显升高(P<0.05)。miR-147b+ELF3组荧光素酶活性显著低于空白对照+STK4组(P<0.05)。与阳性对照组比较,miR-147b组ELF3表达显著降低;与阴性对照组比较,si-miR-147b组ELF3表达显著升高(均P<0.05)。结论miR-147b在卵巢癌组织中呈高表达,miR-147b可通过调控ELF3的表达调控卵巢癌细胞的增殖和凋亡,miR-147b有希望成为卵巢癌检测和预后的重要指标。

莱菔硫烷对糖尿病视网膜病变Nrf2通路和NLRP3炎性小体的影响

目的:探讨莱菔硫烷对糖尿病视网膜病变Nrf2通路和NLRP3炎性小体的影响。方法:将SD大鼠分为空白对照组(blank control group,BC组)、模型组(model group,M组)、阳性对照组(positive contorl group,PC组)、SFN低剂量组(SFN low dose group,SLD组)和SFN高剂量组(SFN high dose group,SHD组)。M组、PC组、SLD组和SHD组采用高脂饲料联合STZ法造模,造模成功后,SLD组给予SFN 25mg/kg腹腔注射,SHD组给予SFN 50mg/kg腹腔注射,PC组给予羟苯磺酸钙溶液1.0/kg腹腔灌注,BC组和M组给予等量生理盐水腹腔注射,连续干预6周。观察大鼠视网膜组织形态、炎性因子和氧化还原指标水平、Nrf2-2、HO-1mRNA水平和蛋白表达水平。结果:M组大鼠视网膜细胞排列疏松,内外核层抛离紊乱,细胞水肿明显;PC组、SLD和SHD组视网膜结构较M组清晰,细胞水肿明显减少;SHD组改善较PC组和SLD组更为明显。M组MDA、IL-1β、TNF-α、NLRP3蛋白、ASC蛋白、caspase-1蛋白、TXNIP蛋白水平显著高于BC组(P<0.05),SOD、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2蛋白、HO-1蛋白水平低于BC组(P<0.05);PC组和SLD组MDA、IL-1β、TNF-α、NLRP3蛋白、ASC蛋白、caspase-1蛋白、TXNIP蛋白水平低于M组(P<0.05),SOD、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2蛋白、HO-1蛋白水平高于M组(P<0.05);SHD组MDA、IL-1β、TNF-α、NLRP3蛋白、ASC蛋白、caspase-1蛋白、TXNIP蛋白水平低于M组、PC组和SLD组(P<0.05),SOD、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2蛋白、HO-1蛋白水平高于M组、PC组和SLD组(P<0.05)。结论:SFN可能通过激活Nrf2信号通路,降低氧化应激和TXNIP水平,从而降低NLRP3信号通路的激活,从而对DR产生保护作用。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

NFE2L3 KLF17蛋白表达对直肠癌患者预后的预测价值

目的探讨核因子E2相关因子3、Kruppel样转录因子17蛋白表达对直肠癌患者预后的预测价值。方法对125例直肠癌患者采用免疫组化法检测并比较癌组织、癌旁组织中核因子E2相关因子3、Kruppel样转录因子17蛋白阳性率,比较不同资料患者核因子E2相关因子3、Kruppel样转录因子17蛋白表达阳性率。随访3 a统计生存率,比较不同核因子E2相关因子3、Kruppel样转录因子17蛋白表达患者3 a生存率,分析两者与3 a生存率的相关性。结果癌组织中核因子E2相关因子3蛋白阳性率显著高于癌旁组织(P<0.01),Kruppel样转录因子17蛋白阳性率显著低于癌旁组织(P<0.01)。有无脉管侵犯、不同KLF17蛋白表达情况患者核因子E2相关因子3蛋白阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。不同TNM分期、核因子E2相关因子3蛋白表达情况患者Kruppel样转录因子17蛋白阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。入组患者3 a生存率为75.4%,核因子E2相关因子3蛋白阳性表达者3 a生存率显著低于阴性表达者,Kruppel样转录因子17蛋白阳性表达者3 a生存率显著高于阴性表达者(P<0.01)。核因子E2相关因子3蛋白阳性率与3 a生存率呈显著负相关(P<0.01),Kruppel样转录因子17蛋白阳性率与3 a生存率呈显著正相关(P<0.01)。结论直肠癌患者癌组织中核因子E2相关因子3、Kruppel样转录因子17蛋白阳性率与3 a生存率有关,可作为直肠癌患者预后的独立预测因子。

人表皮生长因子受体2对卵巢癌细胞凋亡、侵袭的影响及机制研究

目的 探讨人表皮生长因子受体2(HER2)对卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡、侵袭的影响及机制。方法 收集27例卵巢癌患者的27对卵巢癌组织和癌旁组织作为组织样本,选取卵巢癌细胞(A2780细胞和SKOV3细胞)、卵巢上皮细胞HOSEpiC作为实验细胞。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹法、免疫组织化学技术检测HER2、E74样ETS转录因子3(ELF3)、音猬因子(SHH)、GLIS家族锌指蛋白1(GLI1)等表达水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、流式细胞仪和Transwell小室实验检测A2780细胞和SKOV3细胞的活力、凋亡率和侵袭能力。结果 HER2蛋白和HER2 mRNA在卵巢癌组织中的表达均高于癌旁组织,HER2蛋白在A2780细胞、SKOV3细胞中的表达均高于HOSEPiC细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。A2780、SKOV3细胞中,与转染si-NC的细胞相比,转染si-HER2的细胞HER2蛋白表达水平降低,且细胞活力降低、细胞凋亡率增加、侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。A2780、SKOV3细胞中,转染si-HER2的细胞ELF3 mRNA表达均低于转染si-NC的细胞,且转染si-HER2+ELF3的细胞ELF3 mRNA表达均高于转染si-HER2+pcDNA的细胞,差异有统计学意义(P<0.05);与转染si-NC的细胞相比,转染si-HER2的细胞活力降低、细胞凋亡率增加、侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05);与转染si-HER2+pcDNA的细胞相比,转染si-HER2+ELF3的细胞活力增加、细胞凋亡率降低、侵袭细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。A2780、SKOV3细胞中,转染si-HER2的细胞SHH、GLI1蛋白表达均低于转染si-NC的细胞,转染si-HER2+ELF3的细胞SHH、GLI1蛋白表达均高于转染si-HER2+pcDNA的细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HER2沉默可通过调控ELF3/SHH通路促进卵巢癌细胞凋亡和抑制卵巢癌细胞侵袭,靶向抑制HER2或可成为治疗卵巢癌的一种有效策略。

丁苯酞对急性脑梗死患者疗效、生化指标及外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA表达的影响

目的探讨丁苯酞联合依达拉奉对急性脑梗死患者疗效、血浆载脂蛋白E(ApoE)、C1q肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP)3、CTRP9、脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)及外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响。方法选取2019年1月至2022年1月在南京市浦口区中医院进行治疗的急性脑梗死患者196例,按随机数字表法将患者分为两组进行研究比较,每组98例。对照组患者采用常规治疗+依达拉奉治疗,观察组在对照组基础上结合丁苯酞治疗。两组疗程均为2周。比较两组治疗后疗效、日常生活活动能力Barthel指数、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,以及血浆ApoE、CTRP3、CTRP9、LP-PLA2水平和外周血单核细胞TLR4 mRNA相对表达量。结果治疗后观察组患者总有效率高于对照组;两组患者治疗后Barthel指数及血浆CTRP3、CTRP9水平均高于治疗前,观察组高于对照组,而NIHSS评分及血浆ApoE、LP-PLA2水平、外周血单核细胞TLR4 mRNA相对表达量低于治疗前,观察组低于对照组(均P<0.05)。结论丁苯酞联合依达拉奉治疗急性脑梗死患者的疗效良好,可调控生化指标,降低外周血单核细胞TLR4 mRNA表达,抑制动脉粥样硬化斑块形成,减轻机体炎症反应,改善神经功能,促进患者日常活动能力恢复。

电针对帕金森病小鼠Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)小鼠黑质中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响,探讨其神经保护机制。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、假电针组、电针组,每组10只。采用鱼藤酮灌胃4周建立PD小鼠模型。电针组于“风府”和双侧“太冲”“足三里”给予电针刺激,每日1次,连续2周;假电针组于同样穴位浅刺至皮下,连接电针仪后不通电,其余操作均同电针组。采用敞箱实验观察各组小鼠的行为学变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分升高(P<0.01),自主运动的总时间缩短、总路程减少、平均速度降低(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01),黑质中TH阳性表达减少(P<0.01),Nrf2mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18mRNA表达水平均升高(P<0.01)。与模型组、假电针组比较,电针组小鼠行为学评分降低(P<0.01),自主运动的总时间延长、总路程增加、平均速度升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05),黑质中TH阳性表达增加(P<0.01),Nrf2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,假电针组小鼠上述各项指标差异均无统计学意义。结论:电针“风府”“太冲”和“足三里”可改善PD小鼠运动障碍,减少黑质多巴胺神经元的丢失,抑制神经炎性反应,其作用机制可能与调控Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡相关。

丙泊酚对脂多糖诱导急性肾损伤小鼠的保护作用及Nrf2/HO-1/NLRP3通路的影响

目的:探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导急性肾损伤(AKI)小鼠的保护作用及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/HO-1/NLRP3)通路的影响。方法:40只小鼠随机分为正常对照组、AKI模型组、丙泊酚组、Brusatol组、丙泊酚+Brusatol组。分析检测小鼠尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肾脏系数、血清中氧化应激及肾组织中炎症因子水平、Nrf2/HO-1/NLRP3通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组相比,AKI模型组小鼠肾脏系数、尿蛋白、血清BUN、Scr、MDA、肾组织损伤评分、肾组织炎症因子、NLRP3蛋白升高,血清SOD、GSH、肾组织Nrf2、HO-1蛋白降低(P<0.05)。与AKI模型组相比,丙泊酚组小鼠肾脏系数、尿蛋白、血清BUN、Scr、MDA、肾组织损伤评分、肾组织炎症因子、NLRP3蛋白降低,血清SOD、GSH、肾组织Nrf2、HO-1蛋白升高(P<0.05);Brusatol组则相反。与丙泊酚组相比,丙泊酚+Brusatol组小鼠肾脏系数、尿蛋白、血清BUN、Scr、MDA、肾组织损伤评分、肾组织炎症因子、NLRP3蛋白升高,血清SOD、GSH、肾组织Nrf2、HO-1蛋白降低(P<0.05)。结论:丙泊酚可改善LPS诱导的小鼠急性肾损伤,可能是通过激活Nrf2/HO-1/NLRP3通路实现的。

E74样因子5过表达抑制结肠癌细胞生物学行为的体内外实验研究

目的探讨E74样因子5(ELF5)过表达对结直肠癌细胞的生长和侵袭能力以及裸鼠成瘤的影响。方法人结直肠癌SW480和HT-29细胞分为5组:LV-GFP组,转染空载体LV-GFP慢病毒;LV-ELF5组,转染重组LV-ELF5慢病毒;shRNA-NC组,转染空载体shRNA-NC慢病毒;shRNA-ELF5组,转染重组shRNA-ELF5慢病毒;对照组,未转染任何载体。转染72 h后,取含有慢病毒的细胞上清液,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中ELF5的mRNA表达水平;Western blot检测ELF5、凋亡相关的cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9、侵袭相关的E-cadherin和Ncadherin的蛋白表达水平;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;TUNEL实验检测组织中细胞凋亡;免疫组化检测组织中E-cadherin、N-cadherin的表达。将20只BALB/c裸鼠分为4组,每组5只:LV-GFP组、shRNA-NC组、LV-ELF5组、shRNA-ELF5组,于裸鼠皮下注射含重组慢病毒的SW480细胞上清液,构建裸鼠成瘤模型,监测移植瘤体积变化。第30天取裸鼠移植瘤组织,测量肿瘤质量,Western blot检测移植瘤ELF5蛋白的表达,TUNEL染色检测移植瘤凋亡,免疫组化检测移植瘤中N-cadherin阳性表达。结果与对照组细胞比较,两个细胞系LV-GFP组和shRNA-NC组细胞的各指标差异无统计学意义。Western blot结果与RT-qPCR结果表明,两个细胞系LV-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均上调(P<0.05,与LV-GFP组比较),shRNA-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05,与shRNA-NC组比较),ELF5过表达体系和干扰体系构建成功。与LV-GFP组比较,LV-ELF5组降低了细胞活力和克隆形成率(P<0.05),促进SW480细胞凋亡,并上调cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达(P<0.05),抑制细胞侵袭,并上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达(P<0.05);ELF5干扰后,细胞的上述表现呈相反趋势(P<0.05,shRNA-ELF5组与shRNA-NC组比较)。体内实验结果表明,ELF5过表达缩小裸鼠肿瘤体积和降低肿瘤质量(P<0.05),促进组织中细胞凋亡(P<0.05),ELF5蛋白表达增加,抑制N-cadherin蛋白表达(P<0.05)。当EFL5表达抑制,上述实验结果呈相反趋势。结论体内外实验表明ELF5过表达可促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞的生长和侵袭。

加味参苓白术散调控Nrf2/keap1/NLRP3信号通路改善特发性肺纤维化的实验研究

目的探究加味参苓白术散对特发性肺纤维化(IPF)大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路的影响,探讨该方干预IPF的作用机制。方法将70只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、激素药组、中药低、中、高剂量组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组气管内滴注博来霉素制备IPF大鼠模型,假手术组气管滴注等量生理盐水。造模后24h,中药低、中、高剂量组分别灌服加味参苓白术散水煎液(6.5、13、26g·kg^(-1)),激素药组灌服醋酸泼尼松水溶液(0.5mg·kg^(-1)),假手术组、模型组灌服等容积生理盐水,共28d。末次给药结束后,取大鼠肺组织备检观察肺组织病理改变;检测肺组织中炎症因子IL-1β、肿瘤坏死因子TNF-α及抗氧化剂GSH的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测NL-RP3、Nrf2、Keap1、ASC蛋白表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠肺组织病理切片可见明显的炎症程度和胶原增殖;肺组织中IL-1β、TNF-ɑ含量明显增加(P<0.01),GSH含量显著降低(P<0.01);肺组织NLRP3、ASC、Keap1蛋白表达明显升高(P<0.01),Nrf2蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各给药组病理切片炎症程度和胶原增殖情况不同程度降低;肺组织中IL-1β、TNF-ɑ含量明显降低,其中激素药组、中药中剂量组及中药高剂量组具有统计学差异(P<0.01或P<0.05),激素药组及中药高剂量组大鼠肺组织中GSH含量显著升高(P<0.05);中药高剂量组大鼠肺组织NLRP3、ASC、Keap1蛋白表达明显降低,Nrf2蛋白表达显著升高,且具有统计学差异(P<0.01,P<0.05)。结论加味参苓白术散可调控Nrf2/Keap1/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡,从而延缓IPF大鼠病理进程。

基于Nrf2-NLRP3-GSDMD信号通路探讨肾消解毒通络方含药血清抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡的分子机制

目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2 related factor2,Nrf2)-Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)信号通路,探究肾消解毒通络方(Shenxiao Jiedu Tongluo Recipe,SJTR)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1焦亡的影响及分子机制。方法金黄地鼠灌胃给药制备SJTR含药血清。体外常规培养HBZY-1细胞,随机分为对照组、模型组、抑制剂组及中药低中高剂量6组。对照组细胞加入正常血清在低糖培养液中培养,模型组加入正常血清在高糖培养液中培养,抑制剂组加入正常血清及MCC950在高糖培养液中培养,中药低中高剂量组分别加入SJTR含药血清在高糖培养液中培养,干预24 h后收集细胞及上清液,ELISA检测各组细胞上清液中白介素-1β(Interleukin,IL-1β)、IL-18(Interleukin,IL-18)、IL-6(Interleukin,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);RT-PCR检测HBZY-1细胞Nrf2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子mRNA表达;Western blot法检测各分子蛋白的表达;免疫荧光法检测NLRP3分子蛋白的表达及分布;LDH释放实验检测细胞膜损伤情况;TUNEL染色检测DNA损伤情况。结果与对照组比较,模型组细胞上清液各炎症因子水平升高,MDA表达升高,SOD表达降低(P<0.05);细胞Nrf2分子呈低表达,IL-1β分子mRNA表达升高,NLRP3、Casepase-1、GSDMD分子mRNA及蛋白表达增强(P<0.05);上清液LDH含量增高(P<0.05);TUNEL阳性细胞增多。与模型组比较,中药中高剂量组及抑制组细胞上清液炎症因子含量下降,MDA水平降低而SOD升高(P<0.05);细胞Nrf2分子表达上调,而NLRP3、Caspase-1、GSDMD等分子表达明显降低(P<0.05);上清液LDH含量下降(P<0.05);TUNEL阳性细胞减少。结论SJTR含药血清可通过调控Nrf2-NLRP3-GSDMD信号通路各分子表达,抑制高糖诱导的HBZY-1细胞氧化应激及炎症反应,拮抗细胞焦亡,发挥细胞保护作用。

维生素A、维生素E、重组人生长激素三联治疗矮小症患儿的效果

目的:观察维生素A、维生素E、重组人生长激素三联治疗矮小症患儿的效果。方法:选取138例矮小症患儿为研究对象,按照随机数字表法分为A、B、C三组各46例。A组给予重组人生长激素治疗,B组在A组基础上增加维生素A治疗,C组在B组基础上增加维生素E治疗。比较三组疗效、治疗前后胰岛素样生长因子(IGFs)、胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、生长发育指标(身高、体质量和骨龄)水平,以及不良反应发生率。结果:C组治疗总有效率高于B组和A组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,三组IGFs、IGFBP-3水平及身高、体质量和骨龄均高于治疗前,且C组均高于B组和A组,差异有统计学意义(P<0.05);三组患儿不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:维生素A、维生素E、重组人生长激素三联治疗矮小症患儿可提高治疗总有效率及IGFs、IGFBP-3和生长发育指标水平,优于单纯重组人生长激素治疗或重组人生长激素联合维生素A治疗效果。

他莫昔芬对子宫肌瘤大鼠血清前列腺素E2和前列腺素F2α的影响及机制研究

目的探讨他莫昔芬对子宫肌瘤大鼠血清前列腺素E2和前列腺素F2α的影响及机制。方法将48只造模成功的大鼠按照随机数字表法平均分为3组:模型组、米非司酮组、他莫昔芬组,每组各16只,分别采用0.9%氯化钠溶液、米非司酮、他莫昔芬10 mg/kg进行灌胃,1次/d,共给药30 d。观察与记录所有大鼠治疗第10、20、30天的体重;比较治疗第30、45天的子宫重量、子宫系数、血清前列腺素E2、前列腺素F2α、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果治疗第10、20、30天,米非司酮组、他莫昔芬组的体重均显著高于模型组,他莫昔芬组也显著高于米非司酮组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗第30、45天,米非司酮组、他莫昔芬组的子宫重量和子宫系数均显著低于模型组,他莫昔芬组也显著低于米非司酮组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗第30、45天,米非司酮组、他莫昔芬组的血清前列腺素E2显著高于模型组,血清前列腺素F2α含量显著低于模型组,他莫昔芬组以上指标较米非司酮组变化更显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗第30、45天,米非司酮组、他莫昔芬组的IGFBP-3、VEGF蛋白相对表达水平显著低于模型组(P<0.05),他莫昔芬组也显著高于米非司酮组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论他莫昔芬在子宫肌瘤大鼠的应用能调节前列腺素E2/前列腺素F2α分泌平衡,还可降低IGFBP-3、VEGF蛋白表达水平,能促进提高大鼠体重,降低大鼠的子宫重量和子宫系数。

根皮素对2型糖尿病肾病小鼠的肾保护作用及机制

为探究根皮素对2型糖尿病肾病小鼠肾损伤的分子保护作用及潜在机制,将小鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、阳性药物组(二甲双胍500 mg/kg)、根皮素低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg·d)。造模成功后,各组小鼠灌胃给予相应药物,12周后,观察肾脏肥大指数、肾脏病理形态学变化,测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和尿β2-微球蛋白(β2-MG)、血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)等指标,并检测肾组织丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达。结果显示:与模型组比较,根皮素中、高剂量组小鼠肾脏肥大指数极显著减小(P<0.01);HE染色和Masson染色见肾小球体积明显减小、系膜增生明显减少,肾小球和肾间质纤维化明显减轻;血BUN、Scr、IL-1β、IL-18和肾组织MDA含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ι(CollagenΙ)、NLRP3、IL-1β和Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01);肾组织GSH-Px活性、Nrf2、HO-1、钙粘附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达显著升高(P<0.05)。结果表明:根皮素能保护2型糖尿病肾病小鼠肾功能改善肾纤维化,可能与调控Nrf2/HO-1/NLRP3通路改善氧化应激与炎症反应有关。

伴TFE3基因易位的子宫颈PEComa 1例并文献复习

目的探讨伴转录因子E3(TFE-3)基因易位的子宫颈血管周上皮样细胞肿瘤(PEComa)的临床病理特征。方法结合相关文献,对1例TFE3基因易位的子宫颈PEComa临床资料、病理切片、免疫组织化学标记及荧光原位杂交(FISH)结果进行分析。结果肿瘤位于子宫颈,大小4.0 cm×3.0 cm×2.5 cm,切面质地较嫩。组织学显示肿瘤细胞上皮样,细胞质丰富、透明,细胞核有中度异型,核仁可见,核分裂像约5个/50 HPF;瘤细胞间有大量纤细血管网。较多凝固性坏死,可见脉管侵犯。免疫组织化学染色显示肿瘤细胞弥漫表达TFE-3、人类黑素体单克隆抗体(HMB45)、黑素A(MelanA),不表达细胞角蛋白(CK)、结蛋白(Desmin)、平滑肌肌动蛋白(SMA);肿瘤高增殖活性区域Ki-67阳性细胞比例约30%。FISH检测出TFE3基因易位。结论伴TFE3基因易位的子宫颈PEComa诊断主要依据组织学、免疫组织化学及FISH检测TFE3基因状态;手术切除为主要治疗手段。

老年男性慢性阻塞性肺疾病患者骨代谢的研究

目的探讨影响老年男性慢性阻塞性肺疾病患者骨代谢变化的相关因素。方法采用双能X 线骨密度仪测量40例老年男性COPD患者骨密度并检测其肺功能。以骨钙素(BGP)和Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)作为反映骨形成及骨转换的指标,以尿脱氧吡啶啉排泄率(D-Pyr／Cr)作为反映骨吸收的指标;观察参与骨代谢的相关激素如生长激素(GH)、甲状旁腺激素(PTH)、25- 羟维生素D3、降钙素(CT)、雌二醇(E2)、睾酮(T)等以及骨代谢相关细胞因子如白介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、瘦素(Leptin)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),测定上述指标并记录其年龄、身高、体重及吸烟情况等,与40例对照组比较。结果 COPD组中骨质疏松组 Leptin、IGF-Ⅰ均明显低于非骨质疏松组。以COPD组患者骨密度为因变量进行回归分析,瘦素、 IGF-Ⅰ、FEV1／FVC％与Ward’s区骨密度的标准化回归系数较其他因素为高。结论慢性阻塞性肺疾病继发骨质疏松症为高转换型;在COPD患者中IL-6、TNF-α等促进破骨细胞性因子增多, 而IGF-Ⅰ等成骨细胞性因子减少,使骨吸收超过骨形成,从而促进了骨质疏松症的发生。

牛蒡子苷元对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及其机制

目的观察牛蒡子苷元(ATG)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用,并探讨其机制。方法将30只Wistar大鼠随机分为3组各10只,实验组和模型组均采用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂混合而成的抗原乳剂诱导制备EAE模型,正常组皮下注射等量生理盐水与完全弗氏佐剂制备而成的空白乳剂。皮下注射后当日起,实验组大鼠每日腹腔注射3 mg/kg的ATG溶液,共14 d;正常组与模型组注射等量生理盐水。皮下注射后当日至第14 d,每日采用神经功能学评分法评价大鼠神经功能。皮下注射第14 d处死大鼠,HE染色观察脑和脊髓组织组织病理学,免疫荧光染色检测脊髓组织抗离子钙接头蛋白分子1(Iba1)相对荧光强度,RT-PCR法检测脊髓组织IL-1β、IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA,Western blotting法检测脊髓组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、血红素氧合酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白,分光光度法检测脊髓组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)。结果与模型组比较,实验组大鼠神经功能评分降低(P<0.05)。与模型组比较,实验组脑、脊髓组织中炎症细胞浸润明显减少,活化的小胶质细胞数量降低(P均<0.05)。与模型组比较,实验组脊髓组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1 mRNA相对表达量降低,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量降低,MDA含量降低,GSH含量升高,Nrf2、HO-1相对表达量升高(P均<0.05)。结论ATG对大鼠EAE有治疗作用,机制可能与降低NLRP3/ASC/Caspase-1炎症体通路介导的神经炎症,活化Nrf2/HO-1信号通路介导的抗氧化作用有关。

急性肝损伤模型及信号通路研究进展

肝脏具有物质合成、解毒和抗氧化等多种功能,同时也易于受到自由基和某些药物的攻击而产生损伤。肝脏疾病一直是临床研究的重点,而急性肝损伤是几乎所有肝脏疾病的开端。目前已有多种动物模型可以分别模仿不同发病机制的急性肝损伤,针对不同发病机制的通路研究也在不断进行。本文简述了四氯化碳(CCl4)、半乳糖胺/脂多糖(D-Gal N/LPS)、对乙酰氨基酚和酒精介导的急性肝损伤模型,并简要介绍了Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)-核因子E2相关蛋白2(Nrf2)、Toll样受体4(TLR4)和NLRP3通路在急性肝损伤发生发展进程中的作用。

ORMDL3和Ets-1基因在反复喘息患儿外周血中的表达

目的研究血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)和E26转录因子1(Ets-1)基因在反复喘息患儿外周血中的表达以及两者的相关性。方法采用RT-PCR法检测非过敏性正常对照婴幼儿(A组,24例)和反复喘息患儿(B组,25例)外周血中ORMDL3和Ets-1mRNA表达水平。结果B组外周血ORMDL3和Ets-1mRNA表达水平高于A组(P<0.05);ORMDL3与Ets-1基因表达水平呈正相关(r=0.7704,P<0.05)。结论 ORMDL3和Ets-1基因的表达水平与患儿的反复喘息密切相关。