E74样因子5过表达抑制结肠癌细胞生物学行为的体内外实验研究

目的探讨E74样因子5(ELF5)过表达对结直肠癌细胞的生长和侵袭能力以及裸鼠成瘤的影响。方法人结直肠癌SW480和HT-29细胞分为5组:LV-GFP组,转染空载体LV-GFP慢病毒;LV-ELF5组,转染重组LV-ELF5慢病毒;shRNA-NC组,转染空载体shRNA-NC慢病毒;shRNA-ELF5组,转染重组shRNA-ELF5慢病毒;对照组,未转染任何载体。转染72 h后,取含有慢病毒的细胞上清液,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中ELF5的mRNA表达水平;Western blot检测ELF5、凋亡相关的cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9、侵袭相关的E-cadherin和Ncadherin的蛋白表达水平;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;TUNEL实验检测组织中细胞凋亡;免疫组化检测组织中E-cadherin、N-cadherin的表达。将20只BALB/c裸鼠分为4组,每组5只:LV-GFP组、shRNA-NC组、LV-ELF5组、shRNA-ELF5组,于裸鼠皮下注射含重组慢病毒的SW480细胞上清液,构建裸鼠成瘤模型,监测移植瘤体积变化。第30天取裸鼠移植瘤组织,测量肿瘤质量,Western blot检测移植瘤ELF5蛋白的表达,TUNEL染色检测移植瘤凋亡,免疫组化检测移植瘤中N-cadherin阳性表达。结果与对照组细胞比较,两个细胞系LV-GFP组和shRNA-NC组细胞的各指标差异无统计学意义。Western blot结果与RT-qPCR结果表明,两个细胞系LV-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均上调(P<0.05,与LV-GFP组比较),shRNA-ELF5组的ELF5 mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05,与shRNA-NC组比较),ELF5过表达体系和干扰体系构建成功。与LV-GFP组比较,LV-ELF5组降低了细胞活力和克隆形成率(P<0.05),促进SW480细胞凋亡,并上调cleaved Caspase-3/Caspase-3和cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达(P<0.05),抑制细胞侵袭,并上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin蛋白表达(P<0.05);ELF5干扰后,细胞的上述表现呈相反趋势(P<0.05,shRNA-ELF5组与shRNA-NC组比较)。体内实验结果表明,ELF5过表达缩小裸鼠肿瘤体积和降低肿瘤质量(P<0.05),促进组织中细胞凋亡(P<0.05),ELF5蛋白表达增加,抑制N-cadherin蛋白表达(P<0.05)。当EFL5表达抑制,上述实验结果呈相反趋势。结论体内外实验表明ELF5过表达可促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞的生长和侵袭。

Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR技术检测49例卵巢上皮性癌、19例卵巢交界性上皮性肿瘤、31例卵巢良性上皮性肿瘤及40例正常卵巢组织中Elf5mRNA的表达,并分析Elf5mRNA与卵巢上皮性癌组各临床病理指标的相关性。结果Elf5mRNA在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率(分别为18.4%、36.8%)及表达水平(分别为0.28±0.04、0.52±0.08)均显著低于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(分别为67.7%、72.5%和0.85±0.07、0.86±0.06,P<0.05);且Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平与病理分期和淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05)。结论 Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中呈低表达,其不同程度的表达缺失与卵巢上皮性癌的发生、发展有关。