探讨EAE模型中小胶质细胞对小鼠脊髓神经的保护作用

目的总结EAE模型中小胶质细胞对小鼠脊髓神经的保护作用。方法将60只健康小鼠随机分组,对照组为30只EAE模型小鼠,皮下注射生理盐水,观察组30只小鼠实施干预,主要采取皮下注射500μM Tuftsin,对比不同时间段小鼠神经功能评分以及炎症因子含量水平。结果观察组、对照组小鼠均在研究后第9 d开始发病,对照组小鼠神经功能评分大于观察组,数据对比存在统计学意义(P<0.05);观察组小鼠与对照组小鼠在TNF-α、IL-10以及TGF-β指标方面存在差异(P<0.05),有统计学意义。结论 EAE模型中小胶质细胞对小鼠脊髓神经具有明显的保护作用,通过Tuftsin干预可延缓发病,且提高抗炎因子,降低炎症因子。

MOG诱导小鼠EAE模型的建立及相关免疫指标的变化

目的用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG)多肽免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫35-55性脑脊髓炎(EAE)模型,探讨EAE模型发病期与相关免疫指标的关系。方法用MOG抗原免疫C57BL/6雌35-553性小鼠,观察其临床症状和中枢神经系统的病理改变;应用H方法测定EAE小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度;++应用流式细胞术检测中枢及外周脾脏淋巴细胞中CD4 CD25调节性T细胞;荧光定量RT-PCR检测IL-17A、Foxp3、IFNγ的表达水平。结果成功建立EAE模型。与对照组相比,EAE组中可见小鼠中枢神经系统有淋巴细+++胞浸润,脾脏T淋巴细胞增殖随MOG多肽浓度增加而增强,CD4 CD25调节性T细胞占CD4 T细胞的比例明显降35-55低(P<0.01),IL-17和IFNγm RNA表达量显著升高(P<0.05),Foxp3 m RNA表达量显著降低(P<0.05)。结论 MOG多肽成功诱导了C57BL/6小鼠EAE模型,Th17与Treg细胞共同参与调控EAE的病理过程。

EAE大鼠模型的构建及外周血淋巴细胞中多种炎症因子表达的意义

目的构建实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型,探讨炎症因子在EAE发病过程中的作用及意义。方法采用髓鞘碱性蛋白加完全弗氏佐剂,按体质量多点注入大鼠背部皮下来构建EAE模型,苏木素-伊红(HE)染色观察不同发病阶段EAE大鼠模型脊髓组织形态学改变,同时利用逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测不同发病阶段大鼠外周血淋巴细胞中IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA和蛋白表达。结果成功建立了EAE大鼠模型,随着EAE大鼠病情的加重,实验组IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA量和蛋白表达量较对照组逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4和IL-10的mRNA量和蛋白表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05),当大鼠症状缓解后两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过髓鞘碱性蛋白加完全弗氏佐剂,按体质量多点注入大鼠背部皮下的方法能很好地构建EAE模型,同时外周血淋巴细胞中多种炎症因子的表达与EAE大鼠模型的发病密切相关。

实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠中IL-27对CCL5表达的影响

目的探讨白介素-27(interleukin-27,IL-27)对中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性趋化因子(chemokine RANTES,CCL5)的调节作用,以及在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中的治疗效果。方法 40只雌性C57BL/6小鼠建模后,分别于第0、7、14、21天用Western blot检测CNS中IL-27和CCL5的变化。另将50只小鼠随机分为正常组、EAE组、EAE+IL-27组、EAE+SC144(IL-27受体抑制剂)组和EAE+PBS组,定期观察动物行为变化,并在建模后21 d检测CCL5的表达。结果建模后,IL-27在CNS中的表达随时间逐渐升高,而CCL5的表达随时间先升高后下降。经IL-27干预后,小鼠神经功能缺损较对照减轻(P<0.05),而SC144组小鼠神经功能缺损较其他组加重(P<0.05)。在21 d,CCL5在IL-27干预组的表达较EAE模型组明显降低(P<0.05),而在SC144组较EAE模型组显著增高(P<0.05)。结论在EAE模型中,IL-27抑制CCL5的表达,从而发挥抗炎作用减轻小鼠神经功能缺损。

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠丛上细胞扫描电镜观察

目的:观察实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠丛上细胞的变化。方法:以豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂制备急性EAE大鼠模型,以扫描电镜观察各实验组丛上细胞的变化。结果:正常对照组丛上细胞较少,胞体扁平或长杆状,伪足体积大、数目少,放射状分布于胞体周围。EAE发病前组丛上细胞较正常对照组增多,胞体较丰满,伪足多且分布规律,丝状伪足和扁铲样结构分别位于胞体的两侧。EAE发病组丛上细胞显著增多,胞体呈球形,表面可见泡球样结构,伪足以丝状为主,数量少且分布不规律。结论:EAE发病前就有循环中的免疫细胞从脉络丛进入CSF,丛上细胞以巨噬细胞为主,可能与EAE的脑室周病变有关。

CXCR2拮抗剂抑制NETs缓解实验性自身免疫性脑脊髓炎病情

目的探讨CXCR2拮抗剂通过减少中性粒细胞迁移并抑制中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的保护作用。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_(35-55)(myelin oligodendrocyte glycoprotein_(35–55),MOG_(35-55))诱导建立多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的小鼠疾病模型EAE。将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(n=7)、EAE模型组(n=7)、CXCR2拮抗剂处理组(n=7),CXCR2拮抗剂于造模后每天腹腔注射1次(4 mg/kg),持续给药23 d,每日进行神经功能评分;在发病高峰期取小鼠脑和脊髓,采用HE染色进行组织病理评分;取免疫后第7天和第14天小鼠血液和脑、脊髓、脑膜、骨髓等组织,采用流式细胞术分析不同部位的中性粒细胞的百分比,脑组织酯酶染色观察中性粒细胞数量的变化,脑和脊髓组织免疫荧光染色观察NETs的变化;使用伊文思蓝染色的方法检测血脑屏障的通透性。结果CXCR2拮抗剂治疗组发病延迟4 d,其临床评分显著低于EAE模型组;同时其脊髓和脑组织的淋巴细胞浸润和"血管袖套"样结构明显降低、炎性评分与EAE组相比有显著性差异。CXCR2拮抗剂抑制中粒细胞(CD45^(high)CD11b^(+)Ly6G^(+))在脑膜的早期浸润;流式细胞术及酯酶染色均显示脑组织和脊髓的中性粒细胞的浸润也被抑制;脑和脊髓CD31^(+)Ly6G^(+)细胞减少;EAE模型小鼠脑和脊髓NETs(NE^(+)MPO^(+))显著高于正常小鼠,而被CXCR2拮抗剂显著抑制,且伊文思蓝在脑实质的含量也显著降低。结论CXCR2拮抗剂能够有效地延缓和减轻小鼠的临床表现和中枢神经系统炎性细胞的浸润;通过阻止中性粒细胞跨脑膜向中枢神经系统迁移以及抑制炎症部位NETs的形成来缓解病情,并减轻了对血脑屏障通透性的破坏,提示CXCR2抑制剂可成为中枢神经系统炎性疾病治疗的另一种潜在方案。