绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP31配体筛选及EAG测定

绿盲蝽Apolyguslucorum是重要的农业害虫,了解其化学感受机制对该虫的绿色防控具有重要指导意义。气味结合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs)在昆虫化学感受过程中发挥关键作用。为深入探究绿盲蝽OBP家族成员AlucOBP31的生物学功能,本研究采用荧光竞争结合试验和触角电位技术(Electroantennogram,EAG),系统分析了AlucOBP31对候选配体化合物的结合特性及其电生理活性。荧光竞争结合试验结果表明,重组Aluc OBP31蛋白能够与16种配体化合物发生不同程度的结合,其中与植物挥发物β-紫罗兰酮的结合能力最强,而与十二醛和顺-丁酸-3-己烯酯的结合能力相对较弱。值得注意的,AlucOBP31能与绿盲蝽性信息素组分4-氧代-反-2-己烯醛结合,提示其可能参与绿盲蝽的性信息素识别过程。此外,AlucOBP31还对槲皮素、芦丁水合物、棉酚和单宁酸等4种非挥发性苦味物质具有强结合能力,暗示其可能在绿盲蝽的味觉识别中发挥一定作用。EAG试验进一步验证了AlucOBP31配体的电生理活性。绿盲蝽雌、雄成虫的触角对12种AlucOBP31挥发性配体均产生了明显的EAG反应,其中对顺-丁酸-3-己烯酯和4-氧代-反-2-己烯醛的EAG响应值显著高于其它配体,并且雄性触角对这些配体的EAG反应普遍强于雌性,提示AlucOBP31介导的化学感受过程可能存在性别差异。综上所述,本研究系统分析了绿盲蝽AlucOBP31的结合特性及相应配体的电生理活性,发现该蛋白能够结合寄主植物挥发物、绿盲蝽性信息素组分以及多种非挥发性苦味物质,表明AlucOBP31可能在绿盲蝽的嗅觉和味觉识别过程中发挥多重生物学功能。这一发现为进一步探究AlucOBP31与其配体在绿盲蝽寄主选择、交配等重要生命活动中的生物学意义提供了研究基础,加深了我们对绿盲蝽化学感受机制的认知,也为绿盲蝽的绿色防控提供了新的分子靶标。

沉香暴食害虫黄野螟性信息素分泌源EAG和GC-MS分析

为了探究黄野螟雌蛾性信息素腺体的具体部位,将雌蛾解剖为头、胸、腹、翅4部分,分别使用其挥发性气味对雄蛾进行触角电生理(EAG)检测,确定雌蛾腹部挥发物可以刺激黄野螟雄蛾产生最强的电生理响应。通过使用雌蛾腹部前、中、后3段的挥发物信号刺激雄蛾触角的电生理检测,进一步发现雌蛾腹部中段挥发物信号对雄蛾触角具有最强电生理活性,指示雌蛾腹部中段最可能是雌蛾性信息素释放的主要部位。另外,对雌蛾腹部3段结构提取挥发物的气相色谱-质谱联(GC-MS)检测和总离子图(TIC)对比,结果发现腹部中段挥发物成分中具有2个雌虫特异性成分,为该组织最强电生理活性提供了可能的物质基础。该研究结果为进一步鉴定开发黄野螟的高效性诱剂确定了成分来源的重要基础。

绿盲蝽对七种锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应

研究绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)对锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应,为研发绿盲蝽引诱剂或驱避剂策略提供科学依据。田间采用动态顶空采样方法收集了7种锦葵科植物的挥发物,通过室内气相-质谱联用系统(GC-MS)进行物质鉴定及定量分析,最终测定了雌、雄绿盲蝽成虫对11种候选特征挥发物的触角电位(EAG)反应和嗅觉趋向选择行为。结果表明,7种锦葵科植物的挥发物种类和含量有较大差异,而且4种棉花品种之间的挥发物差异也很显著。棉花石远321的挥发物总量最大,其中4,8-二甲基-1,3,7-壬三烯(DMNT)含量最高,壬醛和罗勒烯其次。蜀葵的挥发物种类和含量均最少。11种候选特征挥发物均能够引起绿盲蝽雌、雄成虫EAG反应,且雄性成虫的反应值大都高于雌性成虫。其中,绿盲蝽雌、雄成虫触角对反-2-己烯酸丁酯EAG反应值最大,芳樟醇、乙酸叶醇酯、甲基庚烯酮及DMNT也能够激发绿盲蝽较大的EAG反应。在趋向行为检测中发现,DMNT及柠檬烯等对雄性成虫具有吸引作用。对雌性成虫有吸引作用的物质有γ-萜品烯、DMNT、月桂烯、α-石竹烯、罗勒烯及乙酸叶醇酯等,其中γ-萜品烯和乙酸叶醇酯对雌性成虫具有极显著吸引效果。锦葵科候选植物挥发物对绿盲蝽雌、雄虫具有不同EAG和趋向行为反应影响,候选气味化合物可以作为设计绿盲蝽引诱剂组分进行害虫防控田间实践。

棉铃虫齿唇姬蜂对植物挥发物和寄主性信息素腺体化合物的EAG反应

测试了棉铃虫齿唇姬蜂CampoletischlorideaeUchida对58种植物挥发物和5种寄主性信息素腺体化合物的EAG反应。在100μg的刺激剂量下,棉铃虫齿唇姬蜂对C5～C7脂肪醇的EAG反应最强,碳链延长或缩短都将导致反应的降低;对脂肪醛、酮、酸和酯都有一定的反应。棉铃虫齿唇姬蜂对萜烯的EAG反应很低,对氧化萜的反应普遍升高。3种芳香化合物均可激起棉铃虫齿唇姬蜂较强的EAG反应。剂量反应曲线表明,具有EAG活性的化合物激起的反应强度与化合物的剂量呈正相关,而2种萜烯———α_蒎烯和反式石竹烯,在测定的剂量范围内EAG活性都很低。棉铃虫齿唇姬蜂对寄主性信息素腺体化合物也有EAG反应,用100μg和1000μg的寄主性信息素刺激,雄蜂的反应可比雌蜂的反应高出1倍。对植物挥发物在棉铃虫齿唇姬蜂寻找寄主中的作用进行了讨论。

红缘天牛对沙枣花中8种化合物的EAG及行为反应

为了研究沙枣花对红缘天牛的引诱效果,采用GC-MS技术分析出沙枣花挥发物合有47种化合物.选取相对分子质量在100～300之间的8种化合物,分别采用单一组分和多组分混合配方对红缘天牛进行EAG和嗅觉行为实验.结果表明：（1）在单一组分不同浓度的EAG实验中,红缘天牛对肉桂酸乙酯的反应最为强烈,且当质量分数为1.00％时红缘天牛的EAG相对反应值最大,除肉桂酸甲酯和愈创木酚反应不明显外,其他化合物均在质量分数为1.00％时EAG反应活性最高;（2）嗅觉行为反应中,红缘天牛对单一组分的8种化合物相对选择率均在质量分数1.00％时最高;（3）邻苯二甲酸二甲酯、肉桂酸乙酯、癸酸酯、芳樟醇、肉豆蔻酸异丙酯和4,4-亚甲基（2,6-叔丁基苯酚）这6种化合物配制成21种混合物,其中配方P、Q在EAG和嗅觉行为反应中效果均较好,这说明邻苯二甲酸二甲酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉桂酸乙酯、癸酸酯、芳樟醇这5种化合物在一定的配比情况下对红缘天牛有较好的引诱活性.

红缘天牛对不同诱剂的EAG与行为反应及野外诱集效果

采用目前广泛应用的植物挥发性物质和性信息素配制成25种引诱剂,对红缘天牛进行了行为、电生理测定及野外诱集实验.结果显示:诱剂W的诱集效果最好,相对诱捕率达21.8%,EAG值为4.116,亦最高.其次为诱剂T,相对诱捕率为17.2%,EAG值为3.714.诱剂X和V的相对诱捕率也较高,分别为9.2%和8.0%.另外,以青霉素注射剂药瓶作为诱芯的载体、以植物挥发性物质和性信息素作为诱剂研制而成的诱芯,缓释作用很好,具有应用推广价值.

侧柏树干的超临界CO_2萃取物组分分析及双条杉天牛的EAG反应

利用超临界CO2萃取法和索氏提取法分别提取侧柏Platycladus orientalis(L.)的韧皮部和木质部挥发物,经GC/MS分析其成分,结果表明:超临界CO2萃取物中检测到的21种组分中以倍半萜烯及其氧化物为主,没有检测到单萜类物质;索氏提取法检测到23种组分,韧皮部中检测到的组分以高沸点的树脂酸和二萜等为主,单萜烯和倍半萜及其氧化物含量较低;木质部中以倍半萜烯及其氧化物为主。将不同提取样品进行双条杉天牛Semanotus bifasciatus(Motschulsky)的触角电位反应,结果表明:2种方法的萃取物均能引起天牛的EAG反应,但以超临界萃取物引起的EAG反应较强,且与索氏提取物的反应值差异显著。罗汉柏烯和雪松醇可能是侧柏植物中引诱双条杉天牛的重要活性组分。

Cre-LoxP系统在炭疽芽胞杆菌基因敲除中的应用及eag基因的敲除

将Cre-LoxP系统应用于Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因.以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂,联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体,转化B.anthracisAP422,通过一系列筛选得到带有抗性标记的重组菌.然后,通过转入Cre重组酶表达质粒,去除抗性标记,得到eag基因缺失的重组菌,并在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行了系统的鉴定.最终建立了Cre-LoxP系统在B.anthracis中的应用方法,并成功敲除eag基因.

Eag1钾离子通道、HIF-1α以及VEGF在子宫颈癌中的表达及其临床意义

目的：探讨Eag1钾离子通道、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在不同病变宫颈组织中的表达及其临床意义.方法：应用免疫组化方法（S-P法）检测40例慢性宫颈炎、40例CIN和100例宫颈癌组织中Eag1、HIF-1α及VEGF表达情况,并分析其与宫颈癌临床病理因素的关系.结果：宫颈鳞癌组织内Eag1、HIF-1α与VEGF蛋白的表达明显高于宫颈上皮内瘤变组和慢性炎症组（P＜0.01）;非角化型宫颈鳞癌组织中Eag1、HIF-1α与VEGF的表达高于角化型宫颈鳞癌（均为P＜0.05）; Ⅱb期及以上期宫颈癌组织中Eag1、HIF-1α与VEGF 表达高于Ⅰ～Ⅱa期（均为P＜0.05）;伴有淋巴结转移者三者的表达均高于无淋巴结转移（均为P＜0.05）;放疗前三者的表达高于放疗后（均为P＜0.05）;Eag1、HIF-1α与VEGF三种蛋白在宫颈鳞癌组织表达呈正相关（均为P＜0.05）.结论：Eag1、HIF-1α和VEGF的表达在宫颈鳞癌发生发展过程中起重要作用,与宫颈鳞癌进展密切相关,是宫颈鳞癌早期诊断和治疗的潜在靶点.

不同生境异色瓢虫对茶梢互利素和蚜虫利它素EAG和行为反应

触角电位 ( EAG)研究和选择性行为反应表明茶梢受茶蚜 ( Toxoptera aurantii Boyer)为害后能释放引诱异色瓢虫[Leisaxyridis( Pallas) ]的互利素 ,茶蚜、萝卜蚜 Lipaphiserysimi ( Kaltenbach)体表和茶蚜蜜露中含有吸引异色瓢虫的利它素 ,其中的少数特异性组分引诱活性较强。源于茶园、桑园和菜园的互利素或利它素对各自生境中的异色瓢虫更具刺激性 ,显示了生境特定性。 EAG剂量反应表明茶园中的显明变种比显现变种稍敏感 。

棉铃虫对几种信息化合物的触角电位 (EAG)反应

通过棉铃虫成虫对 1 0种寄主植物挥发性物质、两种性信息素组分及两者的混合作用的触角电位反应 ( EAG) ,发现棉铃虫雌雄蛾对 1 0种挥发性物质的 EAG反应差异显著 ( P<0 .0 5 ) ,说明了 1 0种挥发物质对棉铃虫成虫的感应功能有所不同。 1 0种寄主植物挥发物质与性信息素主要组分混合后能引起雄蛾 EAG反应明显高于单独性信息素的反应 ,其中有 4种挥发性物质明显地增强棉铃虫对性信息素的反应 ( P<0 .0 5 ) ,即庚醛、1 -己醇、反 - 2 -己烯醇、顺 - 3-己醇 - 1 ,说明了以寄主植物挥发物质与昆虫性信息素混合作用来增强昆虫性信息素的应用效果。不同光温条件下饲养的雄蛾对寄主植物挥发性物质与性信息素相互作用的 EAG反应差异显著 ( P<0 .0 5 )。

宫颈癌中Eag1钾离子通道的表达以及缺氧对其的调控作用

目的研究不同病变宫颈组织中Eag1表达情况以及缺氧对宫颈癌Hela细胞膜上Eag1钾离子通道表达的影响。方法采用免疫组化、免疫荧光和RT-PCR法,检测不同病变宫颈组织和宫颈癌Hela细胞中Eag1蛋白的表达情况,以及不同缺氧时间和缺氧浓度对Hela细胞中Eag1 mRNA表达的影响。结果免疫组化结果表明,宫颈上皮内瘤变组织中Eag1蛋白的表达明显高于正常组,宫颈癌组织中Eag1的表达明显高于宫颈上皮内瘤变组;Eag1的表达随临床分期的增高而增加;与病理分级无明显相关性。免疫荧光、RT-PCR结果表明,正常培养的宫颈癌Hela细胞中即有Eag1表达;其表达随缺氧程度加深及缺氧时间的延长明显增强。结论Eag1钾离子通道蛋白有可能成为新的早期筛查和判断宫颈癌生物学行为的诊断指标。Eag1在宫颈癌Hela细胞缺氧感受中起重要的作用。

槐绿虎天牛对不同诱剂的EAG反应及诱剂的诱捕效果

本实验研究了14种引诱剂对槐绿虎天牛的诱捕效果,结果表明,14种引诱剂对槐绿虎天牛都有一定的引诱效果.野外诱捕结果显示:引诱剂D的效果最好,日平均诱捕率为0.82%;H次之,为0.64%;G最弱,日平均诱捕率为0.11%.所用诱剂对其它鞘翅目、鳞翅目、膜翅目、半翅目、双翅目、同翅目和脉翅目昆虫也有引诱作用.特别是D诱剂对金龟子科害虫的诱集效果极好.经触角电位测定,D诱剂的EAG反应相对值最高,为1.95;I诱剂次之,为1.80.表明D和I都是很好的诱剂配方.各诱剂所捕到槐绿虎天牛雌雄比约为2∶1.

日本双棘长蠹成虫对8种植物挥发物的EAG和行为反应

为了寻找新型的防治日本双棘长蠹(Sinoxylon japonicum Lesne)的植物源引诱剂,分别测定了成虫对8种植物挥发物的EAG和行为反应.EAG测定结果表明:1.00 mol/L的愈创木酚和邻苯二甲酸二甲酯均能引起日本双棘长蠹较强的EAG反应(p≤0.05)."Y"型嗅觉仪测定结果表明:1.00 mol/L的愈创木酚对日本双棘长蠹成虫的引诱效果最好,选择率达到57%;1.00 mol/L的邻苯二甲酸二甲酯对日本双棘长蠹成虫具有较好的驱避作用.其他挥发物对日本双棘长蠹均无明显的定向作用.

红缘天牛对枣树6种挥发物EAG和嗅觉行为反应

为探明枣树挥发物吸引红缘天牛成虫的原因,应用触角电位仪和嗅觉仪分别测定红缘天牛成虫对6种枣树挥发物的电生理反应和嗅觉行为反应。结果表明:试验所选的6种化合物均能引起红缘天牛的触角电位反应,随着浓度增加,电生理反应逐渐增加,当刺激物的浓度达到100μg/μL时,红缘天牛对6种化合物的EAG达到最高值。红缘天牛雌雄成虫对正十一烷的触角电位反应相对值均为最大,分别可以达到2.34、2.29。在嗅觉行为反应测定中,正十一烷和乙酸叶醇酯对红缘天牛雌雄成虫产生明显的引诱作用。本研究为进一步研发红缘天牛植物源引诱剂提供了理论依据。

Eag1钾通道在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:研究Eag1钾通道在前列腺癌(PCa)组织中表达的状况,为探讨其与PCa发生、发展机制的相关性及能否作为PCa的诊治靶点提供理论依据。方法:采用RT-PCR和免疫组化的方法,检测Eag1钾通道mR-NA和蛋白在雄激素依赖性前列腺癌(ADPCa)组织、雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)组织和癌旁非瘤组织中的表达水平。结果:Eag1钾通道mRNA在ADPCa癌旁非瘤组织(A)、AIPCa癌旁非瘤组织(B)、ADPCa组织(C)和AIPCa组织(D)中表达相对系数分别为0.265±0.413、0.167±0.511、2.673±2.988和2.815±2.901,与相应非瘤组织相比,Eag1钾通道mRNA在前列腺癌组织中表达显著增高(P<0.05);Eag1钾通道蛋白在A、B、C和D组中阳性表达率分别为7.4%、6.7%、88.9%和86.7%,与相应非瘤组织相比,Eag1钾通道蛋白在癌组织中表达显著增高(P<0.05)。结论:Eag1钾通道可能参与了PCa的发生和进展的病理生理学过程,有望成为PCa诊治中有价值的靶点。

甜菜夜蛾(Spodopt eraexigua Hübner)雄蛾触角对雌蛾性信息素的EAG反应

采用 EAG生测技术研究表明 ,甜菜夜蛾雄蛾触角上具有 4种性信息素组分 (Z9,E1 2 - 1 4∶Ac(A)、Z9- 1 4∶ OH (B)、Z9- 1 4∶ Ac(C)和 Z9,E1 2 - 1 4∶ OH(D) )的感受细胞。单一组分 A,二元组分 AB和 AD,三元组分 ABC、ABD和 ACD及四元组分 ABCD的 EAG反应显著较高 ,与 3头雌蛾性信息素腺体浸提液的反应强度相当。进一步对 AB二元混合物中两组分的最佳比例以及最佳比例的剂量反应进行了测定。当 AB间的比例为 5∶ 5时可产生最大的 EAG反应 ,其它比例 (9∶ 1、7∶ 3、3∶ 7、1∶ 9)间无明显差异。 AB(5∶ 5)混合物的使用剂量在 0 .0 4～ 4μg范围内 ,EAG值随剂量增加呈直线上升 ;使用剂量低于 0 .0 4μg或高于 40μg。

Eag1基因在人宫颈良恶性病变组织中的表达及其意义

目的研究Etheràgo-go1(Eag1)基因在人良、恶性宫颈组织中的表达情况,初步探讨其表达水平与患者各种临床参数的关系。方法采用免疫组化技术分别检测了45例宫颈癌、30例宫颈上皮内瘤变和30例宫颈正常上皮组织中Eag1的表达水平,分析Eag1表达水平与不同程度的宫颈病变有无相关性;检测不同临床分期、不同分化程度宫颈癌组织中Eag1表达,并进行统计分析,找到其与临床病理分期、预后等的关联程度。结果 Eag1在宫颈癌组织中的阳性表达率为84. 7%,明显高于其在宫颈上皮内瘤变组织中的阳性表达率(26. 7%),而Eag1在宫颈上皮内瘤变组织中阳性表达率也明显高于其在宫颈正常上皮组织中的阳性表达率(6. 7%)。进一步的研究表明Eag1表达强度与宫颈癌的临床分期相关,即临床分期越高,Eag1的表达强度越高。结论 Eag1基因可能参与了宫颈癌发生、发展的过程并与疾病预后密切相关。

Bt毒素对棉铃虫雄蛾感受雌蛾性信息素EAG反应的影响

用含Bt毒素的人工饲料饲养棉铃虫Helicoverpaarmigera3龄幼虫至成虫(死亡率为40%～50%),采用触角电位(electroantennogram,EAG)技术,测定了雄蛾对雌蛾性信息素2种组分顺9十六碳烯醛(Z916:Ald)、顺11十六碳烯醛(Z1116:Ald)及其混合物(Z1116:Ald∶Z916:Ald=97∶3)的EAG反应。结果表明,Bt毒素对雄蛾感受性信息素单一组分和混合物的EAG反应均具促进作用;且随信息素剂量的增加,这种促进作用也随之增强。这一结果对于评价和实施延缓棉铃虫对Bt棉抗性的“庇护所”策略,具有一定的参考意义。

木蠹象对受疱锈菌侵染华山松树皮挥发物的EAG和行为反应

采用触角电位仪和"Y"型嗅觉仪分别研究了茶藨生柱锈菌锈孢子、感疱锈病树皮、华山松健康树皮挥发性成分对华山松木蠹象的触角电生理和引诱活性。羽化3 d的木蠹象对3种挥发性成分在各浓度下都有明显的EAG反应,锈孢子的EAG反应值最大,健康树皮次之,感病树皮最小,且明显小于前二者。同时,嗅觉生测结果证明,锈孢子挥发性成分对木蠹象的引诱活性最低,平均引诱率不超过20%;同样,感病树皮挥发性成分除浓度为1∶15外,其余引诱率都低于35%,二者对该虫总体表现出驱避活性;而健康树皮挥发性成分则有明显的引诱活性。EAG反应值与行为反应的趋向率具有一致性。