肌力康饮对EAMG大鼠血清AchR-Ab及TGF-β_1水平的影响

目的:观察中药复方肌力康饮对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠血清AchR-Ab、TGF-β1水平的影响,以探讨其治疗重症肌无力的可能机制。方法:60只Lewis大鼠随机分为6组,每组10只:空白组,模型组,阳性药物组,肌力康饮高、中、低剂量组。采用AchR主动免疫的方法免疫除空白组外的各组大鼠,制备EAMG大鼠模型。确立模型成功,各组给药治疗4周后,采用ELISA法检测血清AchR-Ab、TGF-β1水平。结果:肌力康饮各组、阳性药物组能明显改善EAMG大鼠肌无力症状,临床症状评分显著降低、血清AchR-Ab水平明显下降、TGF-β1水平明显升高,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01);肌力康饮高剂量组与阳性药物组比较亦有明显差异(P<0.05);但肌力康饮各剂量组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:肌力康饮下调了EAMG大鼠过高的AchR-Ab水平,并使TGF-β1升高,从而改善了EAMG大鼠的临床症状。

设计耐受原并用鼻黏膜耐受治疗EAMG的方法学研究

目的 设计特异性耐受原 ,通过其鼻黏膜耐受治疗对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)发病过程的影响 ,以探讨该疗法在模型应用中的可行性。方法 用 Lewis大鼠建立 EAMG模型 ,选取双类似物作为耐受原在致敏同时给予鼻黏膜耐受治疗 ,动态观察大鼠体重及临床评分改变。结果 虽然治疗组大鼠发病率不降低 ,但是在 EAMG急性期和慢性期 ,其临床症状均较对照组减轻 (P <0 .0 5 )。结论 用双类似物鼻黏膜耐受可以达到治疗 EAMG的目的 ,其结果为抗原特异性治疗重症肌无力 (MG)和其他自身免疫性疾病 (AID)提供了依据。

黄芪复方对EAMG大鼠血清IL-4、IFN-γ、TGF-β水平的影响研究

目的 :观察黄芪复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL -4、IFN -γ、TGF -β水平的影响 ,以探讨其治疗重症肌无力的可能机制。方法 :采用AChR加等量完全福氏佐剂 ,免疫Lewis大鼠 ,制备EAMG大鼠模型。 40只Lewis大鼠随机分为 4组 ,每组 10只 :福氏佐剂组、模型对照组、中药黄芪复方组和西药强的松组。各组给药治疗 3 0天后 ,采用ELISA法分别测血清AChRab、IL -4、IFN -γ、TGF -β水平。结果 :黄芪复方组、强的松组能明显改善EAMG大鼠肌无力症状 ,其血清AChRab、IFN -γ水平明显下降 ,TGF -β水平明显升高 ,与模型组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;但用药组间比较无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论 :中药黄芪复方可能是通过调控血清中IFN -γ、TGF -β水平 ,抑制AChRab的生成或增加其降解而达到治疗EAMG大鼠的作用。

IFN-γ鼻黏膜免疫耐受治疗EAMG的实验研究

探讨鼻黏膜给予少量IFN-γ对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)鼻黏膜免疫耐受的逆转作用。在用自身抗原乙酰胆碱受体(AChR)和完全弗氏佐剂(CFA)免疫Lewis大鼠之前,通过鼻黏膜分别给予重组大鼠IFN-γ(5 000 U/只);AChR+IFN-γ或单独给予AChR,另外给予等量AChR的同时,腹膜注射IFN-γ(5 000 U/只)。评估不同组对EAMG发病的影响。可见,鼻黏膜单独给予AChR有效诱导EAMG免疫耐受,而同时给予AChR和IFN-γ与对照组(只给予PBS)相比扩大了T、B细胞对AChR的免疫应答,出现了与对照组相似的临床症状。相反,AChR+IFN-γi.p.不影响对EAMG的耐受,鼻黏膜单独给予IFN-γ对EAMG的临床症状没有影响。经不同途径给予IFN-γ对免疫耐受有不同的影响:鼻黏膜给予少量IFN-γ可以打破免疫耐受;而经腹腔给予IFN-γ不会影响免疫耐受。

“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处乙酰胆碱受体表达的影响

目的探讨'温阳补气'针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠神经肌肉接头(NMJ)处乙酰胆碱受体(AchR)表达水平的影响机制。方法乙酰胆碱受体α1(AchRα1)129~145多肽片段与弗氏完全佐剂(CFA)混合免疫接种SPF三级Lewis雌性大鼠,建立EAMG大鼠动物模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只,分成针灸治疗组10只、药物对照组10只、模型对照组10只,并将同期购进的未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以'温阳补气'针法治疗,30 min/次,1次/d,7 d为1个疗程,疗程间休息1 d,连续治疗2个疗程;药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗,18.5 mg·kg-1·d-1,连续治疗15 d;其余两组不予任何特殊处置,仅作对照观察。治疗结束后,采用ELISA法测定大鼠NMJ处AchR的含量。结果经治疗后,针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较,两组EAMG大鼠NMJ处AchR的表达水平显著升高,与模型对照组相比均具有显著性差异(P<0.01);针灸治疗组与药物治疗组比较,两种疗法对EAMG大鼠NMJ处AchR表达水平的影响无显著性差异(P>0.05)。结论 '温阳补气'针法可以促进EAMG大鼠NMJ处AchR的表达,从而发挥其治疗MG的作用,其治疗效果与溴吡斯的明相近。

重肌灵对EAMG大鼠血清IL-4、IFN-γ水平的影响

观察中药复方重肌灵对EAMG大鼠血清IL 4、IFN γ调节作用。方法 :采用N2 AchR加等量福氏完全佐剂 ,多次免疫Lewis大鼠 ,复制EAMG模型 ,并对模型进行评价。动物随机分为正常组、佐剂组、模型组、地塞米松组和重肌灵组。采用ELISA法观察各组动物血清AchRab、IL 4、IFN γ水平。结果 :重肌灵、地塞米松组大鼠血清AchRab滴度、IL 4、IFN γ水平明显降低 ,与模型组比较 ,有非常显著性差异 (P <0 0 1)。但两治疗组之间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :重肌灵具有良好的防治EAMG效果 ,可能是通过下调血清IL 4、IFN γ ,抑制AchRab产生 ,而起到治疗作用。

TGF-β上调在Wistar大鼠抑制EAMG发生中的重要作用

用ＡＣｈＲ加ＣＦＡ免疫大鼠后，Ｌｅｗｉｓ大鼠出现典型的临床肌无力，而ＷｉｓｔａｒＦｕｒｔｈ（Ｗ．Ｆ）大鼠不出现任何症状。为阐明Ｗ．Ｆ大鼠对ＡＣｈＲ耐受的机制，检测了表达ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的ＭＮＣ和肌肉ＡＣｈＲ。结果表明，Ｗ．Ｆ大鼠免疫后第５、７周ＰＩＬＮ中ＡＣｈＲ诱导的ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达细胞数比Ｌｅｗｉｓ大鼠低，ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达细胞数比Ｌｅｗｉｓ大鼠高，肌肉ＡＣｈＲ含量比Ｌｅｗｉｓ大鼠高。提示ＩＦＮ－γ和ＴＧＦ－β与ＥＡＭＧ的发生有关，ＴＧＦ－β上调可抑制ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达，减少肌肉ＡＣｈＲ丢失。

树突状细胞负载Tα146-162对EAMG中Crry、CD59a、CD59b mRNA表达的影响

目的观察实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠肌肉中Crry、CD59a、CD59b mRNA的表达和Tα146-162-iMDC诱导免疫耐受对三者的影响。方法用GM-CSF、IL-10诱导骨髓细胞分化、增殖为不成熟的髓源性树突状细胞(iMDC),之后将Tα146-162负载其上(Tα146-162-iMDC)。健康雌性C57BL/6小鼠30只,随机分为模型组(A组,12只)、干预组(B组,12只)和正常对照组(C组,6只),A、B组小鼠用电鳗乙酰胆碱受体(T-AChR)免疫诱导EAMG,B组小鼠用Tα146-162-iMDC干预。按照Christadoss标准对小鼠进行EAMG评分,3H-TdR标记检测淋巴细胞增殖反应,RT-PCR方法检测Crry、CD59a、CD59b mRNA表达。结果A、B组小鼠平均临床评分分别是1.67±1.15vs0.33±0.65(P<0.01),发病率分别是75%vs25%(P<0.05)。B组较A组小鼠抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显降低(P<0.01)。A组较C组小鼠Crry mRNA、CD59a mRNA表达明显降低(P<0.05);B组较A组Crry mRNA、CD59a mRNA表达明显升高(P<0.05),B组CD59a mRNA与C组相比无显著性差异(P>0.05)。3组小鼠肌肉中均检测不到CD59b mRNA。结论Crry mRNA、CD59a mRNA表达减少可能参与EAMG发生,CD59b可能与EAMG发病无关;Tα146-162-iMDC上调小鼠肌肉中Crry、CD59a mRNA表达及抑制抗原特异性淋巴细胞增殖反应可能是其阻抑EAMG发生的机制之一。

双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用

目的 采用双类似物 (Lys2 6 2 Ala2 0 7)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药 ,观察临床发病变化 ,并评价疗效 ,探讨其控制EAMG临床发病作用机制。方法 应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型 ,并在致敏前 10天 (A组 )及致敏当日 (B组 )鼻腔给药。观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化。结果 ①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组 ,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组 ,P均 <0 .0 5 ;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组 ,P均 <0 .0 5。结论 Lys2 6 2 Ala2 0 7鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病 ,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据。

HPA轴损伤对EAMG大鼠胸腺组织GR mRNA表达影响及补脾强力复方干预作用

目的:观察HPA轴损伤对实验性自身免疫性重症肌无力模型(EAMG)大鼠胸腺组织GR mRNA表达影响及补脾强力复方干预作用。方法:将Lewis大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组及补脾强力复方大、中、小剂量组(以下称大、中、小剂量组),除假手术组外,余经双肾上腺摘除致HPA轴损伤,采用免疫诱导注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段复制EAMG模型,造模成功进行灌胃治疗4周后,ELISA法检测各组大鼠血清AchR-Ab、皮质醇水平,RT-q-PCR技术检测各组大鼠胸腺GR mRNA基因表达水平。结果:与假手术组比较,模型组AchR-Ab显著升高,皮质醇水平显著下降,均具有极显著统计学差异(P<0.01);与假手术组比较,模型组胸腺内GRmRNA相对表达量显著降低(P<0.05),与模型组比较,补脾强力复方大剂量组、中剂量组、强的松组胸腺GRmRNA相对表达量升高,具有显著性差异(P<0.05)。结论:HPA轴损伤EAMG大鼠胸腺GR mRNA相对表达量显著降低,而补脾强力复方可提高胸腺组织GR mRNA的表达,有效调节HPA轴功能,这可能是其治疗MG的作用机制之一。

益气解毒复方对EAMG大鼠胸腺IFNγ、IL17蛋白表达的干预作用研究

目的:从胸腺中γ干扰素(IFNγ)、白介素17(IL17)蛋白表达变化探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠发病的免疫机制并观察益气解毒复方干预作用,为益气解毒复方治疗MG提供理论及实验依据。方法:从100只Lewis大鼠中随机选取10只为正常组,其余采用对Lewis大鼠皮下注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段建立EAMG大鼠模型,经评估造模成功的大鼠随机分为益气解毒高、中、低剂量组、泼尼松组、模型组,连续灌胃给药30 d。采用免疫组化法检测各组大鼠胸腺中IFNγ、IL17蛋白表达。结果:(1)皮下注射R97-116复制EAMG大鼠模型的方法有效,总造模成功率54.4%。(2)与正常组比较,模型组大鼠胸腺细胞IFNγ、IL17蛋白阳性表达均显著增高(P<0.01);与模型组比较,泼尼松组、益气解毒复方各剂量组EAMG大鼠胸腺细胞中IFNγ、IL17蛋白阳性表达显著下降(P<0.01)。结论:益气解毒复方可能通过纠正胸腺慢性炎症反应,恢复机体异常免疫功能而发挥治疗重症肌无力的作用。

从电鳐电器官中提取N_2-AchR纯品建立EAMG模型

目的从厦门海域单鳍电鳐的电器官中提取烟碱型乙酰胆碱受体(N2-AchR)纯品,用纯化的N2-AchR免疫Lewis大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型。方法参照文献报道[1-2]从电鳐电器官提取N2-AchR纯品,并采用SDS凝胶电泳蛋白定性鉴定及考马斯亮兰定蛋白含量;以纯提的蛋白主动免疫Lewis大鼠,共免疫3次,于末次免疫后第3日进行EAMG大鼠临床评分及攀网时间、肌电图、血清N2-AchRab含量、突触后膜上N2-AchR数目的检测。结果纯化的蛋白含量为1.097mg/ml(标准品为1mg/ml);EAMG模型组与佐剂组比较,攀网时间明显降低(P<0.01);临床评分及肌电图第五个反应幅度衰减百分率显著升高(P<0.01);血清N2-AchRab含量明显增加(P<0.01);突触后膜上N2-AchR数目显著减少(P<0.01)。结论从单鳍电鳐电器官纯提的N2-AchR蛋白成功诱导EAMG模型,为进一步研究重症肌无力创造了良好条件。

AchR或ConA诱导正常人淋巴细胞培养上清治疗EAMG的研究

观察乙酰胆碱受体 (AchR )或刀豆蛋白 (ConA )诱导的正常人淋巴细胞培养上清对小鼠实验性重症肌无力模型 (EAMG )的疗效。分别用AchR或ConA诱导体外培养的正常人淋巴细胞 ,收集培养上清治疗EAMG小鼠。治疗前后用ELISA和微量细胞毒试验检测小鼠血中AchRAb的含量和T细胞亚群的变化 ,并检测小鼠的肌电图。结果显示 ,经两种培养上清治疗后 ,EAMG小鼠血中AchRAb水平明显下降 ,CD8+ 细胞数量显著增多 ,CD4+ /CD8+ 比值明显降低 ,且小鼠肌电图也明显改善。本文提示AchR或ConA诱导的正常人淋巴细胞培养上清对EAMG小鼠有一定疗效 ,并探讨了其可能的作用机制和潜在的应用价值。

重肌灵对EAMG大鼠免疫调节作用的实验研究

目的 研究中药复方重肌灵对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)大鼠免疫调节作用。方法 建立Lewis大鼠EAMG模型 ,将动物分为正常组、佐剂组、模型组、重肌灵组。分别采用 3H TdR掺入法、ELISA法 ,从N2 AchR对淋巴结细胞特异性增殖反应、血清中AchRab滴度、血清IL 4、IFN γ水平等方面观察重肌灵对EAMG大鼠免疫功能的调节作用。结果 与模型组相比 ,重肌灵组可使N2 AchR所致的淋巴结细胞增殖反应受到抑制 (P <0 0 1) ;血清AchRab滴度明显降低 (P <0 0 1) ;血清IL 4、IFN γ水平下调 (P <0 0 1)。结论 重肌灵可能是通过下调血清IL 4、IFN γ ,抑制淋巴结细胞特异性增殖反应 。

大鼠EAMG模型眼外肌下调差异基因的初步筛选

目的 :通过研究大鼠实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型眼外肌存在差异表达的基因 ,探讨重症肌无力患者眼外肌无力的可能机制。方法 :将乙酰胆碱受体单抗mAb3 5和生理盐水分别给予实验组和对照组F3 44大鼠腹腔注射 ,48h后取新鲜眼外肌提取总RNA ,经反转录后获得标记cDNA探针 ,将其与BioStarR 40S表达谱基因芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果 :共筛选出 5 5条表达差异的基因 ,其中 3 0条表达降低。结论 :多种基因参与了重症肌无力眼外肌无力过程 ,差异基因表达的检测结果可为深入研究重症肌无力患者眼外肌无力机制提供新思路。

预防性双类似物鼻粘膜耐受对EAMG的影响

目的选择双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻粘膜耐受预防性给药,观察其临床及免疫指标变化,并评价疗效,探讨预防性鼻粘膜耐受在EAMG中的预防作用机制。方法应用乙酰胆碱受体(AChR)加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,并在致敏前10 d(预防耐受A组)及致敏当日(预防耐受B组)给予耐受肽Lvs262-Ala207及相应对照组CA、CB采用相同剂量对照肽MBP-p83-99鼻腔给药。检测给药后A、B组及相应对照组大鼠的体重、临床评分、肌电图、肌肉中AChR含量丢失变化及致敏第42 d血清抗AChR抗体IgG含量。结果急性期和慢性期A、B组体重明显超过相应对照组,临床症状明显轻于相应对照组,慢性期A组体重明显超过B组、病情明显轻于B组;A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率低于相应对照组;A、B组肌肉AChR含量丢失分别明显低于相应对照组,而A组低于B组;慢性期42 d A、B组IgG含量明显低于相应对照组,同时A组明显低于B组。结论本实验表明,预防耐受的疗效与自身免疫启动时间有关,启动前优于启动时耐受;双类似物鼻粘膜耐受预防不仅可有效地抑制临床症状,且可特异性减低致病性循环抗体含量和减少神经肌接头AChR含量丢失,为采用双类似物鼻粘膜耐受防治人类重症肌无力(MG)提供了依据。

雷公藤对EAMG大鼠CD4+CD25+Foxp3+细胞的分布情况影响

研究雷公藤对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis, EAMG)的治疗作用,探讨CD4+CD25+Foxp3+细胞在EAMG的发病中的作用,为临床治疗提供理论依据。方法:以完全弗氏佐剂(CFA)、大鼠来源的AChRα97-116(DGDFAIVKFTKVLLDYTGHI)多肽片段、免疫Lewis大鼠,建立EAMG动物模型。依据Lennon评分法及体重监测,并设置雷公藤组、CFA对照组、EAMG模型组。流式细胞仪检测各组大鼠胸腺和血液中CD4+CD25+FoxP3+细胞的分布情况。结果:流式细胞检测发现,各组大鼠脾和血液中,CFA组和TWP治疗组与EAMG组比较,CFA组中CD4+CD25+Foxp3+阳性T细胞的比例明显偏高,且有显著差异。结论:Th1/TH2/Th17/Treg四种T细胞亚群的失衡状态在EAMG的发病中发挥重要作用,而TWP可以通过调节这种失衡状态起到治疗作用。

“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL-12和IL-18表达水平的影响及其作用机制

目的：观察“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（ EAMG）大鼠血清中IL-12、IL-18表达水平的影响，分析针灸治疗重症肌无力（MG）的作用机制。方法：采用乙酰胆碱受体α1（AchRα1）129～145多肽片段免疫接种雌性Lewis大鼠，建立EAMG模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只，分为针灸治疗组10只、药物对照组10只及模型对照组10只，并将同期购进未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗，30 min／次，1次／d，7 d为1疗程，疗程间休息1 d，连续治疗2个疗程；药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗，18.5 mg／（ kg· d），连续治疗15 d；其余2组不予任何特殊处置，仅作对照观察。治疗后抽取大鼠尾根静脉血，采用ELISA法测定大鼠血清中IL-12和IL-18的表达水平。结果：经治疗后，针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平，均明显降低（ P＜0.05或P＜0.01）；针灸治疗组和药物对照组的组间比较显示，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平无显著性差异（ P＞0.05）。结论：“温阳补气”针法可以降低EAMG大鼠血清IL-12和IL-18的表达水平，从而达到治疗MG的作用，且其治疗效果与溴吡斯的明相近。

补脾强力复方对自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺组织GR mRNA表达的影响

目的:观察补脾强力复方对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型大鼠胸腺组织中糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的影响。方法:将Lewis大鼠按体重随机分为6组,即:正常组、模型组、强的松组(5.4 mg/kg)、补脾强力复方不同剂量组(剂量分别为4.75 g/kg,7.12 g/kg,9.49 g/kg),除正常组外,均采用鼠源性AchR-α亚基97-116肽段序列(R97-116)免疫接种复制EAMG模型。药物治疗后,ELISA法检测各组大鼠的AchR-Ab、皮质醇水平,RT-Q-PCR技术检测大鼠胸腺组织GR mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组GR mRNA相对表达量降低(P<0.01),与模型组比较,西药组、中药大、中、小剂量组大鼠AchR-Ab含量下降(P<0.05),强的松组、中药大剂量组和中剂量组GR mRNA相对表达量增加(P<0.05)。结论:补脾强力复方可提高胸腺组织GR mRNA的表达,这可能是其治疗MG的作用机制之一。