An immunoglobulin Y that specifically binds to an in silico-predicted unique epitope of Zika virus non-structural 1 antigen

Objective:To identify unique immunogenic epitopes of Zika virus non-structural 1(NS1)antigen and produce immunoglobulin Y(IgY)for potential use in he diagnosis of of Zika virus infection.Methods:Immunogenic epitopes were identified using in silico B-cell epitope prediction.A synthetic peptide analog of the predicted epitope was used to induce antipeptide IgY production in hens which was purified using affinity chromatography.Presence of purified IgY and its binding specificity were performed by gel electrophoresis and ELISA,respectively.Results:Out of the nine continuous epitopes identified,the sequence at position 193-208(LKVREDYSLECDPAVI)was selected and used to produce anti-peptide IgY.The produced IgY was found to bind to the synthetic analog of the Zika virus NS1 immunogenic epitope but not to other flaviviruses and random peptides from other pathogens.Conclusions:In this study,we identified an immunogenic epitope unique to Zika virus that can be used to develop a serodiagnostic tool that specifically detect Zika virus infection.

EBNA2免疫组化在EB病毒阳性淋巴组织疾病中的表达意义

目的观察EBNA2免疫组化在不同EB病毒阳性淋巴组织疾病中的表达差异、分析其在病理诊断与鉴别诊断中的价值。方法收集344例EB病毒阳性的淋巴组织疾病,总结EBNA2免疫组化在病变中的表达特点。结果不同的EBV阳性淋巴组织病变,EBNA2的阳性表达不同:IM中阳性39例(39/46),EBV阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤3例(3/30),淋巴瘤样肉芽肿1例(1/5),纤维素相关弥漫大B细胞淋巴瘤2例(2/2),浆母细胞淋巴瘤1例(1/14),免疫相关淋巴组织增殖性疾病32例(32/58)(包括移植后淋巴组织增殖性疾病21例,HIV相关Burkitt淋巴瘤1例,HIV相关弥漫大B细胞淋巴瘤2例,原发免疫缺陷疾病相关淋巴组织疾病6例,医源性免疫相关淋巴组织增殖性疾病2例)。其余均显示EBNA2阴性。②不同病变中的EBNA2阳性细胞表达明显不同:传染性单核细胞增多症中的EBNA2阳性细胞相对较少,并且多呈散在分布,几乎很少见到簇状聚集的情况。EBNA2阳性细胞多表现为≤10个/HPF,少见11~50个/HPF,仅有个别病例显示大于50个/HPF。免疫相关淋巴组织增殖性疾病中,出现大量EBNA2阳性细胞,阳性细胞较弥漫分布,大部分为强阳性,并且阳性细胞多显示大于50个/HPF。结论EBNA2阳性在疾病的诊断及鉴别诊断提供了新的依据,具有一定的价值;当病变表达EBNA2时,提示患者可能存在免疫缺陷或处于免疫失调状态,对临床诊断及治疗具有一定的指导意义。

V-val突变型EB病毒核抗原1的功能研究

背景与目的:EB病毒核抗原1(Epstein-Barr viral nuclear antigen 1,EBNA 1)对于维持EB病毒的潜伏感染有重要作用。V-val变异型的EBNA1与鼻咽癌有密切的相关性。本研究旨在比较原型和V-val变异型的EBNA1基因在上皮细胞中的功能的差异。方法:用PCR方法扩增出原型和V-val变异型EBNA1基因的全长并克隆到pGFP载体上,转染HEK293细胞,检测两种亚型的EBNA1蛋白的表达对细胞生物学性状的影响。以含有EB病毒增强子FR序列的荧光素酶载体作为报告基因,比较两种亚型的EBNA1基因对质粒的转录激活能力。结果:原型和V-val变异型EBNA1基因的表达对HEK293细胞的生长速度没有明显影响,但表达原型EBNA1的细胞的克隆形成能力明显低于V-val亚型。在裸鼠致瘤实验中,接种表达原型和V-val变异型EBNA1细胞的实验组均未见肿瘤形成。但是在瞬时转染实验中,表达V-val变异型EBNA1基因的HEK293细胞的荧光素酶活性明显高于原型EBNA1基因。结论:原型和变异型EBNA1均未发现有明显的转化细胞的能力,但是V-val变异型EBNA1蛋白与原型相比,其转录激活的功能明显增强。

5-Aza-CdR联合EBNA1-DC疫苗诱导的淋巴细胞对鼻咽癌C666-1细胞的杀伤作用

目的:探讨EB病毒核抗原1(EBNA1)mRNA修饰的DC(EBNA1-DC)诱导的淋巴细胞联合甲基化抑制剂5-Aza-CdR对鼻咽癌C666-1细胞的杀伤作用。方法:以构建的EBNA1-pCDNA3.1质粒为模板,体外转录获得EBNA1 mRNA,通过脂质体转染至健康人外周血来源DC,构建EBNA1-DC疫苗。流式细胞术检测转染后DC表型及5-Aza-CdR处理后的C666-1细胞凋亡情况。实时无标记动态细胞分析技术检测EBNA1-DC疫苗诱导的淋巴细胞联合5-Aza-CdR的特异性抗肿瘤活性。结果:转染EBNA1 mRNA后EBNA1-DC表面EBNA1阳性率为(59.3±5.85)%,HLA-DR的表达与未转染DC相比显著升高[(84.9±5.5)%vs(68.0±5.8)%,P=0.026],CD80的表达也显著升高([88.2±3.9)%vs(61.1±4.4)%,P=0.015]。低剂量5-Aza-CdR处理后的C666-1细胞凋亡情况与未处理的细胞相比无显著差异。经低浓度5-Aza-CdR预处理的C666-1细胞中IRF7基因表达与未处理的细胞相比显著升高(P=0.0001)。与空载的DC相比,EBNA1-DC诱导的淋巴细胞对EBV阳性表达的C666-1细胞具有更强的特异性杀伤活性(P=0.049);经低浓度5-Aza-CdR预处理的C666-1细胞对EBNA1-DC诱导的特异性免疫杀伤更敏感(P=0.019)。结论:5-Aza-CdR与EBNA1-DC疫苗联合可显著增强对C666-1细胞的特异性免疫杀伤,本研究为开拓以mRNA为基础的DC疫苗及其在临床综合治疗中的应用转化提供前期研究基础。

EBNA-1的功能特点与基因治疗

EB病毒(EBV)与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。EBNA-1是EBV潜伏感染时编码的一种核蛋白,它能调节EBV基因的复制,增强病毒基因的转录,并能保证EBV以附加体的形式稳定存在于被感染的细胞内。利用此蛋白上述两种功能特点,研究者构建了EBV复制子载体,这种载体已被广泛地应用于基因治疗。

用转染EB病毒基因片段的真核细胞检测鼻咽癌病人的抗EB病毒核抗原-1(EBNA-1)抗体

用转染EBV DNA Bam HI K片段后稳定表达EBNA-1的K_4细胞作为靶细胞,检测50份鼻咽癌病人和38份健康对照者血清中的IgG/EBNA-1抗体;阳性率分别为100％和92％。前者的平均几何滴度为89.4,后者为18.3,前者约为后者的5倍。同一批被检血清经SPA吸收去除IgG竞争性抑制后,鼻咽癌病人的IgA/EBNA-1抗体阳性率达78％(GMT 20.9),健康人的IgA/EBNA-1抗体阳性率仅5.3％,效价亦很低(GMT 5.2)。表明IgA/EBNA-1抗体对鼻咽癌是比较特异的,可考虑作为鼻咽癌血清学诊断的指标之一。

EBNA1在淋巴瘤中的表达及意义

目的:探讨EB病毒核抗原-1(EBNA1)在恶性淋巴瘤发生中的意义。方法:收集50例淋巴瘤组织蜡块和20例癌旁正常组织蜡块,采用免疫组织化学SP法检测EBNA1的表达情况。结果:EBNA1在淋巴瘤标本和癌旁正常组织中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。结论:EBNA1在淋巴瘤中的表达上调,EBNA1的阳性表达率与恶性淋巴瘤的临床分期和组织类型有关,推测EBNA1可能与淋巴瘤的预后有关。

siRNAs干扰EBNA1下调EBV阳性鼻咽癌细胞内ALOX12的表达

【目的】利用RNA干扰技术抑制C666-1细胞中EB病毒核抗原1(EBNA1)的表达,探索氧化应激与抗氧化相关基因的表达变化。【方法】采用蛋白质印迹证实了能有效抑制EBNA1表达的干扰序列,使用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测C666-1细胞的存活率,利用实时定量PCR芯片技术探索了氧化应激与抗氧化相关基因的转录谱变化,并通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹进行了验证。【结果】EBNA1-1414和EBNA1-1437干扰序列转染C666-1细胞48h后,分别可抑制59%和56%的EBNA1蛋白表达,细胞存活率分别降低了33%和24%。PCR芯片实验发现干扰EBNA1表达后48hC666-1细胞中花生四烯酸盐12-脂氧合酶(ALOX12)蛋白表达有下调,谷胱甘肽还原酶(GSR)和过氧化物酶3(PRDX3)在转录水平表达上调。【结论】EBNA1或许能够通过上调ALOX12的表达间接地发挥促鼻咽癌作用。

EB病毒阳性的不同类型淋巴瘤组织中EBNA1多态性研究

目的:筛选前期研究中EB病毒(EBV)阳性的15例不同类型淋巴瘤病例,对这15例EBV阳性病例进行PCR扩增及EBV核抗原1(EBNA1)羧基端测序分析,观察是否存在突变热点AA487及AA466-527之间的变异。方法:采用PCR方法对EBV阳性病例进行EBNA1基因羧基端的扩增,并将扩增产物送公司进行测序分析。同时分析淋巴瘤患者EBV表达与预后的相关性。结果:本次实验成功扩增15例病例,进行EBNA1基因羧基端测序分析发现,15例标本中EBNA1羧基端均出现序列变异,其中以往报道过的突变有:错义突变AA487 A→V、499 D→E、502 T→N、524 T→I、528 I→V和533 L→I,无义突变为AA520密码子cat→ctc;本次研究新发现的突变有:错义突变AA462 G→E、466 G→R、AA487 A→L、492 S→C、502 T→N和524 T→I及无义突变AA466密码子gga→gaa、AA 480密码子aac→atc和AA 547密码子ccc→cct突变。几例非肿瘤细胞EBER阳性的淋巴瘤病例也均出现了与以往研究相同的共有突变;而肿瘤细胞EBER阳性的淋巴瘤样本中除了有部分共有突变外,均出现了非共有突变。结论:本组淋巴瘤病例中,除了有部分EBNA1基因羧基端的共有突变外,均出现了非共有突变,这与以往研究不同。

EB病毒特异性增强子CAT报告质粒构建策略

构建携带EB病毒特异性增强子oriP不同结构域的CAT报告质粒,以探讨EB病毒特异性增强子与EB病毒核抗原-1结合后的转录增强作用。聚合酶链反应扩增得到增强子oriP全序列,借助于pUC19质粒将其不同结构域克隆到pCAT3Promoter(pCAT3/P)载体。扩增获得oriP全序列;构建得到携带EB病毒特异性增强子Orip不同结构域的CAT报告质粒pCAT3/P-oriP、pCAT3/P-FR、pCAT3/P-DS、pCAT3/P-(FR+DS)等,质粒中目的基因的插入方向经鉴定正确。

血清VCA-IgA、NA1-IgA、Zta-IgA检测在鼻咽癌筛查中的应用价值

目的探讨EB病毒壳抗原免疫球蛋白A(VCA-IgA)、EB病毒核抗原1免疫球蛋白A(NA1-IgA)、Zta蛋白抗体免疫球蛋白A(Zta-IgA)检测在鼻咽癌筛查中的应用价值。方法选择2010年2月至2016年4月收治的鼻咽癌患者100例为鼻咽癌组,并抽选同期因鼻咽部症状就诊的非鼻咽癌患者500例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两组患者血清VCA-IgA、NA1-IgA、Zta-IgA阳性率。结果两组间EB病毒的血清VCA-IgA、NA1-IgA、Zta-IgA检测阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3种EB病毒抗体联合诊断效力均高于单项指标,诊断灵敏度、特异度均达90.0%以上,阳性预测值达69.6%。结论3种EB病毒抗体指标联合检测对早期鼻咽癌的诊断具有重要价值。

EBNA2基因在霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨EB病毒核心抗原2(EBNA2)基因在EB病毒(EBV)阳性霍奇金淋巴瘤(HL)患者的表达及临床意义。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)技术检测36例EBV阳性HL患者的全血及蜡块标本中EBNA2基因的表达,分析其在EBV阳性HL中的临床意义。结果全血和蜡块样本中各检出EBNA2基因12例(33.3%)和3例(8.3%)。在全部HL患者全血标本中,EBNA2基因在男性和女性患者中各检出5例和7例;在Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ和Ⅲ~Ⅳ期患者中各检出4例和8例;在早期患者无和有不良预后因素组中各检出1例和3例;在晚期患者低危、中危和高危组中各检出3例、5例和0例;在结节硬化型、富于淋巴细胞型、混合细胞型、结节性淋巴细胞为主型和淋巴细胞减少型中各检出5例、3例、3例、1例和0例;在有和无巨大肿块患者中各检出0例和12例。结论EBV阳性HL患者全血标本中EBNA2基因的检测可能优于蜡块标本;EBNA2基因的表达与EBV阳性HL患者的性别、Ann Arbor分期、病理组织学类型、有无巨大肿块和风险评分差异均无统计学意义。

鼻咽癌中EB病毒启动子Qp的突变及其功能学研究

【目的】探讨鼻咽癌细胞中启动EB病毒核抗原1(EBNA1蛋白)表达的EB病毒Q启动子(Qp)的变异特征,比较有第62225位点(g→a)和第62422位点(g→c)两个点突变的Qp与原型Qp(B95.8型)的功能学差异及其生物学意义。【方法】采用PCR的方法扩增29例鼻咽癌组织石蜡标本和14例健康成人外周血标本(总共43例)中的Qp序列,PCR产物测序后分析其突变情况,统计学分析Qp中的点突变与鼻咽癌的相关性。把突变型和原型Qp分别克隆到荧光素酶报告基因载体上,检测相对光强度(RLU),比较突变型与原型Qp启动转录的活性。使用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验来比较突变型和原型Qp与Sp1蛋白的亲和力。【结果】通过PCR扩增和测序实验,证实Qp的突变与鼻咽癌有密切的相关性(P=0.0395,<0.05)。突变型Qp启动转录的活性明显高于原型(RLU之比约为2.5:1,P<0.05),并且突变型Qp与Sp1的亲和力较原型Qp增强约1.52倍。【结论】在鼻咽癌组织中,突变型Qp可能通过增强与Sp1亲和力的机制,使其启动转录的活性明显增强。Qp特定位点的突变在EB病毒对鼻咽上皮细胞的感染和转化过程中可能起了重要的作用。

HBsAg对健康成人外周血单核细胞来源树突状细胞Tim-3信号通路的影响

目的探讨HBsAg对健康成人外周血单核细胞来源树突状细胞(MD—DCs)的免疫活性及对T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)和下游信号分子核因子-κB(NF—κB)蛋白表达的影响。方法分离健康成人外周血单核细胞,经GM—CSF、IL-4联合诱导为树突状细胞(DCs),流式细胞术检测DCs表面标志物表达水平。MD—DCs分4组添加不同浓度HBsAg(0、1、2、5μg/ml),分别设为对照组、+1μg/ml组、+2μg/ml组、+5μg/nl组,Western印迹法检测Tim-3、NF—κB信号蛋白表达,细胞增殖与毒性检测试剂检测MD—DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测细胞因子分泌水平。结果外周血来源单核细胞成功诱导分化为DCs。与对照组相比,+2μg/ml及+5μg/ml组MD—DCs Tim-3及NF—κB表达水平均上调,刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力均增强,炎症因子IL-6、IL-10、IFN—γ分泌水平均增高(均P<0.05),而+1μg/ml组较对照组无统计学差异(均P>0.05)。与其他3组相比,+5μg/ml组MD—DCs Tim-3、NF—κB、炎症因子分泌水平增高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强(均P<0.05)。结论 HBsAg上调MD—DCs Tim-3及NF—κB表达水平,增强MD—DCs免疫活性,且刺激作用随HBsAg浓度的增高而增强。

顺德地区EB病毒感染现状及影响因素分析

目的了解顺德地区人群中EB病毒的流行状况及EB病毒感染的影响因素。方法于2015年4~6月对顺德地区大良、陈村、杏坛三个镇17 727名居民进行问卷调查,采用酶联免疫吸附法检测EB病毒核心抗体IgA(NA1-IgA)、EB病毒衣壳抗体IgA(VCA-IgA)水平。采用非条件Logistic回归探讨EB病毒感染的影响因素。结果共计纳入17 581人。EB病毒NA1-IgA、VCA-IgA阳性率分别为3.23%和6.76%。EB病毒感染率为9.49%。男性的EB病毒感染风险高于女性,OR值为1.15(95%CI=1.04~1.28);与<40岁年龄组比较,40~49岁年龄组感染风险降低(OR=0.86;95%CI=0.73~1.01),而50岁以后随年龄增长,感染风险增加;与小学及以下文化程度者相比,文化程度高者感染风险降低;吸烟者与非吸烟者相比,其感染风险增高(OR=1.19;95%CI=1.01~1.39)。结论顺德地区男性EB病毒感染风险高于女性,年龄与EB病毒感染风险呈"V"型关系,高文化程度是EB病毒感染的保护因素,吸烟可能是EB病毒感染的危险因素。

Bmi-1自身抗体与EB病毒衣壳抗原IgA抗体联合检测诊断鼻咽癌的价值

目的探讨联合检测Bmi-1自身抗体与EB病毒衣壳抗原(viral capsid antigen,VCA)-IgA抗体在鼻咽癌诊断中的意义。方法鼻咽癌患者200例为鼻咽癌组,其中Ⅰ+Ⅱ期33例,Ⅲ+Ⅳ期167例,同期体检健康者216例为对照组,采用ELISA法检测血清Bmi-1自身抗体和EB病毒VCA-IgA表达情况,比较Bmi-1自身抗体、VCA-IgA、Bmi-1自身抗体+VCA-IgA阳性率,分析Bmi-1自身抗体、VCA-IgA单独及联合诊断鼻咽癌的效能。结果鼻咽癌Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期Bmi-1自身抗体阳性率(27.3%、30.5%)、VCA-IgA阳性率(33.3%、51.5%)、Bmi-1自身抗体+VCA-IgA阳性率(51.5%、65.3%)均高于对照组(5.6%、4.6%、9.3%)(P<0.05);Bmi-1自身抗体、VCA-IgA、Bmi-1自身抗体+VCA-IgA阳性率在性别、年龄、T分期、N分期和临床分期上差异无统计学意义(P>0.05);Bmi-1自身抗体诊断鼻咽癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为30.0%、94.4%、83.3%、59.3%,VCA-IgA分别为49.0%、95.4%、90.7%、66.9%,Bmi-1自身抗体+VCA-IgA分别为63.0%、90.7%、86.3%、72.6%,联合检测诊断鼻咽癌的敏感性高于Bmi-1自身抗体、VCA-IgA单独检测(P<0.05)。结论血清Bmi-1自身抗体及VCA-IgA在鼻咽癌尤其是早期鼻咽癌诊断中有较高价值,二者联合检测可提高鼻咽癌的诊断效能。

EB病毒核抗原1对鼻咽癌细胞miR-34a/Notch1轴及增殖、凋亡的影响

目的探讨EB病毒核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen1,EBNA1)对鼻咽癌细胞miR-34a/Notch1轴及增殖、凋亡的影响。方法体外培养人EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)阴性和阳性鼻咽癌细胞系CNE2、C666-1,CNE2细胞设置对照组、空转染组、EBNA1过表达组、miR-34a对照组和双转染组,进行不同的转染处理。实时荧光定量PCR法检测EBNA1、Notch1 mRNA及miR-34a表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;蛋白免疫印迹法检测Notch1、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白表达。结果与CNE2细胞相比,C666-1细胞中Notch1 mRNA表达水平升高(P<0.05),miR-34a表达水平降低(P<0.05);转染EBNA1后,CNE2细胞中EBNA1、Notch1 mRNA表达水平、细胞OD值、S、G2/M期CNE2细胞比例及Notch1、cyclin D1蛋白表达水平升高,miR-34a表达水平、细胞凋亡率、G0/G1期CNE2细胞比例降低(P<0.05);进一步转染miR-34a后,CNE2细胞中以上指标的变化均被逆转(P<0.05)。结论EBNA1可能通过降低miR-34a水平,上调Notch1表达,对鼻咽癌CNE2细胞发挥增殖促进、凋亡抑制作用。

EB病毒核蛋白-1 B细胞表位的预测及其同源性分析

预测EB病毒核蛋白1(EBNA-1)的B细胞优势表位,并与人体组织抗原序列比对,以分析两者匹配情况。以EBV-1型NA-1的氨基酸序列为基础,采用SOPMA、GOR和HNN方法,结合跨膜区域、亲水性等参数综合预测EBNA-1的B细胞优势表位;进一步采用blastp方法,比对分析预测的EBNA-1 B细胞表位与相关的人体组织抗原序列的匹配情况。结果提示:B细胞优势表位可能位于其N端16-23、35-78、332-337、340-357、398-404、419-432、620-637区域;其中部分表位的不同区域分别与小核糖核蛋白SmB、SmD,核蛋白SSA,不均一核糖核蛋白hnRNPA1、hnRNP G具有较高的匹配率。结果表明,用多参数预测可获得EBNA-1的B细胞优势表位,并可进一步分析其与人体组织抗原的相同或相似序列,为自身免疫性疾病的发病机制研究提供理论依据。

EB病毒核抗原1优势表位区段抗原的克隆表达及其在鼻咽癌诊断中的应用

目的制备高活性EB病毒核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1, EBNA1)的优势表位区段抗原,并初步评价该抗原在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法利用生物学软件BIOSUN分析EBNA1抗原的B细胞表位分布,并从中选取含有优势表位的抗原区段。然后利用分子生物学技术构建含有优势表位区段序列的原核表达质粒并进行表达,获得纯化优势表位抗原,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)初步评价优势表位区段抗原的检测性能。结果成功构建含有优势表位抗原区段序列的原核表达质粒,获得了可溶性表达的EBNA1优势表位区段抗原NA-2(401~641 aa)。通过间接ELISA法对小量样本进行验证,确定NA-2抗原针对EBNA1-IgA抗体具有较高的抗原活性和特异性,较EBNA1-IgG和EBNA1-IgM抗体而言,能够较好地区分鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)和健康对照样本。放大样本量进行检测,基于NA-2抗原的EBNA1-IgA抗体间接ELISA方法检测灵敏度和特异性分别为90.38%和91.58%,EBNA1-IgA抗体检测的AUC值为0.942。结论获得EBNA1优势表位区段抗原NA-2,该抗原是优选的可以用于EBNA1-IgA检测的抗原,利用该抗原所建立的间接ELISA检测方法可以很好地区分鼻咽癌患者和健康对照。

基于协同刺激分子表达量建立慢性HBV感染患者T淋巴细胞免疫功能评价新体系的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T淋巴细胞CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）、程序性死亡分子-1（PD-1）和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的表达及意义.方法 连续收集2012年10月至2013年6月在苏州大学附属第一医院住院的慢性HBV感染患者102例,其中慢性乙型肝炎（CHB） 42例,乙型肝炎肝硬化30例,肝癌30例.另选30名健康体检者作为对照组.采用流式细胞术和定量聚合酶链反应（PCR）技术测定所有研究对象外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量,并采用单因素方差分析和LSD-t检验比较各组间的差异.采用Spearman秩相关分析外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量与HBV DNA载量、乙型肝炎e抗原（HBeAg）和丙氨酸转氨酶（ALT）之间的相关性.结果 慢性HBV感染患者CD4＋ CD28＋、CD8＋ CD28＋和CD4＋ CTLA-4＋的表达均低于健康对照人群,其中肝癌组的CD4＋ CD28＋表达量低于CHB组（t=2.373,P＜0.05）,肝硬化和肝癌组的CD8＋CD28＋表达量低于CHB组（t=4.324和4.088,P＜0.01）.CHB组CD8＋ PD-1＋、CD4＋ Tim-3＋和CD8＋ Tim-3＋的表达量高于肝硬化、肝癌以及健康对照组（t=3.051,3.130,3.121,3.254和3.723,P＜0.01）.相关性分析显示,CD8＋T淋巴细胞PD-1表达量与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关（r=0.516和0.582,P＜0.01）;CD8＋T淋巴细胞Tim-3的表达量与ALT水平、HBV DNA载量也呈正相关（r=0.578和0.556,P＜0.01）.此外,CD8＋T淋巴细胞PD-1与Tim-3的表达量也呈一定的正相关（r =0.506,P＜0.01）.结论 HBV感染患者外周血T淋巴细胞表面分子异常表达与其免疫功能紊乱和疾病慢性化的发生和发展相关.