应用H.E染色的鼻咽癌细胞涂片进行DNA含量测定和EB病毒基因原位杂交的研究

分析鼻咽癌常规 H.E染色细胞涂片分别作 Feulgen染色检测 DNA含量和原位杂交检测 EB病毒编码 RNAs(EBERs)的效果 ;将常规 HE染色的 9例正常鼻咽细胞涂片和 38例鼻咽癌细胞涂片用 1%酸性酒精褪色 ,然后作 Feulgen染色 ,应用图象分析仪测定涂片细胞 DNA含量 ,并将 38例鼻咽癌细胞病例的阳性涂片进行 EBERs原位杂交检测 ;结果显示正常鼻咽细胞均为 DNA二倍体核型 ,38例癌阳性涂片中呈 DNA二倍体者 6例 ,DNA非二倍体者 32例 (84.2 % ) ,癌细胞核 EBERs阳性者 35例 (92 .1% ) ;结果表明 HE染色的鼻咽癌细胞学涂片经褪色后作 Feulgen染色和原位杂交检测 ,能较满意进行 DNA和 EBERs分析 ,表明常规 H.E染色和褪色处理均不影响 Feulgen染色和 EB病毒原位杂交的质量效果。本检测方法可靠、可行 ,适用于常规染色细胞学样本的回顾性研究和随访研究 。

EB病毒基因检测诊断鼻咽癌的初步探讨

有关资料表明,EB病毒感染与鼻咽癌的发生有密切关系。鼻咽癌患者体内都有较高水平的抗EB病毒抗EB病毒抗体。长期以来,免疫酶法已做为鼻咽癌的重要血清学检测指标之一,但它是一种间接辅助的检测手段,有一定局限性。本实验用PCR法检测71例IgA/VCA抗体阳性患者的鼻咽部脱落细胞中的EB病毒DNA。

EB病毒基因检测对良恶性胸腔积液诊断价值

目的 研究胸腔积液 EB病毒基因 (EBVG)在良、恶性胸液中的鉴别诊断 ,并与结核基因 (TBG)进行对比。方法 用聚合酶链反应 (PCR)检测胸腔积液 EBVG与 TBG。结果 6 8例患者 :(1)结胸组 38例 :EBVG 9例(2 3.7% ) ,TBG2 9例 (76 .3% ) ,(2 )恶胸组 30例 :EBVG 2 4例 (80 % ) ,TBG 6例 (2 0 % )。基因检测的灵敏度为 0 .89,特异度 0 .90 ,正确率 0 .91。结论 胸腔积液 EBVG检测 。

去白红细胞除去EB病毒的效果

背景 大多数成人，包括献血者，EB病毒感染导致病毒在B淋巴细胞终生潜伏。本文报道去除红细胞成分中白细胞对除去EB病毒的效果。研究设计与方案随机选择16单位新鲜AS-5红细胞经过滤器去白细胞。采用灵敏的实时PCR法检测去白细胞之前标本中的B淋巴细胞和去白细胞后标本中的单个核细胞（MNCs）中EB病毒DNA。结果在16单位去白细胞前的红细胞中的CD19＋B细胞有14单位发现EB病毒基因。

鼻咽癌组织中BHRF1基因的研究

目的：探讨鼻咽癌组织中ＥＢ病毒基因ＢＨＲＦ１的存在和表达与癌细胞分化及其患者预后间的关系。方法：利用斑点杂交技术检测鼻咽未分化癌、低分化及高分化鳞癌中ＢＨＲＦ１的存在和表达情况，并且观察患者对放疗的效果。结果：ＢＨＲＦ１的存在与表达与鼻咽癌的分化无关，但其表达可导致癌细胞对辐射敏感性的下降（Ｐ＜０．０１）。结论：ＢＨＲＦ１在鼻咽癌细胞中的表达可增强其抵抗辐射诱发细胞凋亡的能力，这在鼻咽癌诊断、治疗和预后判断上具有重要意义。

Expression of Epstein-Barr virus genes in EBV-associated gastric carcinomas

AIM: To understand the expression of latent and lytic genes of Epstein-Barr virus (EBV) in EBV-associated gastric carcinoma (EBVaGC) and to explore the relationship between EBV-encoded genes and development of EBVaGC at molecular level, METHODS: One hundred and seventy-two gastric carcinoma tissues and 172 corresponding para-carcinoma tissues were tested for EBV genome by polymerase chain reaction (PCR)-Southern blotting. EBV-encoded small RNA (EBER) 1 of the PCR positive specimens was detected by in situ hybridization (ISH). Gastric carcinomas with positive EBER1 signals were classified as EBVaGCs. RT-PCR and Southern hybridization were applied to the detection of expression of nuclear antigen (EBNA) promoters (Qp, Wp and Cp), EBNA 1 and EBNA 2, latent membrane proteins (LMP) 1, 2A and 2B and lytic genes (immediate early genes BZLF1 and BRLF1, early genes BARF1 and BHRF1, late genes BcLF1 and BLLF1) in EBVaGCs. RESULTS: Eleven EBV positive samples existed in gastric carcinoma tissues (6.39%). No EBV positive sample was found in corresponding para-carcinoma tissues. The difference between EBV positivity in carcinoma tissues and corresponding para-carcinoma tissues was significant (x2 = 9.0909, P = 0.0026). Transcripts of Qp and EBNA1 were detected in all the 11 EBVaGCs, while both Wp and Cp were silent. EBNA2, LMP1 and LMP2B mRNA were absent in all the cases, while LMP2A mRNA was detected in 4 of the 11 cases. Of the 11 EBVaGCs, 7 exhibited BcLFl transcripts and 2 exhibited BHRF1 transcripts. The transcripts of BZLF1 and BARF1 were detected in 5 cases, respectively. No BLLF1 and BRLF mRNA were detected. CONCLUSION: The latent pattern of EBV in gastric carcinoma corresponds to the latency I/II. Some lytic infection genes are expressed in EBVaGCs tissues. BARF1 and BHRF1 genes may play an important role in tumorigenesis of gastric carcinoma.

小干扰RNA抑制EB病毒潜伏膜蛋白1表达对鼻咽癌细胞生长的影响

目的探讨人工诱导RNA干扰技术在EB病毒潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein1,LMP-1)功能研究中的应用价值,观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞生长的影响。方法人工合成4条双链不同序列的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),通过脂质体转染导入表达EB病毒基因的鼻咽癌C611细胞后,用半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction,RTPCR)检测LMP1mRNA水平,筛选出能有效抑制LMP-1表达的siRNA序列。采用噻唑蓝法和流式细胞仪观察LMP1表达抑制后,鼻咽癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的变化。结果导入有效siRNA后,C611细胞中LMP-1mRNA水平下降90%以上,重复转染可使有效干扰时间延长至96h。LMP-1基因抑制后,EB病毒阳性的C611细胞增殖速度最多可下降至32.9%;细胞周期在G0G1期受阻。在同样处理下,EB病毒阴性的HNE2细胞的生长则未受到影响。结论全新的人工诱导RNA干扰技术能够有效抑制LMP1基因的表达,降低鼻咽癌细胞的增殖能力,为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新的思路。

甲状腺癌发生与EB病毒感染的关系

目的 探讨甲状腺癌发生与EB病毒（EBV）感染的相关性.方法 选取155例甲状腺癌患者手术切除标本为研究对象,根据WHO分类进行分组,并以癌旁正常甲状腺组织为对照,应用免疫组织化学法和原位杂交法检测各组EBV的潜伏膜蛋白-1（LMP-1）和EB病毒基因编码的核糖核酸（EBER-1）的表达.结果 LMP-1和EBER-1在甲状腺癌组织中的阳性表达率分别为41.94％ （65/155）和56.13％（87/155）,明显高于在正常甲状腺组织中的20.00％（31/155）和27.10％ （42/155）,差异均有统计学意义（P＜0.05）.LMP-1和EBER-1在乳头状癌表达阳性率分别为52.13％和60.64％,高于其他病理类型,差异均有统计学意义（P＜0.05）.原位分子杂交技术测定EBER-1的阳性率为56.13％,高于免疫组织化学技术检测LMP-1的阳性率（41.94％）,两种方法检测甲状腺癌组织中EBV感染的结果差异有统计学意义（P＜0.05）,且两种检测方法明显相关（r=0.70）.结论 EBV感染与甲状腺癌的发生发展明显相关,特别是与乳头状癌的关系更为密切.

肾脏炎性假瘤伴淋巴细胞EB病毒感染

炎性假瘤是一种原因不明的占位性病变，可发生在胃肠道、软组织、眼眶、呼吸道、膀胱、肝脏和脾脏等很多部位［1］。发生在泌尿道的炎性假瘤最常发生于膀胱［2］，而肾脏的炎性假瘤是一种少见的疾病。分子生物学技术显示，一部分诊断为炎性假瘤的病例可能是真性肿瘤，因为它们检测出了激活素受体样激酶1（ALK-1）异位［3］或是EB病毒基因的克隆性。与EB病毒感染相关的炎性假瘤主要位于肝脏和脾脏［4］，本例肾脏炎性假瘤伴淋巴细胞EB病毒感染，其是否是真性肿瘤还有待进一步考证。现将其临床特点、影像学表现、组织学、免疫学及分子生物学特点及鉴别诊断总结如下。

Regulation network and expression profiles of Epstein-Barr virus-encoded microRNAs and their potential target host genes in nasopharyngeal carcinomas

Epstein-Barr virus(EBV)is associated with nasopharyngeal carcinoma(NPC)tumorigenesis.However,the mechanism(s)connecting EBV infection and NPC remain unclear.Recently,a new class of EBV microRNAs(miRNAs)has been described.To determine how EBV miRNAs control the expression of host genes,and to understand their potential role in NPC tumorigenesis,we profiled the expression of 44 mature EBV miRNAs and potential host genes in NPC and non-tumor nasopharyngeal epithelial tissues.We found that 40 EBV miRNAs from the BART transcript were highly expressed in NPC.Analysis of potential BART miRNA target genes revealed that 3140 genes and several important pathways might be involved in the carcinogenesis of NPC.A total of 105 genes with potential EBV miRNA binding sites were significantly downregulated,suggesting that EBV miRNAs may regulate these genes and contribute to NPC carcinogenesis.An EBV miRNA and host gene regulation network was generated to provide useful clues for validating of EBV miRNA functions in NPC tumorigenesis.