EB病毒BRLF1基因及EB病毒Rta/IgG抗体在鼻咽癌中表达的临床意义

目的探讨EB病毒BRLF1基因(EBV-BRLF1)表达量及血清EB病毒Rta/IgG(EBV-Rta/IgG)抗体浓度在鼻咽癌(NPC)早期诊断、临床分期中的意义。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应法测量89例NPC组织的EBV-BRLF1基因表达量,采用EBV-Rta/IgG定量抗体试剂盒检测228例血清的Rta/IgG抗体浓度,分析它们与NPC早期诊断、临床分期的相关性。228例血清包括NPC组89例、鼻咽部慢性黏膜炎病例(高危组)19例和同期健康人群120例。结果 89例NPC组血清的EBV-Rta/IgG抗体浓度为(111.81±76.77)U/mL,灵敏度为75.3%(67/89),特异度为94.2%(131/139),诊断符合率为86.8%(198/228);19例高危组血清的EBV-Rta/IgG抗体浓度为(15.14±33.04)U/mL,120例健康体检组血清的EBV-Rta/IgG抗体浓度为(6.63±11.26)U/mL;各组间比较浓度差异具有统计学意义(P<0.05)。EBV-BRLF1基因在NPC肿瘤组织中的表达率为63.51%(47/74),中位表达量为8.53。NPC组中EBV-BRLF1基因表达量与N分期、M分期及临床分期无关(P>0.05),与T分期差异有关(P=0.061),接近临界范围。血清EBV-Rta/IgG抗体浓度与N分期、M分期及临床分期无关(P>0.05)。在T分期组间比较中发现,T3期呈一定上升趋势,T2与T3组间差异具有统计学意义(P=0.048)。结论 EBV-BRLF1基因在NPC组织中高度表达;EBV-Rta/IgG定量抗体试剂盒检测可以作为早期筛查NPC的临床指标之一;EBV-BRLF1基因表达量及血清EBV-Rta/IgG抗体浓度与NPC的N分期、M分期及临床分期无关,与T分期局部组织浸润呈一定相关性。

鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N端XhoⅠ酶切位点的丢失

背景与目的;众所周知,EB病毒LMP1基因在鼻咽癌变过程起着一定的作用。本研究通过检测广东地区鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-末端区Xho Ⅰ酶切位点的丢失,探讨LMP1基因变异在鼻咽癌发生发展中的作用。方法:收集中山大学肿瘤防治中心鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本63例。收集EB病毒健康携带者外周血单个核细胞(PBMCs)10例作为对照。采用QIAamp DNA Mini Kit和QIAampDNA Blood Mini Kit分别抽取组织和外周血单个核细胞的DNA,应用巢式PCR扩增EB病毒LMP1基因的N-末端区,并用Xho Ⅰ对扩增产物进行酶切。采用四色荧光 末端终止法对扩增产物进行序列分析。结果:10例健康携带者外周血单个核细胞的EB病毒LMP1基因N-末端区均未见Xho Ⅰ酶切位点的丢失。63例鼻咽癌组织中有50例(79.37％)出现Xho Ⅰ酶切位点的丢失(Xho Ⅰ-loss),还有4例(6.34％)为Xho Ⅰ酶切位点部分丢失,只有9例(14.29％)未见Xho Ⅰ酶切位点的丢失(wt-Xho Ⅰ)。除了Xho Ⅰ酶切位点的丢失(nt:169423～169428;GAGCTC→GA T CTC)外,还发现四个错义点突变。结论:本研究所检测的广东地区EB病毒健康携带者外周血单个核细胞所携带的EB病毒LMP1基因为wt-Xho Ⅰ,而在鼻咽癌组织中主要为Xho-Ⅰ-loss。因此,我们认为EB病毒LMP1基因N-末端区Xho Ⅰ酶切位点的丢失和其?

应用荧光原位杂交检测EB病毒BNLF-1基因在转基因小鼠子代染色体上的整合及其定位

应用荧光原位杂交技术研究了EB病毒潜伏膜蛋白基因(BNLF-1)在转基因小鼠子二代染色体上的整合及其定位。结果在两只子二代转基因小鼠中,分别观察80个和60个分裂相,出现杂交信号的核型分别为27和18个,检出率为33.8％和30％。转基因分别整合在14号染色体和10号染色体上。提示转基因BNLF-1已稳定整合到转基因小鼠的染色体上,并通过生殖细胞遗传给子代;推测转基因原代鼠的转基因整合可能是随机的多位点整合。

EB病毒转化人胃上皮细胞GES-1中bcl-2基因的表达

目的研究EBV感染人胃上皮细胞系GES-1后bcl-2基因的表达状况,探讨bcl-2基因在EBV相关胃癌发生中所起的作用。方法采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV产生细胞系Akata1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,经有限稀释法克隆和G418筛选获得感染和转染细胞克隆,用pcDNA3空载体质粒转染的人胃上皮细胞系GES-1细胞作对照;采用免疫细胞化学染色(ICC)法测定EBNA1基因的表达以鉴定EBV感染细胞克隆及测定EBV感染细胞中Bcl-2蛋白的表达。结果与对照相比较,感染细胞中Bcl-2蛋白的表达阳性。结论EBV感染可使人胃上皮细胞Bcl-2蛋白表达增高,EBV对人胃上皮细胞的转化作用可能与bcl-2基因的过度表达有关。

EB病毒BHRF 1基因表达对鼻咽癌细胞周期分布影响的研究

ＥＢ病毒感染与鼻咽癌的发生和发展明显相关。近来研究发现，ＥＢ病毒编码基因的表达与病毒介导的细胞转化与恶变有关。ＢＨＲＦ１为ＥＢ病毒编码的一个早期基因，其与原癌基因Ｂｃｌ－２具有部分相同的序列和共同的超微结构定位，提示其具有相似的功能和机理，即有抑制细...

我国北方地区鼻咽癌患者EB病毒LMP1基因缺失分析

为研究我国北方地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者Epstein Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)基因C端区缺失状况,探讨其在鼻咽癌发生中所起的作用。收集我国东北地区鼻咽癌石蜡组织22例,非鼻咽癌患者外周血26例,提取DNA后,采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增LMP1基因的C末端,对其中有缺失的4例鼻咽癌进行了克隆和序列分析。结果显示:22例鼻咽癌组织标本中,有19例扩增出特异性条带,阳性率为86%。其中8例存在缺失,缺失率42%。取4例缺失样品进行序列分析,并与B95-8原型LMP1做比较,结果显示:4例鼻咽癌样品均存在30个碱基的缺失和某些位点的单点突变,并由此引起所编码的氨基酸改变。26例非鼻咽癌患者LMP1阳性扩增率为92 31%,无一例缺失。此结果表明:与广东、广西鼻咽癌高发区相比,我国北方地区鼻咽癌与非鼻咽癌患者中EB病毒LMP1基因缺失型和原型的分布有明显的地区差异。

泛素与EB病毒核抗原1融合基因的DNA免疫研究

构建了EB病毒核抗原1(EBNA1)基因的表达质粒pCI-EBNA1和泛素(ubiquitin,Ub)与EBNA1融合基因的表达质粒pCI-Ub-EBNA1。间接免疫荧光和Westernblot分析表明,两重组质粒转染HeLa细胞后均能瞬时表达。两种质粒DNA肌肉注射免疫Balb/C小鼠后,分别检测小鼠血清抗EBNA1的抗体和特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,比较单基因与融合基因DNA免疫所诱生免疫应答的强度。结果显示:二者诱生抗体的效率无明显差别,但泛素的融合使得针对EBNA1的特异性CTL反应明显增强。

MTA1基因在鼻咽癌中表达与肿瘤转移和EB病毒感染的关系

[目的]探讨EB病毒感染对MTA1在鼻咽癌中表达的影响以及MTA1表达对鼻Ⅱ因癌转移的可能作用。[方法]检 测60例不同临床分期鼻咽癌患者血VcA-IgA和DNA酶以及鼻咽癌标本MTA1表达水平。[结果]鼻咽癌患者血中VcA-IgA、 DNA酶的水平高低与MTA1基因表达无相关,其相关系数分别为0.105和0.096。不同性别和T2-T4各级中,MTA1基因表 达无明显差异(P>0.05)。而在不同N分级中,MTA1基因在第Ⅰ期和第Ⅱ期与第Ⅲ和第Ⅳ期之间有明显差异(P<0.05)。 [结论]EB病毒在鼻咽癌中的感染不会诱发或导致MTA1基因表达。MTA1基因表达在鼻咽癌的侵袭中未起作用,其也不是诱 发鼻咽癌转移的原因,但可能在鼻咽癌转移的后期起了一定的协同作用。

EB病毒BNLF-1基因的分子生物学研究进展

位于EB病毒基因组U5 TR区内的BNLF 1基因 ,其转译产物为潜伏膜蛋白 (latentmembraneprotein1 ,LMP 1 ) ,由于LMP 1可以导致细胞转化并在EB病毒致癌过程中具有重要作用 ,因而成为近年来EB病毒分子生物学及相关肿瘤如人鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、何杰金氏病等疾病病因发病学研究的热点 ,并取得了一批有重要意义的成果 ,文章从BNLF 1的基因结构及表达调控 ,LMP蛋白的结构及生化功能 ,LMP 1的生物学功能和LMP 1研究进行评述 .

青岛地区儿童淋巴瘤中EB病毒潜伏膜蛋白1基因变异及意义

目的了解青岛地区儿童淋巴瘤中EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)基因多态性。并探讨LMP1变异在儿童淋巴瘤发生中的意义。方法采用巢式PCR和DNA测序检测66例青岛地区EBV阳性儿童淋巴瘤组织中LMP1全长序列,根据其特征性突变和系统进化树,对基因变异进行分类,并与以往同一地区成人NK/T细胞淋巴瘤和健康人群中LMP1变异类型的分布进行比较。结果 66例标本完成测序,共发现3种LMP1亚型,即China 1、China 2和Med-,其构成比分别为84.8%、7.6%和6.1%,另有1例(1.5%)为China 1/China 2重组病毒株。LMP1 N端XhoⅠ位点缺失变异即XhoⅠ(-)和未缺失型XhoⅠ(+)的检出率分别为93.9%和6.1%;C端30bp缺失即del-LMP1和未缺失型wt-LMP1的检出率分别为84.8%和15.2%。儿童淋巴瘤和成人NK/T细胞淋巴瘤中LMP1各亚型的分布差异无统计学意义,但儿童淋巴瘤中China 1亚型、XhoⅠ(-)和del-LMP1的检出率高于健康人群(P均<0.05)。结论青岛地区儿童淋巴瘤中LMP1以China 1亚型、XhoⅠ(-)和del-LMP1为主,LMP1变异可能与儿童淋巴瘤的发生相关。

儿童EB病毒感染SH2D1A基因表达水平及意义

目的:研究EB病毒(EBV)感染患儿SH2D1A mRNA表达情况,探讨SH2D1A mRNA表达改变与疾病的关系及其意义。方法:选取2014年10月至2015年2月湖南省儿童医院肝病中心收治的初诊为EB病毒感染的患儿,选取同期年龄、性别与EB病毒感染组匹配的健康体检儿童为对照组。检测EB病毒感染组和对照组的SH2D1A mRNA表达水平,计算基因相对表达量,检测血生化指标。结果:EB病毒感染组共32例,其中普通传染性单核细胞增多症(普通组)20例,重症传染性单核细胞增多症(重症组)9例,慢性活动性EBV感染(慢性组)1例,EBV相关噬血淋巴组织细胞增多症(噬血组)2例;对照组10例。各组与对照组SH2D1A mRNA的相对中位表达量分别为25.78、40.14、38.72、18.27、4.65(H=10.68,P<0.05),EB病毒感染组患儿的SH2D1A mRNA表达水平显著高于对照组,重症组、慢性组SH2D1A mRNA表达水平较普通组、噬血组升高(P<0.05),但重症组与慢性组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SH2D1A mRNA表达水平与初诊时最低的纤维蛋白原、CD4+、CD4/+CD8+水平呈负相关(P均<0.05),与血清铁蛋白、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、甘油三酯、EBV-DNA水平无相关性。结论:EBV感染患儿外周血细胞SH2D1A mRNA表达水平显著升高,造成机体细胞免疫功能紊乱。

EB病毒BMRF1基因原核表达载体的构建

目的克隆EB病毒早期蛋白p54的编码基因BMRF1,构建原核表达载体,为相应蛋白的表达和应用奠定基础。方法以含EB病毒的B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增出BMRF1基因。PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆至原核表达载体pGEX-5T,用双酶切和DNA测序鉴定重组质粒。结果PCR扩增的特异性片段长度为1 233bp,以此构建的重组质粒pGEX-5T-BMRF1双酶切的片段大小与预期符合,重组克隆外源基因的测序结果与GenBank中的EB病毒BMRF1基因cDNA序列一致。结论成功构建了pGEX-5T-BMRF1原核表达载体。

EB病毒早期弥散型抗原基因片段BMRF1真核表达质粒的构建

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）是我国南方常见的一种恶性肿瘤,目前筛查鼻咽癌最特异的手段就是通过酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法检测患者血清中EB病毒早期抗原（EA）-Ig A抗体[1,2]。EA抗原是EB病毒感染细胞后早期合成的一种蛋白,可以进一步分为弥散型（D型）和局限型（R型）抗原。

EB病毒中早期表达的癌基因——BARF1

BARFI是近期发现EB病毒编码的早期癌基因。对其认识还处于起步阶段,本文从BARFI的基因结构、体外对细胞的转化、肿瘤细胞中的表达及可能的作用机制方面的研究做一介绍。

广州地区鼻咽癌EB病毒LMP1基因N端XhoI酶切位点的丢失

目的 检测广州地区鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N -末端区XhoI酶切位点的丢失 ,探讨LMP1基因变异在鼻咽癌发生发展中的作用。方法 收集中山大学肿瘤防治中心鼻咽癌新鲜活检标本 63例以及EB病毒健康携带者外周血单个核细胞 10例。采用QIAampDNAMiniKit和QIAampDNABloodMiniKit分别抽取组织和外周血单个核细胞的DNA ,应用巢式PCR扩增EB病毒LMP1基因的N -末端区 ,并用XhoI对扩增产物进行酶切。采用四色荧光末端终止法对扩增产物进行序列分析。结果 10例健康携带者外周血单个核细胞的EB病毒LMP1基因N -末端区均未见XhoI酶切位点的丢失。 63例鼻咽癌组织中有 5 0例 ( 79%)出现XhoI酶切位点的丢失 (XhoI -loss) ,4例 ( 6%)为XhoI酶切位点部分丢失 ,只有 9例 ( 14 %)未见XhoI酶切位点的丢失 (wt -XhoI)。除了XhoI酶切位点的丢失 (nt:16942 3～16942 8;GAGCTC→GATCTC)外 ,还发现 4个错义点突变。结论 广州地区EB病毒健康携带者外周血单个核细胞所携带的EB病毒LMP1基因为wt -XhoI ,而在鼻咽癌组织中主要为XhoI -loss。因此 ,我们认为EB病毒LMP1基因N -末端区XhoI酶切位点的丢失和其他的错义点突变可能是在鼻咽癌的发生发展过程中产生的。

腺病毒携带EB病毒LMP1反义基因抑制人鼻咽癌细胞的生长

目的研究EB病毒LMP1反义基因对人鼻咽癌CNE2细胞恶性表型的逆转作用。方法用反义LMP1DNA的腺病毒载体AdEasy-GFP-ALMP1转染人鼻咽癌细胞CNE2,Western-blot法检测转染前、后瘤细胞的LMP1表达;用MTT法和细胞生长曲线实验观察转染前后细胞体外生长增殖特性。结果建立反义CNE2细胞;转染后LMP1蛋白表达降低;转染后细胞活力和生长速度均有下降。结论将反义LMP1腺病毒载体导入细胞能成功抑制CNE2细胞的生长,逆转其恶性表型。本研究还为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。

重叠延伸PCR法扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因及生物信息学分析

利用重叠延伸PCR技术扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并进行了蛋白的诱导表达。通过序列测定和ORF软件分析,该融合基因含有1个1 005 bp的ORF,编码335个氨基酸。应用生物信息学方法,对该融合基因编码的蛋白ZtaN-p23从氨基酸组成、理化性质、信号肽、疏水性/亲水性、二级结构、亚细胞定位、功能域和高级结构等方面进行了预测和分析。结果表明,该蛋白的预测分子量为46.2 kD,理论等电点约为8.97,是亲水性蛋白,推测它定位于细胞质中。序列分析表明,该蛋白可能具有信号转导、转录调控、免疫应答等功能。预测的二级结构及三级结构都表明该蛋白含有较多的不规则卷曲和α-螺旋,三级结构上呈对称形状。

地塞米松对SUNE-1和B_(95-8)细胞株中EB病毒BHRF1基因转录水平的影响

目的：以Ｋ５６２细胞为阴性对照，观察ＳＵＮＥ－１和Ｂ９５８两种含ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因的肿瘤细胞株在２×１０６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）作用１８ｈ后，细胞内ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因转录水平的改变。方法：细胞ＲＮＡ的提取、ＲＮＡ的点杂交（Ｄｏｔｂｌｏｔ）及反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）。结果：上述两种肿瘤细胞在２×１０６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松作用１８ｈ等诱导细胞凋亡的条件下，细胞内ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因的转录水平（ｍＲＮＡ）明显提高。结论：本结果初步显示ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因的转录与宿主细胞抵抗凋亡的关系密切。

EB病毒BHRF_1基因聚合酶链反应扩增及其鉴定

目的：ＢＨＲＦ１的研究对于认识ＥＢＶ有关肿瘤和其它疾病的发病机理、寻找预防、治疗途径有十分重要的意义。方法：以Ｂ９５８细胞ＤＮＡ为模板，设计一对引物，用ＰＣＲ方法扩增ＢＨＲＦ１基因，用目的基因内的两个限制性内切酶位点进行酶切鉴定。结果：扩增产物长５９２ｂｐ，与预期结果一致，两个酶所切下的四个片段长度也与理想值相符。结论：本研究首次采用ＰＣＲ方法，成功地获得完整的ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１基因，从而为该基因的进一步研究和应用奠定基础。

EB病毒BN LF-1基因在恶性血液病的表达及临床意义

目的 探讨 EB病毒 BN L F- 1在恶性淋巴瘤及急性白血病的表达及其临床意义。方法 采用Amplisensor荧光定量 PCR技术 ,检测恶性淋巴瘤及急性白血病患者血液和骨髓 EB病毒 BN L F- 1基因片段 ,同时用免疫酶法测定血清中 EB病毒 Vc A- Ig A抗体滴度。结果 BN L F- 1基因在恶性淋巴瘤表达阳性率为 6 8.97%(40 / 5 8) ,急淋阳性率为 2 5 % (9/ 36 ) ,急非淋为 5 .4 1% (2 / 37)。恶性淋巴瘤 BN L F- 1表达明显高于急淋、急非淋及对照组 (P=0 .0 0 1) ,急淋明显高于急非淋及对照组 (P=0 .0 19) ,急非淋与对照无显著性差异 (P=0 .4 93)。在恶性淋巴瘤 BN L F- 1含量比急性白血病高 (P<0 .0 0 1) ;BN L F- 1含量越高 ,其患者生存期越短 (r=0 .4 2 8)。结论 BNL F- 1基因可能是 EB V的致癌基因 ,对恶性淋巴瘤的发病起重要作用 ,急性淋巴细胞性白血病次之 ;BN L F- 1在 T及 B淋巴细胞均表达。其含量与患者生存期呈负相关关系。