EB病毒Rta蛋白抗体IgG联合两种抗体在鼻咽癌诊断和筛查中的应用价值

目的探讨EB病毒Rta蛋白抗体IgG(Rta/IgG)抗体单项和联合检测VCA-IgA、EA-IgA,在鼻咽癌血清学诊断及筛查的应用价值。方法收集449例未经治疗的鼻咽癌患者血清,选择有相似症状的头颈部其他病例82例及1 292例健康体检作为对照,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对以上血清检测EB病毒Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA 3种抗体,评价Rta-IgG抗体单项和联合VCA-IgA、EA-IgA,在鼻咽癌的血清学诊断和筛查的价值。结果 3种EB抗体对鼻咽癌的诊断敏感性和特异性分别为:Rta-IgG:74.6%、92.68%,VCA-IgA:88.4%、78.04%,EA-IgA:46.77%、92.68%,平行联合VCA-IgA和Rta-IgG敏感性为89.97%,高于单项Rta-IgG。结论就单一指标而言,鼻咽癌筛查应首选VCA-IgA,平行联合Rta-IgG和VCA-IgA可更大范围地反映EB病毒溶解感染期立即早期和晚期的抗原表达,对鼻咽癌的血清学诊断具有一定的互补作用,是鼻咽癌血清学诊断的较合适且经济的组合。

论EB病毒蛋白Rta在鼻咽癌进展中的潜在研究价值

鼻咽癌在广西地区高发,发病部位隐蔽且发病早期没有明显症状,因此常常被误诊、漏诊等,近年来多项研究发现早期诊断可以使鼻咽癌生存率提高,因此早筛和早诊就成为了鼻咽癌治疗过程中的关键环节。EB病毒裂解早期,基因BRLF1的编码产物被称为Rta 蛋白,这是EB病毒从潜伏期转向裂解期的关键调控因子之一,能引起早期基因的裂解表达,最终引发EB病毒裂解继而感染。故在鼻咽癌的辅助诊断及相应的临床管理具有潜在研究价值。

鼻咽癌患者血清EB病毒Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体与其临床表现的关系

目的探究鼻咽癌患者血清EB病毒(EBV)Rta蛋白免疫球蛋白G抗体(Rta-IgG)、壳抗原免疫球蛋白A抗体(VCA-IgA)、早期抗原免疫球蛋白A抗体(EA-IgA)与其临床表现的关系。方法选取2016年3月-2018年10月我院经病理活检证实的鼻咽癌患者164例为鼻咽癌组,同期就诊的鼻炎疾病(非鼻咽癌)患者61例为鼻咽疾病组、健康体检者72例为健康对照组。比较3组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率差异,并分析血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体与鼻咽癌患者临床表现的关系。结果鼻咽癌组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率显著高于鼻咽疾病组及健康对照组(P<0.05),鼻咽疾病组与健康对照组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同性别、年龄及T分期鼻咽癌患者血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同N分期、不同M分期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床分期Ⅰ期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平明显低于临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期者(P<0.05),但临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。鼻咽癌患者血清VCA-IgA、EA-IgA抗体水平均随N分期、M分期及临床分期的升高而升高(P<0.05)。结论血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体水平与鼻咽癌临床表现有一定相关性,可应用于鼻咽癌的诊疗。

EB病毒GST-Rta融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的表达和纯化EB病毒的重组融合蛋白谷胱氨肽S转移酶(GST)-Rta185和GST-Rta150,并制备特异性多克隆抗体。方法质粒表达载体pGEX-R185I、pGEX-R150I和pGEX-5X-3分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化后的GST-R185、GST-R150和GST蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清。结果在细菌裂解液中检测到高表达量的融合蛋白,经GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-Rta融合蛋白。应用Westernblot和ELISA方法检测证实,用纯化的GST-Rta蛋白免疫家兔得到了特异性的多克隆抗体。结论通过上述方法制备出来的融合蛋白纯度较高,免疫家兔获得的多克隆抗体具有良好的特异性,为研究EB病毒Rta蛋白及与EB病毒相关疾病的诊断和治疗提供了重要的条件。

EB病毒BRLF1基因及EB病毒Rta/IgG抗体在鼻咽癌中表达的临床意义

目的探讨EB病毒BRLF1基因(EBV-BRLF1)表达量及血清EB病毒Rta/IgG(EBV-Rta/IgG)抗体浓度在鼻咽癌(NPC)早期诊断、临床分期中的意义。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应法测量89例NPC组织的EBV-BRLF1基因表达量,采用EBV-Rta/IgG定量抗体试剂盒检测228例血清的Rta/IgG抗体浓度,分析它们与NPC早期诊断、临床分期的相关性。228例血清包括NPC组89例、鼻咽部慢性黏膜炎病例(高危组)19例和同期健康人群120例。结果 89例NPC组血清的EBV-Rta/IgG抗体浓度为(111.81±76.77)U/mL,灵敏度为75.3%(67/89),特异度为94.2%(131/139),诊断符合率为86.8%(198/228);19例高危组血清的EBV-Rta/IgG抗体浓度为(15.14±33.04)U/mL,120例健康体检组血清的EBV-Rta/IgG抗体浓度为(6.63±11.26)U/mL;各组间比较浓度差异具有统计学意义(P<0.05)。EBV-BRLF1基因在NPC肿瘤组织中的表达率为63.51%(47/74),中位表达量为8.53。NPC组中EBV-BRLF1基因表达量与N分期、M分期及临床分期无关(P>0.05),与T分期差异有关(P=0.061),接近临界范围。血清EBV-Rta/IgG抗体浓度与N分期、M分期及临床分期无关(P>0.05)。在T分期组间比较中发现,T3期呈一定上升趋势,T2与T3组间差异具有统计学意义(P=0.048)。结论 EBV-BRLF1基因在NPC组织中高度表达;EBV-Rta/IgG定量抗体试剂盒检测可以作为早期筛查NPC的临床指标之一;EBV-BRLF1基因表达量及血清EBV-Rta/IgG抗体浓度与NPC的N分期、M分期及临床分期无关,与T分期局部组织浸润呈一定相关性。

卫生部增补结核感染T细胞检测(免疫斑点法)和EB病毒Rta蛋白抗体IgG检测两项临床检验项目

为加强医疗机构临床实验室管理，提高临床检验水平，保障医疗质量和医疗安全，卫生部于2007年印发了《医疗机构临床检验项目目录》（卫医政发[2007]180号）。根据临床工作实际需求，经专家论证，

EB病毒GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备EB病毒GST-Rta150融合蛋白的单克隆抗体并鉴定其特性。方法取经GST-Rta150融合蛋白免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,接种杂交瘤细胞至小鼠腹腔,收集腹水并纯化。制备的单克隆抗体以琼脂双向扩散法鉴定抗体类及亚类。间接ELISA法测定抗体的效价,Western-blot检测抗体的特异性。结果获得一株稳定分泌抗GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A9,细胞培养上清效价为10-3,腹水效价为10-5,纯化的抗体效价为10-6。经鉴定GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的亚类为IgG1。Western-blot结果显示此单克隆抗体能特异结合GST-Rta150融合蛋白。将杂交瘤细胞株在液氮中冻存3个月后复苏,其分泌的单克隆抗体效价不变。结论通过上述方法制备出来的单克隆抗体特异性强,稳定性好,为研究EB病毒立即早期基因产物Rta蛋白以及EB病毒相关疾病的诊断和治疗奠定了基础。

EB病毒感染后出现伴胶质纤维酸性蛋白抗体阳性脊髓炎一例

1病例报告患者男,39岁。因“头痛1周”于2022-3-12入院。1周前无明显诱因出现右侧后枕部疼痛,呈放电样,向同侧颞顶部放射,伴发热,最高体温38.0℃,无恶心、呕吐,无复视,无肢体麻木无力,无抽搐及意识障碍,无皮疹。曾外院就诊,查头颅CT未见异常,考虑“枕神经痛”,给予口服“普瑞巴林、曲马朵”止痛,头痛进行性加重。遂就诊作者医院,以“头痛原因待查”收入住院。既往有高尿酸血症病史5年,未治疗。近1年有3次新冠病毒疫苗接种史。入院查体:体温36.8℃,心率90次/min,呼吸20次/min,血压120/70 mmHg(1mmHg=0.133 kPa)。

卫生部关于增补结核感染T细胞检测(免疫斑点法)和EB病毒Rta蛋白抗体IgG检测两项临床检验项目的通知

各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局：为加强医疗机构临床实验室管理，提高临床检验水平，保障医疗质量和医疗安全，我部于2007年印发了《医疗机构临床检验项目目录》（卫医政发[2007]180号）。根据临床工作实际需求，经专家论证，决定增补结核感染T细胞检测（免疫斑点法）和EB病毒Rta蛋白抗体IgG检测两项临床检验项目（见附件），纳入《医疗机构临床检验项目目录》，请各医疗机构遵照执行。

抗EB病毒衣壳抗原IgG抗体亲合力诊断儿童传染性单核细胞增多症的价值及患儿免疫状态的变化

目的探讨抗EB病毒衣壳抗原(EBV-CA)IgG抗体亲合力对EB病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)的诊断价值及患儿免疫状态的变化。方法选取行抗EBV-CAIgG抗体亲合力及抗EBV-CAIgM抗体检测的儿童5882例,其中IM500例、非IM5382例,检测抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、EBVDNA载量、外周血异型淋巴细胞(简称异淋)比例和外周血淋巴细胞亚群。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、异淋比例和EBVDNA单项及联合检测诊断IM的效能,并观察IM患儿的免疫状态。另选取临床诊断为IM并检测EBVDNA和淋巴细胞亚群的患儿502例,探讨EBVDNA阳性及阴性IM患儿的细胞免疫状况。结果在5882例儿童中,抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、EBVDNA和异淋比例4项指标任意1项阳性的患儿为1031例(17.53%),其中IM的发生率最高(38.1%)。ROC曲线分析结果显示,抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、异淋比例和EBVDNA诊断IM的曲线下面积(AUC)分别为0.883、0.729、0.788和0.664,4项指标联合检测的AUC为0.847。依据年龄将1031例患儿分为婴儿组(<1岁)、幼儿组(1~3岁)、学龄前期组(4~6岁)和学龄期组(7~17岁)。除婴儿组外,其他3组中的IM患儿CD3-CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3-CD19+B细胞比例、CD3+CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+比值显著低于非IM患儿(P<0.01),CD3+T细胞比例、CD3+CD8+T细胞比例显著高于非IM患儿(P<0.01)。婴儿组中的IM患儿CD3-CD19+B细胞比例显著低于非IM患儿(P<0.01),CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例显著高于非IM患儿(P<0.01),而CD3-CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3+CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+比值IM患儿与非IM患儿之间差异无统计学意义(P>0.05)。EBVDNA阳性IM患儿与阴性IM患儿比较,上述变化更明显。结论抗EBV-CAIgG抗体亲合力对IM的诊断价值优于异淋比例、抗EBV-CAIgM抗体和EBVDNA。IM患儿细胞免疫功能明显紊乱,EBVDNA阳性的IM患儿紊乱程度更严重。

EB病毒Rta-IgG定量检测试剂盒分析性能评估及其在鼻咽癌血清诊断学中的应用

目的探讨EB病毒Rta蛋白IgG抗体在鼻咽癌诊断中的临床价值。方法采用间接ELISA法检测612例临床样本中EB病毒Rta-IgG含量,同时对试剂盒的分析性能进行评估。结果 267例鼻咽癌样本的EB病毒Rta-IgG抗体浓度为(77.64±3.205)U/ml,检测灵敏度为94.7%(214/226),特异度为86.3%(333/386),正确率为89.4%(547/612);255例健康体检血样抗体浓度为(8.31±0.745)U/ml;20例肝癌样本抗体浓度为(7.14±1.111)U/ml;30例肝炎样本抗体浓度为(7.40±0.581)U/ml;20例自身免疫病样本抗体浓度为(13.97±6.943)U/ml;20例鼻咽息肉样本抗体浓度为(12.58±6.197)U/ml。各组EB病毒Rta-IgG含量比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EB病毒Rta-IgG定量检测试剂盒用于鼻咽癌诊断具有较高的临床价值,为进一步研究鼻咽癌患者治疗效果与患者血清中EB病毒Rta-IgG的含量的关系奠定了基础。

EB病毒蛋白对抗角蛋白自身抗体产生的影响

目的 研究EB病毒 (EBV)蛋白对B细胞产生抗角蛋白自身抗体 (AKautoAb)的影响。方法 用紫外线 (UV)灭活和热处理经EBV刺激培养的人脐带血B细胞 ,因ELISA法检测培养上清中AKautoAbIgG和IgM的水平。结果 UV灭活组IgG 18天以后各时间点有显著变化 (P <0 .0 5) ,IgM 2 6天与其它时间点有显著差异 (P <0 .0 5) ;热处理组IgG和IgM无明显变化 (P >0 .0 5)。结论 UV灭活EBV可诱导抗体的产生 ,而热处理EBV却不能 ,提示EBV蛋白成分可能是诱导抗体产生因素 。

人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性

目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性。结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性。结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子。

EB病毒IgG抗体在预测心房颤动发生及射频消融术后复发中的作用

目的：观察心房颤动患者与窦性心律者,心房颤动射频消融术后心房颤动复发及未复发患者中,血清中EB病毒衣壳抗原Ig G抗体（EBV-VCA Ig G抗体）水平,以评估其在预测心房颤动发生及射频消融术后复发的作用。方法：连续入选中国心房颤动注册研究（CAFR）中孤立性心房颤动患者103例,并将流行病调查研究中4 209窦性心律者作为对照组对象来源,经匹配后分别为48例进行分析,比较两组临床特点及EBV-VCA Ig G抗体水平;整体孤立性心房颤动患者与匹配后心房颤动患者根据射频消融术后是否复发分别分为两组,比较两组基线资料及EBV-VCA Ig G抗体水平。结果：比较发现心房颤动组患者组EBV-VCA Ig G抗体较对照组高[（75.91±14.92）vs.（51.08±11.89）μg/m L,P〈0.001],经Logistic回归分析提示EBV-VCA Ig G抗体水平与心房颤动发生存在相关性（OR=1.140,95%CI：1.078-1.205,P〈0.001）;当EBV-VCA Ig G抗体截断值为68.35μg/m L时的预测敏感度为77.1%,特异度为99.0%（95%CI：0.835-0.965,P〈0.001）。但经多因素Cox回归分析未发现EBV-VCA Ig G抗体水平为心房颤动射频消融术后复发的独立危险因素。结论：本研究证实EBV-VCA Ig G抗体水平可能参与心房颤动的发生机制,且对心房颤动的发病具有较好的预测价值。

广东佛山地区部分体检人群EB病毒Rta/IgG抗体筛查结果分析

初步统计分析广东佛山地区体检人员鼻咽癌生物标志物EB病毒Rta/IgG抗体的阳性率,分析阳性率与性别、年龄之间的关系,并确定该检测方法的筛查效率。方法:酶联免疫吸附法检测EB病毒Rta/IgG抗体,部分血清学结果阳性者进行鼻内镜活组织病理检查。结果:2019年1月-12月在佛山市第一人民医院体检中心EB病毒Rta/IgG抗体体检者共计20598例,共检查出771例阳性,阳性率为3.74%;其中男性403例,阳性率为3.55%;女性368例,阳性率为3.98%,两者差异不显著(p>0.5,χ2=0.112);不同年龄组检出的阳性率不同,年龄越大,阳性率越高,差异有统计学意义(χ2 =56.569, p<0.01)。进一步对229例EB病毒Rta/IgG抗体阳性受检者行鼻内镜活组织病理检查,结果有8例阳性病例确诊为鼻咽癌患者。结论:Rta/IgG抗体在佛山地区体检人群中的阳性率与性别无关,但阳性率随着年龄的增长而增多。Rta/IgG在佛山地区鼻咽癌健康体检中有重要价值。

EB病毒蛋白诱导IgG和IgM产生的作用

目的:检测热灭活或紫外线(UV)灭活的EB病毒(EBV)刺激培养的人脐带血B细胞产生IgG和IgM的效应。方法:常规分离人脐带血单个核细胞(UBMC),以L-亮氨酸甲酯去除法,去除单核细胞、NK细胞和细胞毒性T细胞,以2-氨乙基硫脲溴化物(AET)处理绵羊红细胞(SRBC)的花环形成分离法,去除T细胞以获得纯化的B细胞。分别用UV和热灭活的EBV刺激培养的B细胞后,用夹心ELISA法检测培养上清中IgG 和IgM的产生。结果:以UV灭活的EBV刺激培养B细胞后18 d起,IgG和IgM的产生具有意义(P<0.05);而热灭活的EBV刺激后,各时间点均无显著差异(P>0.05)。结论:UV灭活EBV具有诱导IgG和IgM产生的作用,但有明显的时效性,提示EBV诱导IgG和IgM产生,可能是通过病毒的蛋白成分实现的,为进一步验证EBV功能蛋白诱导天然自身抗体(NAA)产生中的作用奠定了基础。

EB病毒膜蛋白gp350对培养CD5^+B细胞产生天然自身抗体的影响

目的 :探讨EB病毒膜表面糖蛋白gp35 0是否刺激培养的CD5 + B细胞产生具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白 .方法 :无菌采集新生儿脐带血 ,RosetteSepTM法分离总B细胞 ,免疫磁珠分离CD5 + B细胞 ,将分离得到的总B ,CD5 + B和CD5 -B 3组细胞分别用EB病毒、紫外线照射灭活的EB病毒(UV EBV)、gp35 0及TPA刺激 ,于培养的 1 0～ 30d间 ,每 4d分别留取上清 ,ELISA法检测培养上清中的IgG ,IgM及抗角蛋白自身抗体 (AKautoAb)IgG ,IgM ,阳性对照为健康成人血清 ,阴性对照为未加刺激的培养细胞上清 .结果 :EB病毒感染的3组细胞于培养的第 7日发生转化 ,表现为细胞成团生长 ,体积增大 ,不断增殖 ,1 4d以后的培养上清中IgM ,AKautoAbIgMA值较对照组显著升高 (P <0 .0 1 ) ;紫外线照射灭活的EB病毒、gp35 0刺激的细胞存活 1 5d ,1 4dCD5 + B细胞培养上清中IgMA值高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;TPA及未刺激的细胞存活 7d ,培养上清中未检测到免疫球蛋白 .结论 :EB病毒可能通过其膜表面糖蛋白gp35 0刺激培养的CD5 +

EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)C端(187～386)的原核表达蛋白及其多克隆抗体并检验其生物学特性。方法:选择LMP1C端的基因并进行原核密码子优化,全基因合成pET21a(+)/EBVLMP1C端重组质粒,并转入E.coliBL21(DE3)感受态细菌进行诱导表达重组蛋白,利用His标签提取纯化重组蛋白并经SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定。将纯化的LMP1C端重组蛋白免疫日本大耳白兔,获得多克隆抗体,分别采用ELISA、Westernblot及免疫荧光方法对兔多克隆抗体进行分析。结果:EBVLMP1C端(187～386)重组蛋白可经原核表达系统表达;通过免疫兔获得了特异性的多克隆Ig G抗体;制备的兔多克隆抗体可特异性结合并识别LMP1C端蛋白。结论:EBVLMP1C端重组蛋白免疫原性较强,制备的兔多克隆抗体效价高、特异性强。

EB病毒重组Rta蛋白在胃癌组织中表达的研究

目的研究EB病毒Rta蛋白在胃癌组织中的表达情况,研究裂解期EB病毒与胃癌的关系。方法采用免疫组织化学方法,应用Rta多克隆抗体检测30例手术切除胃癌组织及其相应癌旁组织中EB病毒BRLF1基因产物Rta蛋白的表达水平与分布情况。结果30例胃癌组织中发现6例R ta蛋白表达阳性,阳性率为20%,相应癌旁组织均为阴性,p=0.031,有显著性差异;Rta蛋白表达阳性率男性多于女性,p=0.024;与病人年龄、病理组织学类型及发生部位之间无明显关系,p=0.196-0.896。结论EB病毒的裂解感染状态与胃癌的发生具有一定相关性,裂解感染期EBV可能在胃癌的发病中起了一定作用。