四嗪二甲酰胺诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡及作用机制的研究

目的研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡及分子机制。方法将不同浓度的ZGDHu-1与EBC-1细胞在体外培养,用5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA法观察ZGDHu-1抑制EBC-细胞增殖作用;用Annexin-V/PI双标记和ELISA法测定凋亡细胞核小体等技术观察ZGDHu-1诱导EBC-细胞凋亡率。用流式细胞术检测经ZGDHu-1作用后EBC-1细胞P38MAPK和Stat3磷酸化表达的变化,同时用Western blot法检测bcl-2、bax、P53、Fas、Caspase-3等蛋白质的变化。结果 ZGDHu-1能抑制EBC-1细胞增殖,呈现作用时间和剂量的量效关系,24h、48h、72h后的IC50分别为(295±25)ng/ml,(112±8)ng/ml和(23±2)ng/ml。EBC-1细胞与ZGDHu-1作用后,Annexin-V+/PI-表达升高,细胞内核小体含量显著增加,二者均呈现剂量依赖性。EBC-1细胞与50ng/ml、200ng/ml、500ng/ml等浓度的ZGDHu-1培养48h后,磷酸化P38MAPK的表达率为67.4%、88.2%和91.1%,对照组为10.6%;而磷酸化Stat3表达率分别为56.5%、43.6%和34.6%,对照组为89.1%。Western blot法检测发现bax、P53和Fas蛋白的表达随药物作用浓度的升高而显著上调,bcl-2的表达没有变化,Caspase-3蛋白的表达则明显下调。结论 ZGDHu-1能显著抑制EBC-1细胞增殖,并诱导其细胞凋亡。Fas介导的线粒体的途径可能是ZG-DHu-1诱导EBC-1细胞凋亡通路之一;P38MAPK和Stat3激活也参与了ZGDHu-1诱导EBC-1细胞的凋亡。

E7050对肺癌细胞EBC-1抗增殖作用及其机制的研究

目的研究E7050对人肺癌细胞系EBC-1的生长抑制作用及分子机制。方法人肺癌EBC-1细胞经不同剂量E7050作用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定E7050对肺癌细胞系EBC-1的增殖抑制率;蛋白印迹法观察相关蛋白的表达;流式细胞术及Hoechst33342染色法检测E7050对EBC-1细胞的凋亡诱导作用。结果 E7050可有效抑制肺癌细胞的生长,且抑制率具有剂量效应依赖性。E7050还可以通过诱导EBC-1细胞凋亡抑制其增殖;同时,E7050可明显下调EBC-1细胞p-Met的表达,而c-Met基因没有变化。结论E7050可以通过诱导凋亡和下调p-Met表达体外抑制EBC-1肺癌细胞增殖。

四嗪二甲酰胺诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡的作用及其机制

目的 研究四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡的作用及分子机制.方法 将不同浓度的ZGDHu-1与EBC-1细胞在体外培养,采用5′-溴-2′脱氧尿苷（BrdU）-酶联免疫吸附法（ELISA）观察ZGDHu-1对EBC-1细胞的增殖抑制作用 采用Annexin V/PI双标记染色与ELISA法测定凋亡细胞核小体等技术检测ZGDHu-1诱导EBC-1细胞凋亡的作用 采用流式细胞术检测经ZGDHu-1作用后EBC-1细胞磷酸化p38MAPK和Stat3表达的变化 采用Western blot法检测Bcl-2、Bax、Fas、p53、caspase-3蛋白表达的变化.结果 ZGDHu-1能抑制EBC-1细胞增殖,并呈现作时间和剂量依赖性,作用24、48和72 h后的IC50分别为（295±25）ng/ml、（112±8）ng/ml和（23±2）ng/ml.经ZGDHu-1作用后,EBC-1细胞中的Annexin V＋/PI-细胞升高,细胞内核小体含量显著增加,二者均呈现剂量依赖性.EBC-1细胞与50、200和500 ng/ml的ZGDHu-1培养48 h后,磷酸化p38MAPK的表达率分别为67.4%、88.2%和91.1%,空白对照组为10.6% 而磷酸化Stat3的表达率分别为56.5%、43.6%和34.6%,空白对照组为89.1%.Western blot检测结果显示,随药物作用浓度的升高,Bax、Fas和p53蛋白的表达显著上调,Bcl-2的表达没有变化,caspase-3蛋白的表达则明显下调.结论 ZGDHu-1能显著抑制EBC-1细胞增殖,并诱导其凋亡.Fas介导的线粒体途径可能是ZGDHu-1诱导EBC-1细胞凋亡的通路之一,p38MAPK和Stat3激活也参与了ZGDHu-1诱导EBC-1细胞凋亡的过程.

Hsp90抑制剂FS-108抑制癌基因依赖肿瘤细胞增殖及运动的机制研究

目的探讨Hsp90抑制剂FS-108抑制癌基因依赖的肿瘤细胞EBC-1和A375的增殖及运动能力的作用机制。方法采用磺酰罗丹明B法检测FS-108对细胞增殖的影响;采用蛋白免疫印迹法检测FS-108对Hsp90客户蛋白、周期调控蛋白及凋亡调控蛋白的变化;采用流式细胞术检测FS-108作用后细胞周期分布及凋亡情况;采用Transwell小室方法检测FS-108对细胞运动能力的影响。结果 FS-108对EBC-1和A375均有明显的增殖抑制作用,IC_(50)分别为25.53 nmol·L^(-1)和30.02 nmol·L^(-1)。FS-108能有效降解肿瘤细胞中的客户蛋白c-Met和B-Raf并进而抑制下游AKT及ERK信号通路。FS-108能诱导细胞产生G_2/M期阻滞及凋亡。同时,FS-108还能明显抑制EBC-1和A375细胞的运动能力。结论 Hsp90抑制剂FS-108主要通过诱导肿瘤细胞产生G_2/M期阻滞和细胞凋亡,发挥其抑制增殖的细胞生物学效应,同时,FS-108也具有一定抗转移潜能。

非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液ET-1测定的意义

目的测定非小细胞肺癌(NSCLC)患者呼出气冷凝液(EBC)中内皮素-1(ET-1)并研究其临床意义。方法按既定标准收集41例NSCLC病例(NSCLC组)及45例正常对照(正常对照组)的EBC并同时抽血分离血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其ET-1含量。结果 NSCLC组EBC和血清的ET-1[(10.35±0.23)pg/mL、(79.62±0.25)pg/mL]显著高于正常对照组[(8.30±0.16)pg/mL、(68.21±0.35)pg/mL],差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC腺癌组EBC的ET-1为(11.05±0.31)pg/mL,鳞癌组为(9.61±0.25)pg/mL。随TNM分期,NSCLC组Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期EBC的ET-1分别为(8.61±0.18)、(9.98±0.21)、(11.53±0.36)pg/mL,Ⅱ期与Ⅳ期有统计学差异(P<0.05)。检测EBC中ET-1作为NSCLC诊断方法的敏感性和特异性为95.12%和53.33%。结论测定EBC中ET-1有助于NSCLC的诊断和评估预后。

ARDS患者呼出气冷凝液和血清中NO、ET-1和8-isoPG检测的临床意义

目的研究急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者呼出气冷凝液(EBC)和血清中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和8-异前列腺素(8-isoPG)的浓度变化及其临床意义。方法选取2012年9月至2014年7月在南通大学第二附属医院重症监护病房(ICU)中行机械通气的ARDS 52例患者为观察组,收集患者入院第1天及治疗后第7天呼出气冷凝液及血清标本。健康对照组为30例健康体检者,收集其EBC及血清标本。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组受检者EBC和血清中的NO、ET-1和8-isoPG浓度。结果观察组患者EBC中NO、ET-1和8-isoPG水平高于对照组[(7.33±2.21)μmol/L vs(2.37±0.79)μmol/L、(46.02±10.39)μmol/L vs(10.08±4.27)μmol/L、(55.87±13.78)pg/m L vs(21.86±9.24)pg/m L,P<0.05];血清中NO、ET-1和8-isoPG水平高于对照组[(122.82±64.88)μmol/L vs(22.42±6.56)μmol/L、(178.82±55.21)μmol/L vs(97.32±39.74)μmol/L、(241.94±43.98)pg/m L vs(122.09±36.62)pg/m L,P<0.05];治疗后观察组患者EBC中NO、ET-1和8-isoPG水平均较治疗前下降[(6.32±1.61)μmol/L vs(7.33±2.21)μmol/L、(32.49±10.55)μmol/L vs(46.02±10.39)μmol/L、(36.74±11.41)pg/m L vs(55.87±13.78)pg/m L,P<0.05];血清中ET-1和8-isoPG水平低于治疗前[(158.31±55.79)μmol/L vs(178.82±55.21)μmol/L、(170.20±53.37)pg/m L vs(241.94±43.98)pg/m L,P<0.05]。结论 EBC和血清中NO、ET-1和8-isoPG浓度变化可反映ARDS患者肺部炎症反应及肺损伤严重程度;EBC反映炎症反应较血清更灵敏。

胸腺五肽联合化疗治疗肺癌患者效果及对血清、呼气冷凝液ET-1和血清T淋巴细胞亚群水平的影响

目的观察胸腺五肽联合化疗治疗肺癌的临床效果及对ET-1、T淋巴细胞亚群水平的影响。方法选取2012年10月—2015年10月内蒙古自治区人民医院肿瘤内科收治的肺癌患者116例作为研究对象,按随机数字表法分为观察组58例和对照组58例。2组患者在化疗前给予止吐、预防静脉炎及水化利尿等常规治疗,小细胞肺癌采用EP化疗方案,非小细胞肺癌采用TP化疗方案。观察组在对照组化疗基础上联合应用胸腺五肽10 mg肌内注射,1次/d。疗程均为15d,共4个疗程。观察2组患者的临床效果、化疗前后呼气冷凝液及血清ET-1,血清ALB、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+及NK的水平变化情况,采用EORTC QLQ-C30生存质量问卷调查表进行评分,并记录消化道不良反应发生情况。结果化疗后观察组总有效率明显高于对照组(63.8%vs.56.9%,χ~2=4.772,P=0.029),呼气冷凝液及血清ET-1水平低于对照组,血清ALB、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+及NK水平、生存质量评分均显著高于对照组(t=18.193、15.405、5.031、5.676、2.532、4.901、7.577,P=0.000、0.000、0.000、0.000、0.006、0.000、0.000);观察组消化道反应发生率为15.5%,显著低于对照组的39.6%(χ~2=8.458,P=0.004)。结论胸腺五肽联合化疗治疗肺癌疗效确切,可降低呼气冷凝液及血清ET-1水平,抑制肿瘤转移程度,提高机体免疫功能,改善患者的生存质量。

核型BAG-1在早期乳腺癌的表达及其意义

目的探讨核型BAG-1在早期乳腺癌组织中的表达与传统预后因素如临床病理特征、ER、PR、HER2的关系及其意义。方法用免疫组化二步法检测76例有完整随访资料的早期乳腺癌患者乳腺癌组织中核型BAG-1、ER、PR及HER2的蛋白表达,并进行统计学分析。结果核型BAG-1在早期乳腺癌组织中的阳性率为14.47%。核型BAG-1表达与患者的年龄、绝经状态、肿瘤的病理类型及HER2的蛋白表达无关(P>0.05),与ER、PR蛋白表达相关(P<0.05)。单因素分析显示核型BAG-1、ER、HER2与预后相关,多因素分析显示只有核型BAG-1表达与预后相关。结论核型BAG-1与ER、PR相关,可能作为早期乳腺癌预后判断的指标之一。

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病急性加重期老年患者免疫功能及CCL18,CC16,IL-8和sICAM-1的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation period of COPD,AECOPD)患者肺功能、细胞和体液免疫功能,细胞趋化因子18(chemoattractant cytokine18,CCL18),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8),Clara细胞蛋白(Clara cell protein,CC16)和可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecular-1,s ICAM-1)的影响。方法:选取符合纳入标准的老年AECOPD患者120例,分为治疗组与对照组,每组60例。两组均在常规治疗的基础上,治疗组给予二陈汤加味,每日2次,疗程14 d。14 d后评价两组患者临床疗效,检测肺功能、免疫球蛋白、外周血淋巴细胞亚群,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定患者血浆和呼气冷凝液(exhale breath condensat,EBC)中CCL18,CC16,IL-8,s ICAM-1浓度。结果:与对照组治疗后比较,治疗组总有效率高于对照组(P<0.05);治疗组1 s用力呼气容积(FEV_1),1 s用力呼气量/用力肺活量(FVC)均增大(P<0.01);炎细胞总数、中性粒细胞数、单核细胞和淋巴细胞均减少(P<0.05)。与本组治疗前比较,Ig G,Ig A,Ig M无明显差异;CD3^+,CD4^+,CD4^+/CD8^+均增加,CD8^+降低(P<0.05);血浆CCL18,CC16,IL-8,s ICAM-1均降低(P<0.05),EBC中CCL18,CC16均降低(P<0.05)。结论:二陈汤加味可调节T淋巴细胞亚群功能,增强细胞免疫,降低老年AECOPD患者血浆,EBC中CCL18,CC16,IL-8,s ICAM-1水平,对老年AECOPD有一定的抗炎作用。