吴茱萸碱部分通过人白介素1所介导的途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人黑色素瘤A375S2细胞死亡的作用机制及其与细胞因子人白介素1(interleukin1,IL1)信号转导途径之间的关系。方法MTT检测法,DNA凝胶电泳法及Westernblot法。结果IL1受体拮抗因子(IL1receptorantagonist,IL1ra)在24h时能够部分抑制吴茱萸碱诱导的A375S2细胞死亡。吴茱萸碱在诱导A375S2细胞死亡的过程中,Fas配体(Fasligand,FasL)的蛋白表达量升高,激活其下游的caspase8和caspase3,进而引起DNA的损伤并激活p53蛋白,同时Bax/Bcl2的蛋白表达比例被上调。在经过IL1ra预处理后,这些变化均被部分的抑制或逆转。结论吴茱萸碱诱导A375S2细胞死亡的作用是部分通过IL1介导的信号转导途径而实现的。

人白细胞介素1β通过caspase途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡

目的 :对interleukin - 1β(IL - 1β)诱导人黑色素瘤A375 -S2细胞凋亡的信号转导途径进行研究。 方法 :使用倒置显微镜观察细胞形态学变化。通过MTT法测定IL - 1β对A375 -S2细胞的抑制作用以及细胞内半胱氨酸蛋白酶 (caspases)与这种作用的关系。利用乳酸脱氢酶 (LDH)测定法对IL - 1β作用后细胞的损伤情况进行分析。琼脂糖凝胶电泳法检测IL - 1β对细胞DNA降解的影响。 结果 :IL - 1β对A375 -S2细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性 ,在 10 -9mol/L作用 72h时达到 90 %以上。caspase- 1、- 3、- 8、- 9和caspase - 10的抑制剂能够部分抑制IL -1β早期诱导的细胞凋亡。LDH活力测定显示 ,在IL - 1β诱导的细胞死亡过程中 ,凋亡占主导地位 ,并呈现剂量和时间依赖性。细胞经过 10 -11mol/LIL - 1β处理 72h后 ,出现凋亡典型的DNA梯状条带 ,与上述结果一致。 结论 :IL -1β能够诱导人黑色素瘤A375 -S2细胞凋亡 。

miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响。方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱。利用lipofectamine 2000转染HEC-1-B细胞。实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达。CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变。流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况。结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达。转染效率达73.43%。转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P<0.05)。实验组较NC组生长明显受抑(P<0.05)。实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P<0.05)。结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点。

miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用

目的:探讨微小RNA-375(miR-375)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用。方法:人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为miR-375 inhibitor组、miR-375 inhibitor NC组、miR-375 mimic组、miR-375 mimic NC组、blank组,采用脂质体细胞转染法进行转染。利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测过表达或抑制表达miR-375对Ishikawa细胞增殖及凋亡等生物学行为的影响;利用Western Blot技术检测Ishikawa细胞转染后下游靶基因IGF-1表达水平。结果:转染后48小时与96小时,mimic组比mimic NC组细胞的增殖能力下降,inhibitor组比inhibitor NC组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48小时后,mimic组、miR-375 NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、空白组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,差异有统计学意义(P <0.05)。转染48小时后,IGF-1蛋白在mimic组、miR-375 NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、空白组中的相对表达水平分别为0.45±0.22、1.45±0.14、3.89±0.11、1.66±0.33、1.74±0.32,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现。

吴茱萸碱在诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白的影响

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)在诱导A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白表达的调控。方法电镜观察吴茱萸碱诱导细胞凋亡过程中细胞形态的变化。Western blot方法分析药物作用后对SIRT1蛋白和p53及其下游p21蛋白表达的影响。结果经15μmol.L-1吴茱萸碱处理24 h的A375-S2细胞表现出典型的凋亡特征,即细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、染色质浓集、边聚。在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞凋亡过程中,SIRT1蛋白的表达下降,p53和p-p53的表达有所上升,其下游p21蛋白也被激活。结论在吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞凋亡中,p53及其下游p21蛋白被活化,SIRT1蛋白表达被下调。

miR-182靶向作用环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1调控人黑素瘤A375细胞的增殖和侵袭

目的探讨miR-182对人皮肤黑素瘤细胞系A375细胞的增殖与侵袭能力的影响,及miR-182影响黑色素细胞增殖的机制。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-182模拟物或抑制剂转染人黑素瘤A375细胞,以使miR-182过表达或低表达,采用MTT方法检测细胞活力变化,应用Transwell小室法检测A375细胞侵袭能力的变化,同时通过Real-time PCR检测核转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)mRNA的表达情况,采用Western blotting检测CREB1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,miR-182沉默能够显著增强A375细胞增殖和侵袭能力,P<0.01,显著降低CREB1蛋白与mRNA的表达水平,P<0.01;miR-182过表达的作用与之相反。结论 miR-182沉默增强A375细胞增殖和侵袭能力可能与降低CREB1蛋白相关。

miR-375靶向OTX1对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的分析微小RNA-375(miR-375)、人同源盒基因1(OTX1)对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分为空白对照组(Control组)、miR-375激动剂阴性对照组(mNC)组、miR-375激动剂组(miR-375 mimic组),miR-375抑制剂剂组(miR-375 inhibitor组),miR-375抑制剂阴性对照组(iNC组);除Control组细胞正常培养外,其余4组转染相应的miR-375激动剂、抑制剂及阴性对照试剂。4组细胞均培养48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-375、OTX1 mRNA相对表达水平,MTT检测各组细胞增殖情况,Transwell检测细胞侵袭情况,细胞划痕实验检测细胞迁移,双荧光素报告基因检测宫颈癌HeLa细胞miR-375与OTX1的靶向关系,蛋白免疫印记(Western Blot)检测通路OTX1蛋白、增殖活性标志物-细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白、侵袭迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)蛋白表达。结果与Control组、mNC组、iNC组相比,miR-375 inhibitor组的OTX1 mRNA及蛋白表达、增殖标志物Ki-67蛋白表达、侵袭及迁移相关分子MMP-2蛋白表达、增殖率、侵袭率、迁移率均增高(P<0.05),miR-375表达、侵袭及迁移抑制分子TIMP-2蛋白表达均降低(P<0.05);miR-375 mimic组的OTX1 mRNA及蛋白表达、Ki-67蛋白表达、MMP-2蛋白表达、增殖率、侵袭率、迁移率均降低(P<0.05),、miR-375表达、TIMP-2蛋白表达均升高(P<0.05)。Control组、mNC组及iNC组组间相比,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告实验发现,与miR-375 NC+WT-OTX13’-UTR组相比,miR-375 mimic+WT-OTX13’-UTR组的荧光素酶相对活性降低(P<0.05)。结论miR-375过表达可靶向抑制OTX1表达,进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移。

miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用

目的探讨miR-375靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用。方法选择对数生长期的人子宫内膜癌Ishikawa细胞,随机分为5组,模拟剂组转染miR-375模拟剂,模拟剂NC组转染miR-375模拟剂NC,抑制剂组转染miR-375抑制剂,抑制剂NC组miR-375抑制剂NC,对照组为未转染的Ishikawa细胞。利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测Ishikawa细胞增殖及凋亡情况;利用Western blot技术检测IGF-1表达水平。结果转染后48 h与96 h,模拟剂组比模拟剂NC组细胞的增殖能力下降,抑制剂组比抑制剂NC组细胞的增殖能力增强(P<0.05)。转染48 h后,模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,miR-375 NC组显著低于模拟剂组,抑制剂NC组显著高于抑制剂组(P<0.05)。转染48 h后,IGF-1蛋白在模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组中的相对表达水平分别为0.45±0.22,1.45±0.14,3.89±0.11,1.66±0.33,1.74±0.32,miR-375 NC组显著高于模拟剂组,抑制剂NC组显著低于抑制剂组(P<0.05)。结论过表达的miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现。

MTH1抑制剂TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖与迁移的影响

目的探讨MTH1抑制剂TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、迁移的影响。方法利用细胞培养手段培养人恶性黑色素瘤A375细胞;应用倒置显微镜法观察TH588对细胞形态的影响;采用CCK-8法检测不同浓度TH588(0、4、8、16、32、64μmol/L)对A375细胞的增殖抑制作用;采用集落克隆形成抑制试验观察对比高中低三种浓度(12.8、6.4、3.2μmol/L)TH588对A375细胞的增殖抑制作用;细胞划痕实验检验TH588对A375细胞迁移能力的影响。结果CCK-8检测结果显示,同一时间段不同浓度TH588组与空白对照组比较,细胞存活率均降低;32、64μmol/L TH588浓度下培养48、72 h时细胞存活率均低于同TH588浓度下培养24 h时。倒置显微镜法观察TH588作用于人恶性黑色素瘤A375细胞后,细胞明显皱缩,且边缘变得模糊,有碎片颗粒产生。集落克隆形成抑制实验表明,TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖有明显抑制作用。细胞划痕实验表明,经TH588作用后A375细胞划痕迁移距离在48 h内均较无干预的A375细胞迁移距离更短。结论TH588对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖及迁移有明显抑制作用,且低浓度的TH588便有较好的抑制效果。

lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性T淋巴细胞白血病细胞增殖、侵袭的实验研究

目的探讨lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性淋巴细胞白血病(T-acute lymphocytic leukemia,T-ALL)细胞增殖和侵袭的影响。方法以2018年6月—2021年3月收治的57例T-ALL患者为观察对象(T-ALL组),另选55例同期健康体检者为对照组。qRT-PCR检测T-ALL组和对照组及T-ALL T淋巴细胞CCRF-CEM细胞株中lncRNA XIST水平;对CCRF-CEM细胞转染si-lncRNA XIST以沉默lncRNA XIST、转染miR-375模拟物以过表达miR-375;采用CCK-8法、Transwell侵袭实验法及流式细胞术检测CCRF-CEM细胞的增殖、侵袭及凋亡情况;荧光素酶报告基因方法检测lncRNA XIST靶基因;Western blot检测Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结果与对照组比较,T-ALL组的lncRNA XIST、Notch1 mRNA表达明显增加(P<0.05),而miR-375水平明显下降(P<0.05),且T-ALL组患者Notch1蛋白水平明显高于对照组(P<0.001)。转染si-lncRNA XIST沉默lncRNA XIST后,CCRF-CEM细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡明显增加(P<0.05)。荧光素酶报告基因显示miR-375是lncRNA XIST的靶点。CCRF-CEM细胞转染miR-375后,细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡明显增加(P<0.05)。转染si-lncRNA XIST可以明显上调miR-375水平、下调Notch1 mRNA水平,同时下调Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结论lncRNA XIST在T-ALL患者中呈高表达,可能通过miR-375-Notch1轴影响白血病细胞生物学功能。

Celecoxib抑制人黑素瘤A375细胞增殖及对Cox-2/MMP-1蛋白表达的影响

目的研究Celecoxib(塞来考昔)对人黑素瘤A375细胞增殖抑制、凋亡诱导和周期阻滞作用及对A375细胞表达Cox-2和分泌型MMP-1蛋白的影响。方法MTT法测定Celecoxib对A375细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡及周期阻滞作用;细胞爬片SABC免疫细胞化学检测Celecoxib对A375细胞Cox-2蛋白表达的影响,ELISA法分析Celecoxib对A375细胞分泌型MMP-1蛋白表达的影响。结果80μmol/L的Celecoxib明显抑制人黑素瘤A375细胞增殖,并诱导凋亡(凋亡率35.91%)和G2/M期阻滞,减少A375细胞表达Cox-2蛋白和分泌型MMP-1蛋白。结论人黑素瘤A375细胞表达Cox-2蛋白和MMP-1蛋白,Celecoxib是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。

AKT反馈激活拮抗4EGI-1对黑素瘤A375细胞的抑制作用

目的:探索4EGI-1对黑素瘤A375细胞中AKT通路的激活作用及后者对4EGI-1抑制A375细胞增殖的影响。方法:用20、40、60μmol/L的4EGI-1处理黑素瘤A375细胞12、24 h,Western boltting检测4EGI-1对A375细胞中AKT磷酸化的影响;A375细胞分别受4EGI-1(40μmol/L)、BEZ235(5μmol/L)、4EGI-1(40μmol/L)+BEZ235(5μmol/L)联合处理,CCK-8实验和流式细胞术分别检测4EGI-1、BEZ235单独或联合处理对A375细胞增殖和细胞周期的影响,Western boltting检测对细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达的影响。结果:4EGI-1促进A375细胞中AKT的磷酸化,且具有剂量依赖性;而BEZ235能够拮抗4EGI-1对AKT的促磷酸化作用。与4EGI-1组和BEZ235组相比,联合组的A375细胞增殖抑制率显著升高[24 h时,4EGI-1组和BEZ235组抑制率分别为(7.6±1.2)%和(2.4±3.1)%,而联合组抑制率为(19.8±4.3)%;P<0.05],S期细胞比例显著降低(4EGI-1组和BEZ235组S期细胞比例分别为25.65%和25.82%,联合处理组细胞S期为13.08%;P<0.05),Cyclin D1表达显著降低(4EGI-1组和BEZ235组Cyclin D1相对表达值为0.81±0.04和0.76±0.04,联合处理组细胞Cyclin D1相对表达值为0.25±0.03;P<0.05)。结论:AKT反馈激活拮抗4EGI-1对黑素瘤A375细胞的抑制作用,联合使用AKT抑制药物能够增强4EGI-1对A375细胞的生长抑制作用。

miR-214对人黑素瘤细胞A375增殖和侵袭及JNK1蛋白表达的影响

目的研究miR-214对人皮肤黑素瘤细胞系A375的增殖、侵袭及c-Jnk氨基末端激酶1(JNK1)表达的影响,探讨miR-214影响黑色素细胞增殖、侵袭的机制。方法将miR-214 mimics或inhibitor应用阳离子脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染A375细胞,MTT和克隆形成实验分别检测转染后细胞增殖、侵袭能力的变化,Western blot方法检测JNK1蛋白表达。结果转染miR-214 mimics后,A375细胞增殖、侵袭能力明显降低,JNK1蛋白表达显著降低,(P<0.01);转染miR-214 inhibitor后,A375细胞增殖、侵袭能力明显升高,JNK1蛋白表达显著升高,(P<0.01)。结论 miR-214可能通过调控JNK1的表达抑制人黑素瘤细胞A375的增殖与侵袭能力。

四嗪二甲酰胺诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡及作用机制的研究

目的研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡及分子机制。方法将不同浓度的ZGDHu-1与EBC-1细胞在体外培养,用5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA法观察ZGDHu-1抑制EBC-细胞增殖作用;用Annexin-V/PI双标记和ELISA法测定凋亡细胞核小体等技术观察ZGDHu-1诱导EBC-细胞凋亡率。用流式细胞术检测经ZGDHu-1作用后EBC-1细胞P38MAPK和Stat3磷酸化表达的变化,同时用Western blot法检测bcl-2、bax、P53、Fas、Caspase-3等蛋白质的变化。结果 ZGDHu-1能抑制EBC-1细胞增殖,呈现作用时间和剂量的量效关系,24h、48h、72h后的IC50分别为(295±25)ng/ml,(112±8)ng/ml和(23±2)ng/ml。EBC-1细胞与ZGDHu-1作用后,Annexin-V+/PI-表达升高,细胞内核小体含量显著增加,二者均呈现剂量依赖性。EBC-1细胞与50ng/ml、200ng/ml、500ng/ml等浓度的ZGDHu-1培养48h后,磷酸化P38MAPK的表达率为67.4%、88.2%和91.1%,对照组为10.6%;而磷酸化Stat3表达率分别为56.5%、43.6%和34.6%,对照组为89.1%。Western blot法检测发现bax、P53和Fas蛋白的表达随药物作用浓度的升高而显著上调,bcl-2的表达没有变化,Caspase-3蛋白的表达则明显下调。结论 ZGDHu-1能显著抑制EBC-1细胞增殖,并诱导其细胞凋亡。Fas介导的线粒体的途径可能是ZG-DHu-1诱导EBC-1细胞凋亡通路之一;P38MAPK和Stat3激活也参与了ZGDHu-1诱导EBC-1细胞的凋亡。

E7050对肺癌细胞EBC-1抗增殖作用及其机制的研究

目的研究E7050对人肺癌细胞系EBC-1的生长抑制作用及分子机制。方法人肺癌EBC-1细胞经不同剂量E7050作用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定E7050对肺癌细胞系EBC-1的增殖抑制率;蛋白印迹法观察相关蛋白的表达;流式细胞术及Hoechst33342染色法检测E7050对EBC-1细胞的凋亡诱导作用。结果 E7050可有效抑制肺癌细胞的生长,且抑制率具有剂量效应依赖性。E7050还可以通过诱导EBC-1细胞凋亡抑制其增殖;同时,E7050可明显下调EBC-1细胞p-Met的表达,而c-Met基因没有变化。结论E7050可以通过诱导凋亡和下调p-Met表达体外抑制EBC-1肺癌细胞增殖。

miR-375靶向YAP1调节宫颈癌细胞侵袭迁移的机制研究

目的探讨miR-375对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响及调控机制。方法选取2019年1月至2021年1月在长沙市妇幼保健院行宫颈癌根治术患者50例,取切除的癌组织、癌旁组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织miR-375和YAP1的表达,Pearson分析两者的相关性,并分析两者表达与宫颈癌临床病理学参数的关系。体外培养HeLa细胞,分成空白对照组(NC)、miR-375激动剂组(miR-375 mimic)、YAP1抑制组(shYAP1)、miR-375+YAP1抑制组(sh-miR-375+sh-YAP1);细胞迁移侵袭试验技术(Transwell)检测细胞侵袭性;细胞划痕检测细胞迁移性;蛋白质印迹(Western blot)检测各组上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达情况。荧光素酶系统验证miR-375与YAP1的靶向性。结果宫颈癌组织中miR-375表达低于癌旁组织,YAP1表达高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson分析显示miR-375与YAP1呈负相关(P<0.05)。miR-375和YAP1 mRNA表达在不同组织学分级、FIGO分期、淋巴结转移间存在统计学意义(P<0.05)。miR-375过表达与抑制YAP1的表达后,迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05)。结论miR-375可通过负向调节YAP1抑制EMT相关蛋白,进而抑制宫颈癌细胞的迁移、侵袭。

敲低miR-375对子痫前期模型滋养细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨敲低miR-375对子痫前期(PE)滋养细胞模型增殖、凋亡的影响及作用机制。方法取人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/Svneo,随机分为常氧对照组、PE模型组、miR-NC组和miR-375 inhibitor组。其中,miR-NC组和miR-375 inhibitor组细胞分别转染miR-NC和miR-375 inhibitor;常氧对照组细胞在常氧环境下培养,其余3组细胞均在缺氧条件下培养以建立PE滋养细胞模型。采用RT-PCR检测miR-375的表达,EdU荧光染色、CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测YAP1蛋白及凋亡相关蛋白(Bcl-2、caspase-3及Bax蛋白)的表达。双荧光素酶基因实验检测miR-375与YAP1的靶向调控关系。结果与常氧对照组比较,PE模型组细胞miR-375表达升高(P<0.05),EdU阳性细胞百分比下降(P<0.05),细胞增殖能力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax、caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),YAP1、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。PE模型组和miR-NC组细胞上述各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-375 inhibitor组细胞miR-375表达降低(P<0.05),EdU阳性细胞百分比升高(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax、caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),YAP1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-375对YAP1具有靶向调控作用(P<0.05)。结论敲低miR-375可促进PE滋养细胞增殖并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与其对YAP1基因的靶向调控有关。

miR375过表达下调Nit-1细胞中肌侵蛋白的表达

目的为研究mi R375对肌侵蛋白(MTPN)表达的影响,探寻mi R375在糖尿病中的作用。方法该研究用质粒p AAV-mi R375转染Nit-1细胞48 h后,分别通过Real time RT-PCR和Northern Blot检测Nit-1细胞中mi R375的表达,Western Blot检测Nit-1细胞中MTPN蛋白的表达。结果在转染p AAV-mi R375的Nit-1细胞中mi R375的表达明显升高,是转染空质粒p AAV-MCS和未转染的6倍。MTPN蛋白的表达与转染了空质粒p AAV-MCS和未转染的Nit-1细胞相比,明显下降。结论在Nit-1细胞中mi R375过表达引起了MTPN蛋白表达下调,推测mi R-375可能是通过调节MTPN基因的表达来调控胰岛素分泌的,从而影响体内血糖的浓度。

lncRNA MLK7-AS1通过抑制miR-375的表达促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MLK7-AS1在人脑胶质瘤组织中表达及其对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响。方法选择2016~2017年手术切除的脑胶质瘤组织标本45例,2007版WHO分级Ⅰ级8例,Ⅱ级15例,Ⅲ级10例,Ⅳ级12例。另选择其中10例瘤旁正常脑组织作对照。体外培养U251细胞和人正常星形胶质细胞(NHA)。U251细胞根据转染质粒分成四组:转染miR-375 mimic组、转染si-MLK7-AS1组、同时转染miR-375 inhibitor和si-MLK7-AS1组以及只转染miR-375 in⁃hibitor组。RT-qPCR检测MLK7-AS1和miR-375的表达水平;荧光素酶报告基因实验验证MLK7-AS1与miR-375之间的关系;CCK-8法检测U251细胞增殖活性,Transwell实验检测U251细胞侵袭能力。结果高级别胶质瘤组织MLK7-AS1表达水平明显高于低级别胶质瘤组织(P<0.05),而后者明显高于瘤旁正常脑组织(P<0.05);高级别胶质瘤组织miR-375表达水平明显低于低级别胶质瘤组织(P<0.05),而后者明显低于瘤旁正常脑组织(P<0.05)。U251细胞MLK7-AS1表达水平明显高于NHA(P<0.05),miR-375表达水平明显低于NHA(P<0.05)。序列分析显示MLK7-AS1和miR-375存在特异性结合序列,荧光素酶报告基因实验表明U251细胞MLK7-AS1负调控miR-375表达。沉默MLK7-AS1表达通过上调miR-375表达明显抑制U251细胞增殖和侵袭(P<0.05)。结论lncRN AMLK7-AS1可能通过调节miR-375的表达水平在人脑胶质瘤中发挥着促癌的作用。

α-倒捻子素通过HMGB1促炎通路诱导人黑色素瘤A375细胞的凋亡

目的研究α-倒捻子素对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移和凋亡的影响及HMGB1介导的炎症反应在给药过程中的作用。方法利用含有不同药物浓度(0、10、15、20μM)的DMEM培养基培养人黑色素瘤A375细胞,CCK-8试剂盒检测每组细胞活力及药物毒性,并使用光学显微镜观察用药后细胞形态变化;划痕实验检测每组用药后人黑色素瘤A375细胞的迁移能力;使用TUNEL染色检测用药后人黑色素瘤A375细胞的凋亡情况;细胞免疫荧光实验用来观察HMGB1蛋白用药前后的表达变化;免疫印迹实验检测药物处理后人黑色素瘤A375细胞内HMGB1及其相关炎症通路蛋白的表达情况。结果α-倒捻子素对A375细胞存在明显毒性,且显著抑制A375细胞的增殖及迁移,并呈现剂量依赖的效果;TUNEL染色证明,α-倒捻子素显著诱导A375细胞凋亡;细胞免疫荧光和免疫印迹实验表明,α-MG组HMGB1及炎症相关蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论α-倒捻子素可显著抑制人黑色素瘤A375细胞的生长,激活HMGB1相关炎症通路,诱导人黑色素瘤A375细胞发生凋亡。