E7050对肺癌细胞EBC-1抗增殖作用及其机制的研究

目的研究E7050对人肺癌细胞系EBC-1的生长抑制作用及分子机制。方法人肺癌EBC-1细胞经不同剂量E7050作用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定E7050对肺癌细胞系EBC-1的增殖抑制率;蛋白印迹法观察相关蛋白的表达;流式细胞术及Hoechst33342染色法检测E7050对EBC-1细胞的凋亡诱导作用。结果 E7050可有效抑制肺癌细胞的生长,且抑制率具有剂量效应依赖性。E7050还可以通过诱导EBC-1细胞凋亡抑制其增殖;同时,E7050可明显下调EBC-1细胞p-Met的表达,而c-Met基因没有变化。结论E7050可以通过诱导凋亡和下调p-Met表达体外抑制EBC-1肺癌细胞增殖。

四嗪二甲酰胺诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡及作用机制的研究

目的研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡及分子机制。方法将不同浓度的ZGDHu-1与EBC-1细胞在体外培养,用5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA法观察ZGDHu-1抑制EBC-细胞增殖作用;用Annexin-V/PI双标记和ELISA法测定凋亡细胞核小体等技术观察ZGDHu-1诱导EBC-细胞凋亡率。用流式细胞术检测经ZGDHu-1作用后EBC-1细胞P38MAPK和Stat3磷酸化表达的变化,同时用Western blot法检测bcl-2、bax、P53、Fas、Caspase-3等蛋白质的变化。结果 ZGDHu-1能抑制EBC-1细胞增殖,呈现作用时间和剂量的量效关系,24h、48h、72h后的IC50分别为(295±25)ng/ml,(112±8)ng/ml和(23±2)ng/ml。EBC-1细胞与ZGDHu-1作用后,Annexin-V+/PI-表达升高,细胞内核小体含量显著增加,二者均呈现剂量依赖性。EBC-1细胞与50ng/ml、200ng/ml、500ng/ml等浓度的ZGDHu-1培养48h后,磷酸化P38MAPK的表达率为67.4%、88.2%和91.1%,对照组为10.6%;而磷酸化Stat3表达率分别为56.5%、43.6%和34.6%,对照组为89.1%。Western blot法检测发现bax、P53和Fas蛋白的表达随药物作用浓度的升高而显著上调,bcl-2的表达没有变化,Caspase-3蛋白的表达则明显下调。结论 ZGDHu-1能显著抑制EBC-1细胞增殖,并诱导其细胞凋亡。Fas介导的线粒体的途径可能是ZG-DHu-1诱导EBC-1细胞凋亡通路之一;P38MAPK和Stat3激活也参与了ZGDHu-1诱导EBC-1细胞的凋亡。

Hsp90抑制剂FS-108抑制癌基因依赖肿瘤细胞增殖及运动的机制研究

目的探讨Hsp90抑制剂FS-108抑制癌基因依赖的肿瘤细胞EBC-1和A375的增殖及运动能力的作用机制。方法采用磺酰罗丹明B法检测FS-108对细胞增殖的影响;采用蛋白免疫印迹法检测FS-108对Hsp90客户蛋白、周期调控蛋白及凋亡调控蛋白的变化;采用流式细胞术检测FS-108作用后细胞周期分布及凋亡情况;采用Transwell小室方法检测FS-108对细胞运动能力的影响。结果 FS-108对EBC-1和A375均有明显的增殖抑制作用,IC_(50)分别为25.53 nmol·L^(-1)和30.02 nmol·L^(-1)。FS-108能有效降解肿瘤细胞中的客户蛋白c-Met和B-Raf并进而抑制下游AKT及ERK信号通路。FS-108能诱导细胞产生G_2/M期阻滞及凋亡。同时,FS-108还能明显抑制EBC-1和A375细胞的运动能力。结论 Hsp90抑制剂FS-108主要通过诱导肿瘤细胞产生G_2/M期阻滞和细胞凋亡,发挥其抑制增殖的细胞生物学效应,同时,FS-108也具有一定抗转移潜能。

四嗪二甲酰胺诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡的作用及其机制

目的 研究四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）诱导肺癌细胞株EBC-1凋亡的作用及分子机制.方法 将不同浓度的ZGDHu-1与EBC-1细胞在体外培养,采用5′-溴-2′脱氧尿苷（BrdU）-酶联免疫吸附法（ELISA）观察ZGDHu-1对EBC-1细胞的增殖抑制作用 采用Annexin V/PI双标记染色与ELISA法测定凋亡细胞核小体等技术检测ZGDHu-1诱导EBC-1细胞凋亡的作用 采用流式细胞术检测经ZGDHu-1作用后EBC-1细胞磷酸化p38MAPK和Stat3表达的变化 采用Western blot法检测Bcl-2、Bax、Fas、p53、caspase-3蛋白表达的变化.结果 ZGDHu-1能抑制EBC-1细胞增殖,并呈现作时间和剂量依赖性,作用24、48和72 h后的IC50分别为（295±25）ng/ml、（112±8）ng/ml和（23±2）ng/ml.经ZGDHu-1作用后,EBC-1细胞中的Annexin V＋/PI-细胞升高,细胞内核小体含量显著增加,二者均呈现剂量依赖性.EBC-1细胞与50、200和500 ng/ml的ZGDHu-1培养48 h后,磷酸化p38MAPK的表达率分别为67.4%、88.2%和91.1%,空白对照组为10.6% 而磷酸化Stat3的表达率分别为56.5%、43.6%和34.6%,空白对照组为89.1%.Western blot检测结果显示,随药物作用浓度的升高,Bax、Fas和p53蛋白的表达显著上调,Bcl-2的表达没有变化,caspase-3蛋白的表达则明显下调.结论 ZGDHu-1能显著抑制EBC-1细胞增殖,并诱导其凋亡.Fas介导的线粒体途径可能是ZGDHu-1诱导EBC-1细胞凋亡的通路之一,p38MAPK和Stat3激活也参与了ZGDHu-1诱导EBC-1细胞凋亡的过程.