EB病毒变异型EBER2对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

EB病毒(EBV)编码小RNA(EBERs,包括EBER1和EBER2)的致癌作用已在多种细胞系中得到证实,我们前期研究发现在EBER2基因发生6处突变的EB-8m变异型可能与鼻咽癌(NPC)的发生相关。本研究探讨变异型EBER2对NPC细胞增殖和凋亡的影响,以进一步明确EBER2基因变异在NPC发生中的作用。分别以B95-8原型和EB-8m变异型EBER2稳定转染EBV阴性NPC细胞系,MTT法和平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。与转染原型EBER2细胞及转染载体的对照细胞比较,转染变异型EBER2细胞的MTT吸光度值和平板克隆形成率增高,细胞凋亡率降低(P均小于0.05),原型和对照之间细胞增殖无差异,但原型的细胞凋亡率亦低于对照(P<0.05)。上述结果表明,EB-8m变异型EBER2可通过提高NPC细胞增殖及抗凋亡能力而增强其致癌作用。

变异型EBER2通过抑制PKR通路增强鼻咽癌细胞抗凋亡能力

目的:前期研究发现变异型EB病毒编码小RNA 2(EBER2)基因EB-8m可能与鼻咽癌(NPC)相关,本研究旨在探讨变异型EBER2是否通过增强对RNA激活蛋白激酶(PKR)的抑制作用从而提高NPC细胞的抗凋亡能力。方法:以野生型和EB-8m变异型EBER2基因稳定转染的EB病毒阴性NPC细胞系HONE1和CNE1为研究对象,以未转染EBER2基因细胞为对照,分别用10 000 IU/mLα-干扰素(IFN-α)和2μg/mL顺铂诱导凋亡后以流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测IFN-α诱导凋亡细胞中PKR及下游eIF2α和c-Jun的磷酸化蛋白及Bcl-2蛋白表达水平。对EBER2基因转染细胞进行RNA和PKR蛋白免疫共沉淀,检测共沉淀产物中EBER2富集倍数。结果:EBER2基因转染细胞的凋亡率低于未转染EBER2基因细胞(P<0.05或P<0.01),且变异型的细胞凋亡率低于野生型(P<0.05)。与未转染EBER2基因细胞比较,EBER2转染细胞中磷酸化PKR、eIF2α和c-Jun减少,Bcl-2表达升高,且磷酸化PKR在变异型转染HONE1和CNE1细胞中的水平低于野生型转染细胞,磷酸化eIF2α在变异型转染HONE1细胞中的水平亦低于野生型转染细胞,差异均有统计学意义(P均<0.05)。EBER2基因转染细胞RNA和PKR免疫共沉淀产物中可检测到EBER2,且变异型的富集倍数高于野生型(P<0.05)。结论:EB-8m变异型EBER2可能增强EBER2对PKR的结合作用,同时抑制eIF2α和c-Jun磷酸化并上调Bcl-2表达,进而增强NPC细胞抗凋亡能力。

非霍奇金淋巴瘤组织坏死相关因素的探讨

目的探讨非霍奇金淋巴瘤组织坏死相关因素。方法将124例NHL分成有坏死组和无坏死组两组;分成NK/T、TCL、BCL三种类型,用I HC(SP法)标记CD95(Fas)、CD95L(FasL)、bcl-2、TNF-α;ISH技术检测EB病毒编码的小核苷酸RNA(EBER1/2);病例随访。结果坏死组Fas、FasL、EBER1/2的表达率依次为81.5%(22/27)、74.1%(20/27)、82.5%(23/27),无坏死组依次为68.1%(66/97)、59.8%(58/97)、12.4%(12/97),与无坏死组比较P<0.005,bcl-2表达正好相反,与坏死组比较P<0.005。Fas、FasL、EBER1/2表达主要集中在NK/T和TCL,与BCL比较差异有统计学意义;而bcl-2表达主要集中在BCL,与TCL及NK/T比较差异有统计学意义。坏死组、无坏死组平均生存时间分别为7.4月、24.2月,两组比较P<0.005。结论Fas、FasL、bcl-2的异常表达和EBV感染,在NHL的坏死中可能发挥了一定的作用,NHL中组织坏死是多因素共同作用的结果,组织坏死与预后有关。

儿童皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤临床病理特点及其与EB病毒关系的研究

目的:研究儿童皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床和病理特点及与EB病毒感染的关系。方法:选用CD20、CD45RO、CD68、CD30、CD56、TIA-1等抗体作免疫组织化学ABC法染色;应用EBER1/2原位杂交检测EB病毒。结果:13例SPTCL占同期观察的皮肤非何杰金淋巴瘤的36.1%,其中男8例,女5例;发病年龄平均4.8岁;主要表现为下肢、躯干无症状性结节或肿块,常伴发热和肝脾肿大。组织学特点为肿瘤在皮下脂肪内呈脂膜炎样浸润,瘤细胞大小不等、形态各异,瘤内可见上皮样肉芽肿、多核巨细胞、豆袋细胞、小片坏死。免疫表型:TIA-1抗体表达12例,13例CD45RO均为阳性,CD20、CD30、CD56均为阴性;EB病毒EBER1/2原位杂交阳性率38.5%。13例中随访10例,死亡5例,其中4例合并噬血细胞综合征(HPS),4例中EBER阳性3例。结论:SPTCL在儿童皮肤非何杰金淋巴瘤中并不少见。儿童SPTCL可能与EB病毒潜伏感染有一定的相关性。与EB病毒相关的SPTCL具有更大的侵袭性,常伴有HPS,预后较差。

EBER1／2、LMP—1在鼻腔非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义

目的 探讨EBER1／2、LMP—1在鼻腔非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及意义。方法采用免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化酶连接法(SP法)检测CD45RO、CD3e、CD20、TIA—1、粒酶B确定肿瘤细胞免疫表型，原住杂交(In situ hybridization,ISH)方法检测EB病毒（EBV)编码的RNA（EBER1／2)、免疫组织化学方法检测EBV潜伏膜蛋白(LMP—1)。结果29例鼻腔NHL中，CD45RO阳性29例(100.00％)，CD3e、TIA—1、粒酶B阳性19例(65.56%）CD20全部阴性；EBER1／2阳性率为79．62％(23/29)，LMP—1阳性率为48.28％(14/29)。结论EBV与鼻腔NHL密切相关，EB病毒在鼻腔非霍奇金淋巴瘤的发生发展中可能起重要作用，EBER1／2原住杂交检测及LMP-1免疫组化检测可作为鼻腔非霍奇金淋巴瘤组织学诊断的辅助依据。

鼻腔及鼻咽部非霍奇金淋巴瘤的临床病理及其与EBV感染的关系

目的探讨鼻腔及鼻咽部非霍奇金淋巴瘤的临床病理特点及其与EBV感染的关系。方法选取64例鼻腔及鼻咽部非霍奇金淋巴瘤组织标本,普通HE染色,观察肿瘤细胞形态特点及组织学类型;应用免疫组化SP法检测多种抗体标记T淋巴细胞(CD45RO,TIA-1)、B淋巴细胞(CD20,CD45RA)及NK淋巴细胞(CD56),同时进行EBV原位杂交检测。结果①按照WHO新分类法,64例中36例诊断为鼻NK/T细胞淋巴瘤(56%),24例B细胞淋巴瘤(37.5%),4例外周T(非特殊类)细胞淋巴瘤(6%)。②在36例鼻NK/T细胞淋巴瘤中,EBER1/2检出率为83%(30/36),24例B细胞淋巴瘤及4例外周T(非特殊类)细胞淋巴瘤EBER1/2均表达阴性。3种不同组织类型的淋巴瘤之间EBER1/2阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论鼻腔及鼻咽部非霍奇金淋巴瘤以鼻NK/T细胞淋巴瘤多发,EBV感染与淋巴瘤组织类型有关,与部位无关。