鼻咽癌癌变过程中EBERs表达状况的研究

本文采用重组质粒ｐＳＰ６５（带有ＥＢＥＲｓ的基因）体外转录合成的地高辛标记的单链反义ＲＮＡ探针，用原位杂交方法检测处于癌变不同阶段的鼻咽活检组织中ＥＢＥＲｓ的表达状况。ＥＢＥＲｓ检出率为：鼻咽癌（２３／２４），正常鼻咽组织，慢性炎症增生及单纯性增生和化生（０／３０），异型增生和化生（５／８），头颈部其它肿瘤（０／５），鼻咽癌颈淋巴结转移灶（１／１）。进一步证明：（１）ＥＢＶ与ＮＰＣ密切相关；（２）ＥＢＶ在ＮＰＣ转移过程中并不丢失；（３）ＥＢＶ可能并不感染正常鼻咽上皮。

细胞DNA倍体分析和EBERs原位检测在鼻咽癌早期诊断中的应用

目的 探讨鼻咽脱落细胞进行DNA倍体和EB病毒编码RNA (EBERs)检测在鼻咽癌诊断中的应用。方法 对 38例经细胞学诊断为鼻咽癌和 8例为正常的鼻咽细胞涂片分别进行图像分析测定细胞DNA含量和EB病毒EBERs原位杂交检测。结果 与病理细胞学诊断相比 ,DNA异倍体分析和EBERs检测诊断癌的敏感性分别为 5 0 %和 92 %,其特异性均为 10 0 %;其阴性预测值分别为 30 %和 72 %。结论 与EBERs检测相比 ,DNA异倍体分析的诊断敏感性和阴性预测值较低 ,差异具有显著性 (分别为P <0 0 0 1和P <0 0 5 )。证明在鼻咽细胞学涂片应用EB病毒原位杂交检测诊断鼻咽癌优于应用DNA异倍体分析诊断。与细胞DNA图像分析相比 ,EB病毒原位杂交检测具有客观、实验条件简单等优点 ,在鼻咽癌可疑病人的早期诊断和鉴别诊断上具有重要的实用价值。

133例霍奇金淋巴瘤中EBERs表达与临床分期、疗效相关性分析

目的探讨霍奇金淋巴瘤中EBV感染情况,通过EBERs原位杂交,分析其表达与HL临床分期之间的关系;此外,进一步探讨EBV的感染对于HL化疗疗效的影响。方法收集了133例霍奇金淋巴瘤患者的石蜡标本、以及查阅详细的临床资料,进行EBERs原位杂交染色,统计分析EBERs的表达与临床分期之间的关系;统计EBV阳性与阴性例数,分组分析EBV对化疗总有效率的影响。结果 Pearson相关分析显示,EBERs的表达与临床分期呈正相关;单因素统计显示,EBV阳性组化疗有效率低于EBV阴性组。结论EBERs的表达率高的HL患者其临床分期较晚,EBV阳性患者化疗有效率欠佳,提示EBERs可作为HL的独立预后因素。

转导EB病毒转录的EBERs促进MDCK细胞的恶性化

[目的]通过转导EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)转录的核内小RNA(EBV encoded small RNAs，EBERs)探讨其对上皮细胞株MDCK细胞生长特性的影响。[方法]用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术从EB病毒阳性的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)由来的NPC-KT细胞中扩增出EBERs片段。为了在细胞内大量表达EBERs，利用分子生物学技术，制作了EBERs片段的5次重复排列的5EBERs和10次重复排列的10EBERs。分别插入pCEP4载体质粒，并导入MDCK细胞内。利用Northern Blot法确定细胞内EBERs的表达后，对其在培养中的细胞生长特性和软琼脂中的细胞克隆形成进行了观察。[结果]在培养中大量表达EBERs的MDCK细胞之间丧失了细胞间的相互连接，细胞呈纺锤状，并在软琼脂中形成大量细胞克隆。而非表达EBERs的MDCK细胞的对照组中没有发现细胞生长特性的改变和大量细胞克隆形成。[结论]EBERs的大量表达可以造成MDCK细胞的分散活性和基质非依赖性。提示E-BERs在上皮细胞株MDCK细胞中有癌化作用，从而推论EBERs在同样源于上皮细胞的鼻咽癌中也可能有癌化作用。另外，表达EBERs的MDCK细胞的建立为进一步研究EBERs的作用提供了一个有用的上皮细胞模型。

鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性研究

目的探讨鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性。方法对2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的石蜡包埋切片进行研究:原位杂交方法检测这些切片中EBERs的表达;免疫组化方法检测这些切片中BMI-1的表达。结果 40例鼻咽癌组织中EBERs情况:高表达组为11例,低表达组为29例,合计阳性表达率为100%(40/40)。40例鼻咽癌组织中BMI-1情况:BMI-1阳性表达率为32.5%(13/40)。鼻咽癌组织中EBERs表达与BMI-1表达差异无统计学意义,P>0.05。结论鼻咽癌中EBERs表达与BMI-1表达无相关性,有待进一步研究,并探讨二者在鼻咽癌中的机理。

EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制研究

目的探讨EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制。方法在鼻咽癌细胞中转染EBERs,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中转移相关指标(如MMP)的相对表达量,同时Transwell检测EBERs对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。构建敲除EBERs的BAC-EBV(p2089)质粒,转染鼻咽癌细胞,检测细胞的转移能力。转染EBERs后Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标,免疫荧光检测ZO-1的表达。结果鼻咽癌细胞转染EBERs质粒或p2089质粒后,RT-PCR检测发现转移相关指标表达升高,Transwell检测结果显示细胞迁移能力增强,而在干扰EBERs或转染敲除EBERs的p2089质粒后,转移能力减弱。转染EBERs后E-cadherin表达降低,Vimentin升高,同时免疫荧光检测发现ZO-1表达降低。结论 EBERs可能通过促进EMT高表达而促进鼻咽癌的转移。

EBV阳性炎性滤泡树突状细胞肉瘤9例临床病理特征

目的探讨EBV阳性炎性滤泡树突状细胞肉瘤(epstein-barr virus-positive inflammatory follicular dendritic cell sarcoma,EBV^(+)IFDCS)的临床病理学特征。方法回顾性分析9例EBV^(+)IFDCS的临床病理特征、免疫表型及随访,行HE及免疫组化EnVision法检测,并复习相关文献。结果9例EBV^(+)IFDCS患者年龄22~78岁,平均44.7岁。7例发生于肝,2例发生于脾。肿瘤内可见血管壁纤维样及透明变性(6/9)、嗜酸性粒细胞浸润(3/9)和上皮样肉芽肿(2/9)。免疫表型:瘤细胞表达滤泡树突状细胞标志物CD21(7/9)、CD23(8/9)和CD35(9/9),部分表达SMA(6/9)和D2-40(1/9)。2例脾IgG4阳性浆细胞明显增高(80~135个/10 HPF),7例肝IgG4阳性浆细胞为0~36个/10 HPF。术后随访3~84个月,6例无瘤生存,2例转移,1例失访。结论EBV^(+)IFDCS罕见,低度恶性。EBER原位杂交和免疫组化检测在EBV^(+)IFDCS诊断和鉴别诊断中具有重要作用。治疗以手术切除为主,术后需长期随访。

原发性肠道NK/T细胞淋巴瘤4例临床病理分析

原发性肠道NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma,ENKTL)是一种罕见且具有侵袭性的非霍奇金淋巴瘤(NHL),其发病与EB病毒(epstein-barr virus,EBV)感染高度相关^([1]),鼻咽是发病率最高的部位,也可见于肾上腺、肝、肺、皮肤、子宫等^([2-5])。肠道原发ENKTL罕见,预后差,了解其临床和病理特征对早期诊断和治疗有重要的临床意义。本文分析总结4例肠道原发ENKTL患者的临床病理特征、免疫表型及鉴别诊断,有助于临床和病理医师对该病的进一步认识,尽早诊断和治疗,使患者获得更长的生存时间。

EBER原位杂交手工检测常见问题与对策

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)属于疱疹病毒,在人群中普遍存在感染,一旦原发感染康复后会转变为终身潜伏状态。随着对EBV的深入研究,我们发现它与许多肿瘤的发生有关[1]。原位杂交检测可在分子层面上确认EBV与肿瘤之间的关联,是检测EBV相关肿瘤的金标准。目前,多数大型医院EBER原位杂交检测已使用全自动免疫组化染色仪,鉴于中小型医院受场所、资金、人员等因素的限制,手工操作方法依然是首选。

EBV阳性髓外浆细胞瘤2例并文献复习

目的探讨EBV阳性髓外浆细胞瘤(extramedullary plasmacytoma,EMP)的临床病理学特征。方法回顾性分析2例EBV阳性EMP的临床病理学特征、免疫表型、治疗及预后等,行HE、免疫组化染色及EBER原位杂交检测,并复习相关文献。结果2例患者均为男性,年龄分别为54、65岁,肿块分别位于右侧睾丸和右侧胸壁,肿瘤最大径分别为4.6、4.8 cm。患者均无其他部位异常及全身症状。镜下见肿瘤细胞弥漫分布,黏附性差,肿瘤细胞大小一致、均较小,胞质嗜碱性,细胞核圆形、卵圆形,染色质不粗、较细腻,核偏位于细胞一侧,核仁不明显,核分裂象不常见。免疫表型:肿瘤细胞CD38、CD79a、MUM1均阳性,Kappa/Lambda限制性表达,Ki-67增殖指数分别为8%、15%。EBER原位杂交均阳性。2例均行手术切除术,术后辅以化疗,术后随访均未见肿瘤复发和转移。结论EBV阳性EMP罕见,预后佳,临床无特异性,组织学、免疫表型与其他不同类型的淋巴造血系统肿瘤常有重叠,诊断时需结合临床表现、组织学及免疫表型。

鼻咽癌中EBV感染与某些基因产物表达的关系

目的 观察EB病毒RNA(Epstin Barrvirus ,EBV)、膜蛋白 (LMP 1)、c erbB 2、CyclinD1,bcl 2和p5 3蛋白在鼻咽癌组织中的表达 ,探讨其相互间关系及其在鼻咽癌发生发展中的作用。方法 采用原位分子杂交技术检测了 36例鼻咽癌组织中EBV编码的encodedsmallRNAs(EBERs)、用免疫组化技术检测LMP 1、CyclinD1、c erbB 2、bcl 2和 p5 3蛋白的表达。 结果 36例鼻咽癌组织中全部检出EBVRNAs ,阳性率为 10 0 % (36 /36 ) ,LMP14 4 .4 % (16 /36 ) ,CyclinD15 2 .8% (19/36 ) ,c erB 25 8.3% (2 1/36 ) ,bcl 2 4 4 .4 % (16 /36 ) ,p5 333.3% (12 /36 )。鼻咽癌组织中EB病毒感染与c erB 2、CyclinD1癌基因的表达、p5 3抑癌基因的失活之间有明显的关系。结论 鼻咽癌与EB病毒作为致瘤病毒激活癌基因蛋白的表达密切相关。鼻咽活检组织中有EBERs及LMP 1的检出 ,对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值。

原发性肺淋巴上皮癌13例临床病理学分析

目的探讨原发性肺淋巴上皮癌的临床病理学特征、影像学特征、免疫表型、PD-L1检测、EBER原位杂交检测及预后。方法回顾性分析2013-2021年间南京市胸科医院13例肺原发性淋巴上皮癌(PPLEC)的临床资料及病理学特征,并进行相关文献复习。结果13例原发性肺淋巴上皮癌患者,年龄45~76岁,男性5例,女性8例。CT表现为肿块影或软组织影,未见空气支气管征及空洞。病理组织学示低分化肿瘤细胞呈合胞体样巢片状分布伴有多量淋巴细胞浸润、间质纤维化及多核巨细胞反应。免疫组织化学示肿瘤细胞CKpan,CK5/6,P40,P63阳性,CK7,TTF-1,NapsinA阴性,淋巴细胞CD20,CD3,CD8阳性,低表达或不表达CD4;Ki67指数较高,多在30%~80%之间;PD-L1检测示8例(61.5%)阳性;EBER原位杂交检测12例(92.3%)阳性。7例血液肿瘤标志物升高(其中5例为鳞癌标志物CYFRA21-1)。本组病例总体预后良好,其中11例术后行放化疗。结论肺原发性淋巴上皮癌是肺癌中非常少见类型,临床及影像学无特异性,确诊主要依靠组织病理学形态,免疫组织化学及EBER原位杂交检测。

杂交前3%过氧化氢预处理增强EBER原位杂交特异性阳性信号

目的优化EBER原位杂交检测方法,增强特异性阳性信号,降低背景染色。方法选取30例EBV阳性的组织切片,在杂交前处理时加入3%过氧化氢,再通过EBER探针进行原位杂交,比较不同过氧化氢孵育时间对杂交反应阳性信号和背景的影响。结果用3%过氧化氢处理鼻咽癌组织10 min、处理淋巴瘤组织15 min,EBER原位杂交阳性信号强,背景干净。结论EBER原位杂交过程中,在杂交前处理时用3%过氧化氢短暂孵育可以增强特异性阳性信号,降低非特异性背景染色。

EB病毒与结直肠癌的相关性(英文)

背景与目的:研究表明,EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)除与鼻咽癌密切相关外,可能与其它癌症相关。本研究旨在探讨EBV与中国人结直肠癌的关系。方法:采用PCR方法从90例原发性结直肠癌标本及25例配对的癌旁标本检测EBVLMP1(latentmembraneprotein1)基因的第3外显子及BamHⅠW片段的部分序列;采用免疫组织化学方法检测EBNA1(EBVnuclearantigen1)和LMP1的表达,采用原位杂交检测EBERs(EBV-encodedRNAs)的表达。结果:在90例原发性结直肠癌标本中,EBV基因阳性率为27.7%(LMP1外显子3)和32.2%(W片段),而25例癌旁组织中只有1例(4.0%)EBV基因阳性,癌组织和癌旁组织EBV阳性率差异有显著性(P<0.001)。29例W片段阳性的大肠癌标本中,有23例(79.3%)EBNA1表达阳性,只有1例(3.4%)EBERs阳性,阳性细胞主要为癌细胞,阳性信号集中在核内;而在8例W片段阴性的标本中,未检测到EBNA1的表达,也未检测到EBERs;以上标本中均未检测到LMP1的表达。结论:EBV与部分中国人结直肠癌相关。

Matlab在双极型晶体管特性曲线讲授中的应用

双极型晶体管的特性曲线是讲授双极型晶体管原理时的重要内容，现有教材给出的特性曲线都是含有一个参变量的二维图形，本文介绍了双极型晶体管的Ebers-moll模型及其特性曲线，在此基础上，利用MATLAB仿真技术实现了双极型晶体管特性曲线三维图形绘制，与二维图形相比更为直观，便于学生对双极型晶体管特性曲线的理解和掌握。

亚微米级BJT的共基极、共发射极特性分析

文章借助Matlab工具对超大规模集成电路(VLSIC)中小尺寸双极型晶体管(BJT)的共基极接法、共发射极接法的输入、输出特性进行了数值分析与计算。通过模拟与分析得出:在VLSIC中,BJT在共基极接法和共发射极接法中,共基极接法的输入特性和共发射极接法的输出特性在理想模型近似与实际模型近似的分析结果偏差很大,但共基极接法的输出特性和共发射极接法的输入特性在理想模型近似与实际模型近似的分析结果基本一致。

不同部位和类型恶性淋巴瘤与EBV感染相关性研究

目的:对不同部位和类型的恶性淋巴瘤中EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的感染情况进行检测和分析,探讨EBV感染可能与恶性淋巴瘤的病因关系。方法:收集恶性淋巴瘤组织标本127例,其中鼻腔及鼻咽淋巴瘤60例,胃淋巴瘤30例,表浅淋巴结淋巴瘤37例。组织病理学诊断为非霍奇金淋巴瘤(NHL)108例,霍奇金淋巴瘤(HD)19例。采用原位分子杂交方法检测淋巴瘤组织中EBV编码的小RNA(EBER),确定EBV在恶性淋巴瘤细胞中的存在。结果:108例NHL(包括鼻腔及鼻咽、胃、表浅淋巴结部位),EBER检测46例阳性,阳性率为42.6%。鼻腔/鼻咽NHL的EBER阳性率为58.3%(35/60),其中NK/T细胞淋巴瘤29例,EBER阳性19例,阳性率为65.5%(19/29);B细胞淋巴瘤31例,EBER阳性16例,阳性率为51.6%(16/31)。胃部NHL的EBER阳性率为30.0%(9/30),其中B细胞淋巴瘤28例,EBER阳性9例,阳性率为32.1%(9/28);T细胞淋巴瘤2例,均为EBER阴性。表浅淋巴结NHL18例,EBER阳性2例,阳性率为11.1%(2/18);表浅淋巴结HD19例,EBER阳性5例,阳性率为26.3%(5/19)。结论:本组资料非霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率(42.6%)略高于霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率(26.3%),差异无显著性意义(P>0.05)。鼻腔及鼻咽NHL的EBV感染阳性率(58.3%)高于胃NHL(30.0%)和表浅淋巴结NHL(11.1%)(P<0.05)。研究提示各类型淋巴瘤与EBV感染均有密切关系,且存在部位依赖性。

炎性假瘤样滤泡树突细胞肉瘤6例临床病理特征及预后分析

目的 探讨炎性假瘤样滤泡树突细胞肉瘤（inflammatory pseudotumor-like follicular dendrtic cell sarcoma,IPT-likeFDCS）的临床病理学特征。方法 回顾性分析6例IPT-like FDCS的临床病理资料、免疫表型及EBER原位杂交结果,并追踪患者预后。结果 6例IPT-likeFDCS中女性4例,男性2例,年龄40～78岁,平均62.3岁。临床表现无特异性,4例患者为体检时发现,1例患者有腹胀、消瘦症状,1例患者有腰背部疼痛症状。3例患者肿瘤位于脾脏,2例位于肝脏,1例位于腹膜后。肿瘤直径3.5～14cm（平均7.8cm）,肿瘤通常与周围组织分界较清晰。肿瘤组织由圆形、卵圆形及梭形细胞组成,细胞异型性不明显,呈编织状、漩涡状或席纹状排列,其间见多量炎细胞混杂。免疫表型：肿瘤细胞表达CD21/35、vimentin及Clusterin。EBER原位杂交显示瘤细胞散在阳性。所有患者均经手术完整切除肿瘤,术后随访3～48个月,6例中5例患者无瘤生存,1例患者随访4年后（无复发和转移）失访。结论 IPT-like FDCS是一种好发于女性的少见低度恶性肿瘤,最常见的发病部位是脾脏和肝脏,与EB病毒感染有关,其生物学行为相对惰性,手术完整切除肿瘤是最佳治疗方式。

初诊伴自身免疫性溶血性贫血的侵袭性非霍奇金淋巴瘤特征分析

目的:探讨首发伴自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)的侵袭性非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)的临床及实验室特征。方法:收集2013年9月至2016年7月苏州大学附属第二医院收治的6例首发伴AIHA的侵袭性NHL患者的临床资料,分析患者的发病情况、疾病进展、治疗及预后相关因素。结果:2013年9月至2016年7月苏州大学附属第二医院收治初发侵袭性NHL 155例,起病伴AIHA为6例(3.9%),其中男性3例,女性3例;中位年龄67(62~74)岁。首发症状包括:全身多发淋巴结肿大5例、发热3例、多发骨破坏并骨痛1例,均表现血红蛋白进行性下降。6例患者病理类型分别为:弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)3例,其中1例Bcl-2(+)Bcl-6(+)c-myc(+)三表达,1例CD5阳性;1例外周T细胞淋巴瘤-非特指型(peripheral T-cell lymphoma-not otherwise specified,PTCL-NOS);2例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITCL)。色素原位杂交(chromogenic in situ hybridization,CISH)法检测石蜡组织EB病毒基因(Epstein-Barr virus-m RNA,EBV-m RNA)(EBER)的表达:所检测5例均阳性。6例ECOG评分3~4分,Ann-Arbor分期均为Ⅲ~Ⅳ期,IPI评分4~5分,均为高危组。淋巴瘤病理确诊时中位血红蛋白56(34~79)g/L、中位网织红细胞比例6.7(0.2~21.0)%;6例患者Coombs试验均阳性:6例抗C3阳性(1:64~1:2 048)、4例抗Ig G阳性(±~1:16);检测3例血浆EBV-DNA拷贝数均增高。6例患者中:1例AITCL确诊后放弃治疗;其余5例应用CHOP样方案±利妥昔单抗联合化疗2~8个疗程(4例化疗间歇期加强的松治疗),其中2例DLBCL持续完全缓解(complete response,CR),总生存时间(overall survival,OS)分别为20、14个月,另1例DLBCL及1例PTCL-NOS经2个疗程化疗后骨髓抑制期继发严重肺部感染、心功能衰竭死亡,OS分别为1.5、2个月,1例AITCL化疗4个疗程后疾病快速进展死亡,OS为4.5个月。结论:侵袭性NHL首发伴AIHA多见于老年患者,EBV感染率高,溶血进展快、程度严重,化疗耐受性差,总体预后差,早期死亡率高。早期诊断及有效化疗可能改善预后。

原位杂交与免疫组化双染法在淋巴瘤诊断中的应用

目的在淋巴瘤病例中建立EB病毒编码小RNA(EBER)原位杂交与免疫组化双重染色法。方法使用双染试剂盒在石蜡切片上先做原位杂交再做免疫组化。结果双染成功后细胞和组织结构完整。原位杂交阳性细胞的胞核呈蓝黑色,免疫组化阳性细胞的胞膜呈红色,双阳性细胞的核与膜蓝红对比鲜明,背景清晰。结论此方法可直观地判断感染EB病毒的细胞属于B细胞还是T细胞,有助于淋巴瘤的诊断。