EBNA2基因真核表达载体的构建及表达产物的功能

目的:构建EB病毒核心抗原2(EBNA2)的真核表达载体,在真核细胞中表达,并检测其表达产物的功能.方法:应用DNA重组和PCR方法从质粒pSG5-EBNA2中亚克隆EBNA2的编码基因,插入到真核表达载体pCMV-HA中.应用脂质体的方法将重组质粒pCMV-EBNA2瞬时转染Cos-7细胞,通过Westernblot和免疫荧光方法检测EBNA2的表达.应用荧光素酶报告实验检测EBNA2蛋白的活性.结果:克隆EBNA2的编码基因,经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致.以含有EBNA2编码基因的真核表达载体瞬时转染Cos-7细胞,EBNA2基因的表达产物通过Westernblot和免疫荧光方法得到证实.荧光素酶报告实验显示所表达的蛋白具有转录激活活性.结论:成功构建EBNA2的真核表达载体,证实其在真核细胞Cos-7可以表达,并具有转录激活功能.

Epstein－Barr病毒核抗原Ⅱ（EBNA2）重组质粒pSG5－EBNA2－Hyg的构建及其在哺乳动物传代细胞中的表达

Ｅｐｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒，ＥＢＮＡ２短暂表达。

EBNA2在恶性淋巴瘤中的表达及意义

目的检测EB病毒核抗原-2(EBNA2)在恶性淋巴瘤标本中的表达,分析EBNA2在EB病毒(EBV)相关淋巴瘤发生中的意义。方法收集淋巴瘤组织蜡块50例和癌旁正常组织蜡块20例,采用免疫组织化学法检测组织中EBNA2的表达情况。结果 EBNA2在50例恶性淋巴瘤标本中的表达率为40. 0%(20/50),EBNA2在20例癌旁正常组织蜡块的表达率为0(0/50)。EBNA2在恶性淋巴瘤标本和癌旁正常组织中的阳性表达率的差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 EBNA2在恶性淋巴瘤标本中的表达上调,EBNA2的阳性表达率与肿瘤的组织类型及临床分期密切相关,而与淋巴瘤患者的性别和年龄无明显关系。

靶向EBV潜伏期基因EBNA2小干涉RNA系统的构建

[目的]构建携带靶向EBV核抗原EBNA2(EBV nuclear antigen,EBNA)的pSUPER.retroRNAi逆转录病毒载体,进而筛选出稳定产毒的细胞克隆。[方法]用DNA重组技术将60nt能转录产生靶向EBNA2小发夹RNA(smallhairpin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列定向插入逆转录病毒载体pSUPER.retro,并用限制性内切酶酶切和测序鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PheonixA,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆。[结果]重组逆转病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7167bp和281bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染的包装细胞经G418筛选获得能产生逆转录病毒的抗性细胞克隆,病毒滴度为2.5×104CFU/ml。[结论]成功构建和筛选出靶向EBV潜伏期基因EBNA2的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系,为深入探讨EBNA2基因的细胞转化和抗凋亡作用提供了实验基础。

Epstein-Barr病毒特异性T细胞对重组痘苗病毒表达LMP和EBNA2的靶细胞的识别

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以^(51)Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者及1例阴性健康者外周血单个核细胞(PBMC)的特异性T细胞杀伤效应。结果表明,用自身LCL激活的EB病毒特异性T细胞杀伤效应高峰出现在第14～28天;参与杀伤性细胞免疫反应的T细胞亚群主要是T3、T8阳性的细胞毒性T细胞,其对靶细胞的识别及杀伤受HLA-I的限制。用重组牛痘病毒感染的纤维母细胞作靶细胞或刺激细胞,有1例供者可接受LMP,另1例可接受EBNA2的刺激,并对相应的靶细胞产生特异性T细胞杀伤反应,表明EB病毒-LMP和EBNA2可能既是EB病毒特异性T细胞的刺激抗原,又是其识别的靶抗原。

EBNA2基因在霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨EB病毒核心抗原2(EBNA2)基因在EB病毒(EBV)阳性霍奇金淋巴瘤(HL)患者的表达及临床意义。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)技术检测36例EBV阳性HL患者的全血及蜡块标本中EBNA2基因的表达,分析其在EBV阳性HL中的临床意义。结果全血和蜡块样本中各检出EBNA2基因12例(33.3%)和3例(8.3%)。在全部HL患者全血标本中,EBNA2基因在男性和女性患者中各检出5例和7例;在Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ和Ⅲ~Ⅳ期患者中各检出4例和8例;在早期患者无和有不良预后因素组中各检出1例和3例;在晚期患者低危、中危和高危组中各检出3例、5例和0例;在结节硬化型、富于淋巴细胞型、混合细胞型、结节性淋巴细胞为主型和淋巴细胞减少型中各检出5例、3例、3例、1例和0例;在有和无巨大肿块患者中各检出0例和12例。结论EBV阳性HL患者全血标本中EBNA2基因的检测可能优于蜡块标本;EBNA2基因的表达与EBV阳性HL患者的性别、Ann Arbor分期、病理组织学类型、有无巨大肿块和风险评分差异均无统计学意义。

Epstein－Barr病毒核抗原Ⅱ（EBNA2）基因免疫的初步研究

利用基因免疫技术，将重组质粒ＰＳＧ５－ＥＢＮＡ２注入Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠肌肉中，于第２、４、８周检测鼠血清中抗－ＥＢ病毒核蛋白抗原Ⅱ的特异抗体，结果表明，８３％（５／６）的免疫小鼠产生特异抗体，且抗体滴度随时间变化增高。

EB病毒感染的免疫机制研究进展

1 EB病毒（EBV）的生物学特点EBV,又称人类疱疹病毒4型,类似于其他疱疹病毒,EBV基因组为双链线性DNA分子,是第一个被发现与人类肿瘤有关的DNA病毒。EBV在全球范围内感染率〉90%。EBV基因组具有高度的变异性,不同的变异体的致病力和分布不同。根据EBV核抗原（EBNA）,主要是EBNA2和EBNA3A、-B、-C基因序列的不同,将EBV分为1型和2型[1]。在西方和东南亚等国家EBV 1型多见,在非洲EBV两型均多见[2]。

EB病毒核抗原1和EB病毒核抗原2在干燥综合征患者唇唾液腺组织中的表达

目的:探讨EB病毒核抗原(Epstein-Barr virus nuclear antigen,EBNA)1和EBNA2蛋白在干燥综合征(sicca syndrome,SS)中的意义。方法:采用免疫组化Envision二步法测定EBNA1和EBNA2在32例原发性干燥综合征(p SS)患者、7例继发性干燥综合征(s SS)患者及4例正常人唇腺组织中的表达,测定积分吸光度值并进行定量分析。ELISA法检测SS患者血清中EBNA1-Ig G抗体的表达。结果:EBNA1和EBNA2在SS患者唇腺组织中浸润的浆细胞、B淋巴细胞呈阳性表达,在唇腺导管上皮细胞和腺泡上皮细胞呈中少量阳性表达,SS患者唇腺组织中EBNA1的阳性率为71.8%,EBNA2的阳性率为69.2%,而正常对照组未见EBNA1和EBNA2的阳性表达。结论:EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)可能参与了SS的发病,发病机制有待于进一步研究和探讨。

EB病毒编码的蛋白质在癌变过程中的作用

EB病毒是一种与人类肿瘤有密切关系的DNA病毒。在病毒感染的不同时期有不同病毒编码蛋白质的表达,因此研究所表达不同抗原的致癌作用将有助于研究EB病毒的致瘤机制。本文仅就EB病毒编码蛋白LMP1、EBNA1、EBNA2、BARF0和BARF1在癌变中作用的研究进展作一综述。

EBNA1BP2基因在肝癌形成过程中的表达及不同中医治法的调控作用

目的:探讨EBNA1BP2基因在肝癌形成过程中不同阶段的表达情况及不同中医治法对其在肝癌中表达的影响。方法:①以DEN诱发大鼠肝癌模型,分别观察造模4、8、16、20周后其肝脏组织病理形态学的改变以及EB-NA1BP2基因表达的差异。②应用基因芯片检测健脾益气、清热解毒、活血化瘀等常用中医治法对大鼠EBNA1BP2基因表达的影响。结果:①肝组织病理形态学观察结果表明,大鼠肝癌造模4、8周时肝组织主要表现为炎性病变,而到16周后呈现典型的增生病变,20周后已全部发展为肝细胞癌。②芯片结果显示,EBNA1BP2基因在DEN诱发大鼠肝癌形成过程中的表达量持续增加,至16周后形成表达高峰。③不同中医治法对EBNA1BP2基因在大鼠肝癌中具有不同程度的调控作用,其中健脾益气法下调作用较明显。结论:成功应用DEN诱发大鼠肝癌模型,EBNA1BP2基因在肝癌形成过程中表达持续增加,健脾益气法对其具有明显的下调作用。

系统性红斑狼疮患者抗Sm抗体与EB病毒核抗原-2表达的相关分析

目的探讨EB病毒(EBV)阳性系统性红斑狼疮(SLE)患者EBV核抗原-2(EBNA2)表达与抗Sm抗体的相关性。方法SLE患者44例,正常人43名作为对照。①采用PCR-Southern杂交技术检测两组外周血单个核细胞中EBV特异性DNA片段,EBV阳性患者进行RT-PCR和Southern杂交检测EBNA2的表达。②ELISA法检测EBV特异性IgM抗体。③免疫印迹法检测血清可提取核抗原(ENA)抗体。结果①SLE组32例EBV阳性,其中EBNA2mRNA阳性20例(活动期9例,稳定期11例),EBNA2mRNA阳性率在活动期和稳定期患者差异无显著性(P>0.05)。②SLE组EBV特异性IgM抗体阳性率为18.18%(8/44),对照组均为阴性,两组有显著性差异(P<0.05)。③SLE抗Sm抗体检出率与EBNA2 mRNA检出率呈正相关(r=0.4107,P<0.05)。结论EBNA2 mRNA表达可能在一定程度上参与SLE的发病和病情进展。

新疆汉族和维吾尔族鼻咽癌组织的PCR和免疫组化检测比较

目的 :了解新疆汉族维吾尔 (维 )族鼻咽癌 (NPC)发病因素的差别。 方法 :用 PCR与免疫组化技术对73例 NPC组织 (汉族 4 1例、维族 3 2例 )分别进行 EB病毒脱氧核糖核酸 (EBV-DNA )、EB病毒核抗原(EBNA2 )、潜伏膜蛋白 (LMP- 1 )检测。结果 :EBV- DNA阳性检出率汉族为 48.8% (2 0 /41 ) ,维族59.4% (1 9/32 ) ;EBNA2 表达汉族 43.9% (1 8/41 ) ,维族 43.8% (1 4 /32 ) ,两民族间无显著性差异(P >0 .0 5)。 LMP- 1表达 ,汉族 34.1 % (1 4 /41 ) ,明显低于维族 71 .9% (2 3/32 ) (P <0 .0 5)。在EBV- DNA阳性病例中 ,LMP- 1表达汉族为 40 .0 % (8/2 0 ) ,也明显低于维族 78.9% (1 5/1 9) (P<0 .0 5) ;EBNA2 表达两民族间无统计学差异 (P >0 .0 5)。结论 :新疆 NPC的发生与 EB病毒感染有相关性 ;LMP- 1在维族鼻咽上皮细胞恶性转化过程中 ,具有较汉族更重要的作用。