EBV阳性淋巴瘤组织中EBNA1基因多态性研究

EBV与多种人类肿瘤的发生有关，如伯基特淋巴瘤（Burkitt＇s lymphoma，BL）、霍奇金病（Hodgkin＇s disease， HD）、鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）以及胃癌等［1］。EBV潜伏感染和细胞转化能力被广泛认为是其致癌的基础，目前已知EBV多种潜伏期基因编码产物可引起细胞转化，其中核抗原家族基因（EBNAs）编码产物中的EBNA1是唯一在所有EBV相关肿瘤中均表达的蛋白，当病毒潜伏感染时，其在基因组的维持、复制和转录过程中发挥重要作用［2］。EBNA1重复序列可通过顺式作用方式抑制抗原递呈细胞对自身的加工处理，使CTL不能识别自身免疫表位从而逃避机体免疫应答［3］。EBNA1由N端（AA 1-89）、甘氨酸和丙氨酸重复序列（AA 90-327）以及C端（AA 328-641）组成，对EBNA1基因变异的分析多集中在C端。Bhatia等［4］和Gutiérrez等［5］根据突变热点AA487的变化及AA466-527之间的变异，将EBNA1基因分为P-ala、P-thr、V-val、V-leu和V-pro 5种亚型。本研究对EBV阳性淋巴瘤组织中EBNA1编码基因多态性进行了检测和分析，旨在探讨EBNA1多态性在EBV阳性淋巴瘤发生中的意义。

泛素与EB病毒核抗原1融合基因的DNA免疫研究

构建了EB病毒核抗原1(EBNA1)基因的表达质粒pCI-EBNA1和泛素(ubiquitin,Ub)与EBNA1融合基因的表达质粒pCI-Ub-EBNA1。间接免疫荧光和Westernblot分析表明,两重组质粒转染HeLa细胞后均能瞬时表达。两种质粒DNA肌肉注射免疫Balb/C小鼠后,分别检测小鼠血清抗EBNA1的抗体和特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,比较单基因与融合基因DNA免疫所诱生免疫应答的强度。结果显示:二者诱生抗体的效率无明显差别,但泛素的融合使得针对EBNA1的特异性CTL反应明显增强。

人肺癌组织中Ki67核抗原、p53和MDR-1基因表达的临床病理特征观察

目的:观察65例肺癌组织中Ki67的细胞增殖状态和p53表达与肺癌组织生物学特征,探讨多药耐药基因MDR-1变化在肺癌治疗中的意义和价值。方法:应用免疫组化方法观察65例肺癌组织标本中Ki67、p53表达和MDR-1变化水平。结果:(1)在43例鳞癌组织中Ki67阳性表达均值为(47.91±23.22)%,腺癌为(34.8±19.44)%,癌细胞高分化组Ki67阳性表达均值低于中、低癌细胞分化组。在不同TNM分期组Ki67阳性表达均值没有明显差异。(2)43例鳞癌中有35例p53表达阳性(81.4%),在22例腺癌中有13例(59.1%)p53表达阳性。癌细胞高分化组p53有较高的阳性表达。不同TNM分期p53表达阳性率没有明显差异。(3)TNM分期Ⅲ期MDR-1阳性表达率比Ⅰ和Ⅱ期低,但在不同癌细胞分类组和不同癌细胞分化组间MDR-1阳性表达率无明显差异。结论:Ki67、p53和MDR-1基因免疫组化研究对临床肺癌诊断和预后判断可提供有效的细胞增殖标记和细胞分子学信息。

EBNA1对EBV相关胃癌细胞中E2F1表达的影响

目的探讨EB病毒(EBV)相关胃癌(EBVaGC)细胞中EBV编码的核抗原1(EBNA1)对E2F转录因子1(E2F1)表达的调控作用,并分析EBNA1和E2F1在胃癌细胞的表达情况。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)以及Western blotting方法,检测EBVaGC和EBV阴性胃癌(EBVnGC)细胞中EBNA1和E2F1的mRNA和蛋白表达水平;选取两种EBVnGC细胞BGC823和SGC7901,建立EBNA1稳定表达的细胞模型,命名为BGC823-EBNA1和SGC7901-EBNA1,采用qRT-PCR方法和Western blotting方法检测两种细胞中E2F1 mRNA和蛋白表达水平。结果qRT-PCR和Western blotting结果显示,EBNA1只在EBVaGC细胞中表达。EBVaGC细胞的E2F1 mRNA表达水平明显高于EBVnGC细胞,差异有统计学意义(t=13.60,P<0.01);而两种细胞的E2F1蛋白表达水平差异无显著性(P>0.05)。在EBVnGC细胞中稳定过表达EBNA1后E2F1的mRNA和蛋白表达明显上调。结论EBV编码EBNA1诱导E2F1表达上调,提示E2F1可能在EBVaGC的发生发展中起着重要作用。靶向EBNA1/E2F1途径可能为EBVaGC病人的治疗提供新的治疗靶点。

乙型肝炎病毒adr NC-1DNA的核苷酸全顺序分析与乙型肝炎病毒DNA的结构研究

乙型肝炎是严重影响人类健康的传染病,其判断感染的免疫标志是测定表面抗原(HBsAg),核心抗原(HBcAg),e抗原(HBeAg)和它们的相应抗体。DNA位于病毒的中心,与HBcAg,HBe-Ag组成核粒, HBsAg存在于外壳上,HBsAg带有特异性的抗原决定簇,是病毒分型的依据。在我国、日本及东南亚流行的以adr亚型为主。近年来,由于基因工程研究的广泛开展。

鸡传染性支气管炎S1蛋白的基因工程疫苗研究进展

鸡传染性支气管炎（IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,给养鸡业带来极大的经济损失。IBV基因编码的主要结构蛋白为核衣壳蛋白（N）、表面纤突蛋白（S）、小膜蛋白（E）和膜蛋白（M）,其中S1蛋白是主要的保护抗原蛋白,同样是当前疫苗研究的重点。本文就表达S1蛋白的IBV疫苗研究进展作以综述。

ARID1A､PIK3CA､Ki-67在不同病变级别､浸润性膀胱尿路上皮癌中的表达及对肿瘤复发的影响

目的探讨AT丰富结合域1 A(ARID1 A)､磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α基因(PIK3 CA)､细胞增殖核抗原67(Ki-67)在不同病变级别､浸润性膀胱尿路上皮癌(BUC)中的表达情况及对肿瘤复发的影响。方法选取2018年5月至2019年8月保定市第二医院收治的107例BUC患者作为研究对象。均通过手术或膀胱镜活检取癌组织,并取其中28例患者的癌旁正常组织标本(距癌旁>2cm)作为对照。对比不同组织中ARID1 A､PIK3 CA､Ki-67蛋白表达。治疗后随访6个月,根据是否复发将患者分为复发组(n=27)和未复发组(n=80),分析BUC复发的影响因素,以及ARID1 A､PIK3 CA､Ki-67蛋白表达与病变分级､临床分期的关系。结果BUC患者癌组织ARID1 A蛋白阳性率低于癌旁正常组织,PIK3 CA､Ki-67蛋白阳性率高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);复发组年龄､病变级别､临床分期､病灶个数､PIK3 CA蛋白阳性表达率与未复发组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);两组ARID1 A､Ki-67蛋白阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);随着年龄､病变级别､临床分期､病灶个数､PIK3 CA蛋白阳性表达率升高,BUC患者复发风险增加(P<0.05);BUC患者病变级别､临床分期越高,PIK3 CA､Ki-67蛋白阳性表达率越高,ARID1 A蛋白阳性表达率越低(P<0.05)。结论BUC患者癌组织中ARID1 A､PIK3 CA､Ki-67蛋白表达明显异常,且与病变级别､临床分期密切相关,其中PIK3 CA蛋白阳性表达可明显增加复发率。

大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎模型的实验研究

目的 :探讨复制 SD大鼠抗 Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型的方法 ,观察其临床病理特点和肾小球系膜区细胞增殖核抗原 (PCNA)、凋亡调节基因 Bcl- 2的表达。方法 :用 SD大鼠胸腺细胞免疫新西兰白兔 ,制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 (Anti- Thy1.1serum,ATS) ,再将 ATS经尾静脉注射给 SD大鼠 ,诱导其发生系膜增生性肾炎(Ms PGN)。每日检测尿蛋白 ,用 HE和 PASM染色法观察肾小球系膜增生程度 ,用免疫组化 L SAB法检测系膜区 PCNA及 Bcl- 2的表达。结果 :ATS效价可达 1∶ 32 0 0 ;诱导大鼠 Ms PGN的 ATS最适用量为 :0 .0 1m L/ g体重 ;大鼠 Ms PGN的临床特点为大量蛋白尿 ;病理特点为肾小球系膜细胞增生 ;增生期系膜区 PCNA、Bcl- 2的表达增高。结论 :用 ATS可诱导典型的、稳定的大鼠 Ms PGN实验模型 ;免疫反应和细胞凋亡受抑制参与了肾小球系膜增生的发病机制。

以EB病毒为靶的基因治疗策略

EB病毒与多种人类肿瘤的发生有关 ,根据 EB病毒感染的特点 ,近年来发展了以 EB病毒为靶的基因治疗的基本策略。本文综述了这一研究领域的最新进展。

HIF-1α、VEGF、MMP-9、Ki-67在原、复发脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨缺氧坏死因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核增殖抗原表达基因(Ki-67)在原、复发人脑胶质瘤组织中的表达及其关系。方法用免疫组织化学方法检测10例正常脑组织和30例同一患者原发、复发胶质瘤脑组织中HIF-1α、VEGF、MMP-9、Ki-67的表达,并研究其与胶质瘤复发之间的关系。结果HIF-1α、VEGF、MMP-9、Ki-67随胶质瘤的恶性程度升高而增加(P<0.05),且在复发胶质瘤中的阳性表达程度较原发肿瘤有所增强(P<0.05)。结论 HIF-1α、VEGF、MMP-9、Ki-67可作为评价胶质瘤复发的生物学指标。

缺氧诱导因子-1α 乳腺癌易感基因1及细胞增殖核抗原在子宫内膜癌中的表达及其与患者预后的相关性

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)及细胞增殖核抗原(Ki-67)在子宫内膜癌中的表达及其与患者预后的相关性。方法 选取2018年3月—2020年3月乐清市开发区同乐医院和温州市中心医院收治的62例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组,选取同期子宫内膜增生患者60例为子宫内膜增生组,另选取同期参加体检的长期月经失调患者63例为对照组。检测HIF-1α、BRCA1及Ki-67在子宫内膜癌中的表达,并分析其与子宫内膜癌患者不良预后的相关性。结果 子宫内膜癌组、子宫内膜增生组患者的HIF-1α[(9.27±1.46)、(7.29±1.33)]、Ki-67[(8.36±2.04)、(2.07±0.96)]表达高于对照组[(3.71±0.28)、(1.05±0.13)],差异均有统计学意义(子宫内膜癌组t=29.679、28.335,子宫内膜增生组t=20.888、8.335,均P<0.05);且子宫内膜癌组高于子宫内膜增生组,差异均有统计学意义(t=7.823、21.672,均P<0.05)。子宫内膜癌组、子宫内膜增生组患者的BRCA1[(1.24±0.11)、(3.25±0.74)]表达低于对照组(8.71±2.71),差异均有统计学意义(t=-27.070、-18.490,均P<0.05);且子宫内膜癌组低于子宫内膜增生组,差异有统计学意义(t=-21.818,P<0.05)。HIF-1α表达与子宫内膜癌FIGO分期、肿瘤组织学分级、肌层浸润深度及淋巴结转移均相关,差异均有统计学意义(均P<0.05);BRCA1、Ki-67表达与子宫内膜癌FIGO分期、肿瘤组织学分级及淋巴结转移有相关性,差异均有统计学意义(均P<0.05);但BRCA1、Ki-67表达与子宫内膜癌肌层浸润深度均无相关性,差异均无统计学意义(均P>0.05)。子宫内膜细胞组织中BRCA1表达和子宫内膜癌患者的不良预后呈负相关关系(r=-0.548,P<0.05);而子宫内膜细胞组织中HIF-1α、Ki-67表达和子宫内膜癌患者的不良预后呈正相关关系(r=0.861、0.682,均P<0.05)。结论 HIF-1α、BRCA1及Ki-67蛋白表达和子宫内膜癌患者的病理特征、预后具有相关性,可为子宫内膜癌发病、进展及预后评估提供依据。

扁平疣不同时期病毒核壳蛋白L1抗原表达

扁平疣存在着明显的自愈现象,并已证明扁平疣自愈过程是以T细胞为主的免疫反应[1].为了解人类乳头瘤病毒(HPV)抗原在该过程中的表达情况,我们对不同时期的皮损用免疫组化方法对HPV的核壳蛋白主要抗原L1的变化进行观察,现将结果报道如下.

抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达

目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(singlechainFv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达。方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1ScFv基因pET28(a+)表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物。结果3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345bp,VL基因为309bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28000,并具有与抗原结合活性。结论成功构建了抗HnRNPA2/B1ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础。

含EB病毒核抗原1重组腺病毒的构建及其在小鼠中免疫效果研究

构建含EB病毒核抗原1(ebna1)重组腺病毒疫苗防治鼻咽癌,并为鼻咽癌疫苗的研究提供药效学资料。PCR法扩增B95-8细胞株中ebna1的C-端部分片段,EcoRI和BglⅡ酶切后插入pDC316穿梭质粒,ebna1片段测序比对正确后,与腺病毒骨架质粒pBHG共转染293细胞。收集病变后细胞,通过流式细胞仪和Western blot检测EBNA1在293细胞中的表达。电镜下观察所获得的病毒颗粒大小,TCID50法确定重组腺病毒滴度。以2×108 VP/只的rAd-ebna1免疫BALB/c小鼠。在免疫结束后的第1、2、4和8周检测小鼠体内EBNA1特异性细胞免疫应答的水平变化。结果显示,经PCR扩增获得约900bp ebna1目的片段,测序结果与标准株序列一致,质粒共转染293细胞后,细胞出现病变,获得含EB病毒核抗原1重组腺病毒(rAd-ebna1),流式细胞仪和Western blot检测结果证实,ebna1在细胞中正确转录表达,收获病毒二代滴度可达108 TCID50/mL。rAd-ebna1免疫小鼠后,能够激活EBNA1的CD4+T细胞特异性细胞免疫应答。本实验成功构建了含ebna1片段的重组腺病毒,并具激活CD4+T细胞免疫应答活性。

调脂通脉颗粒对ApoE基因敲除小鼠主动脉弓NF-κB、ICAM-1及LFA-1的影响

目的探讨调脂通脉颗粒对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉弓核因子-κB(NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的影响。方法 6周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组、血脂康组、调脂通脉颗粒低、中、高剂量组,每组8只,另取C57BL/6J小鼠8只作为正常对照组。高脂饮食结合药物饲养12周,血清学检测血脂变化,主动脉弓根部石蜡切片,HE染色观察组织形态学变化,免疫组化法检测NF-κB、ICAM-1、LFA-1表达。结果与正常对照组比较,模型组、血脂康组、调脂通脉颗粒各组小鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平均显著升高(P<0.05),模型组、调脂通脉颗粒低剂量组小鼠血清甘油三酯(TG)水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,调脂通脉颗粒中、高剂量组、血脂康组TG水平显著降低(P<0.05)。HE染色表明模型组主动脉内膜增厚伴易损斑块形成,血脂康组及调脂通脉颗粒高剂量组内膜增厚伴稳定斑块形成。免疫组化染色显示,与正常对照组比较,模型组、血脂康组、调脂通脉颗粒各组主动脉弓NF-κB、ICAM-1及LFA-1表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,调脂通脉颗粒高剂量组主动脉弓NF-κB、ICAM-1及LFA-1表达明显降低(P<0.05)。结论调脂通脉颗粒可降低血清TG及主动脉弓NF-κB、ICAM-1及LFA-1的表达,从而减缓动脉粥样病变。

胃癌患者癌组织中EB病毒感染相关性分析

目的 调查唐山地区胃癌组织中EB病毒的感染状况,以分析EB病毒相关胃癌(GC)的临床病理学特征,以及EB病毒在胃癌形成过程中的作用。方法 取自唐山市工人医院(130例)、开滦医院(5 7例)和唐山市卫生学校附属医院(15例)病理科2 0 0 1～2 0 0 3年储存的胃癌患者手术切除后石蜡包埋的组织标本共2 0 2例。标本经切片和常规脱蜡处理后提取DNA ,经PCR进行βactinDNA检测,阳性标本用PCR法检测EB病毒核抗原1(EBNA1)DNA。结果 2 0 2份标本βactinDNA阳性16 6例,阳性率为82 % ;16 6例标本中EBNA1PCR阳性14例,阳性率为8 .4 % ;16 6例βactinDNA阳性的胃癌标本中,腺癌15 0例,非腺癌16例,残胃癌15例。经EBNA1PCR检测EB病毒DNA阳性例数在腺癌、非腺癌和残胃癌中分别为14 ,0 ,5 ,阳性率分别为9 .3% ,0 %。33 .3%。结论 EB病毒感染在唐山地区胃癌形成过程中可能起到一定的作用。

微生物学

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定；含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒联合免疫的研究；我国HIV-1感染者耐药突变的流行性研究；祛毒增宁胶囊治疗艾滋病的疗效观察；病毒感染相关基因微阵列的制备及其在HBV感染应答基因筛选中的应用；HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较；人乳头状瘤病毒协同“钴照射促进食管上皮细胞恶性转化；麻疹病毒全长cDNA构建及其感染性的研究；中国流行性乙型脑炎病毒分子生物学特性研究；在MDCK细胞上高产的乙型流行性感冒病毒株的筛选及其全基因组克隆；适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体的构建；肠道病毒ECHO13中国分离株的基因特征；泛紊与EB病毒核抗原1融合基因的DNA免疫研究；反转录病毒MSCV介导汉坦病毒核蛋白基因在NIH3T3细胞中整合和表达；抗HEV嵌合抗体的构建及在CHO细胞中的表达；黏液型肺炎链球菌的表型和遗传学特征；一种新型融合毒素IL15-PE△293的构建与体外活性测定。

乙型肝炎

干扰素a1b联合氧化苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎62例对照观察，慢性乙型肝炎患者HBV DNA YMDD变异的检测及意义，慢性乙型肝炎患者HBV基因型及其临床意义，兰州地区慢性乙型肝炎与人类白细胞抗原-DRB1等位基因关系的初探，流式细胞仪检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞CD58^+细胞百分率的研究，九代清源口服液联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床实验研究。

TSHR,ki-67,TTF-1,Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达和意义

目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)、增殖细胞相关核抗原指数(ki-67)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在单纯甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)以及正常甲状腺组织中的表达及意义。方法选取2018年9月~2019年6月在我院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的患者,包括单纯甲状腺乳头状癌16例、桥本氏病合并甲状腺乳头状癌24例,结节性甲状腺肿32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR,TTF-1,Pax-8,ki-67的免疫组织化学染色。显微镜下观察染色结果,TSHR判读采用Tanaka定量积分法,ki-67,TTF-1,Pax-8判读方法参见文献。应用SPSS21.0软件对数据进行统计学分析,有序多分类变量采用Wilcoxon秩和检验。结果 TSHR与TTF-1在PTC组中的表达低于在NG组(P=0.000,P=0.002)中的表达,且与是否同时患有HT无关(P=0.537,P=0.556);ki-67在PTC组中的表达显著高于在NG组中的表达(P=0.000),且有淋巴结转移的PTC中,ki-67的表达更高(P=0.004),与是否患有HT无关(P=0.285);Pax-8的表达在各组中无显著差异。结论 TSHR与TTF-1在PTC中的表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,ki-67在PTC中的表达高于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无显著差异。