端粒酶抑制因子X1过表达对人食管癌EC1细胞增殖及凋亡的影响

目的探究端粒酶抑制因子X1(PinX1)对人食管癌EC1细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人食管癌细胞系EC1细胞株,并将其分为空白对照(NG)组(空白对照细胞)、pcDNA组(转染阴性对照质粒)、pcDNA-PinX1组(转染PinX1过表达质粒)、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组(加入信号通路抑制剂)。采用实时荧光定量PCR法检测各组PinX1 mRNA的表达水平。分别采用CCK-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖、凋亡情况。采用荧光探针法检测各组活性氧簇(ROS)水平。采用蛋白质印迹法检测各组腺苷酸激活蛋白激酶/信号转导与转录激活因子3(AMPK/STAT3)信号通路相关蛋白的表达水平。结果经成功转染细胞后,与NG组、pcDNA组比较,pcDNA-PinX1组细胞的增殖抑制率、凋亡率、ROS水平、p-AMPK/AMPK均升高,而p-STAT3/STAT3均降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与pcDNA-PinX1组比较,NAC组细胞的增殖抑制率、凋亡率、ROS水平、p-AMPK/AMPK均降低,p-STAT3/STAT3升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论PinX1过表达可抑制人食管癌EC1细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进ROS/AMPK/STAT3信号通路活化来实现。

沉默STAT3基因对人食管癌EC1细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建STAT3靶向短发夹RNA(shRNA)质粒,研究其对人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性。方法构建STAT3的siRNA真核表达载体pSUPER-EGFP-STAT3,稳定表达该质粒的细胞为实验组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测STAT3mRNA和蛋白变化。结果裸鼠体内实验显示,实验组肿瘤增长受到明显抑制;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明实验组STAT3mRNA和蛋白表达下调。结论shRNA沉默STAT3基因能抑制人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调STAT3mRNA和蛋白的表达,为食管癌的基因治疗提供了新的靶点,开辟了新的思路。

全反式维甲酸联合LY294002对食管癌EC1细胞增殖、迁移及PI3K、MMP-2表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)、磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)抑制剂LY294002单独或联合作用对食管癌EC1细胞增殖、迁移及PI3K和MMP-2表达的影响。方法:将常规培养的EC1细胞随机分为ATRA组、LY294002组、ATRA+LY294002组和对照组4组,采用CCK-8检测各组细胞的增殖情况,通过划痕实验测定各组细胞的迁移能力,采用RT-PCR和Western blot方法检测各组细胞中PI3K及MMP-3 mRNA和蛋白的表达情况。结果:作用24、48和72 h后,ATRA+LY294002组的细胞增殖抑制率均高于其他2组(P<0.05);作用24 h后,ATRA+LY294002组细胞迁移能力均低于其他3组(P<0.05);作用48 h后,ATRA+LY294002组细胞PI3K及MMP-2 mRNA和蛋白的表达量均低于其他3组(P<0.05)。结论:ATRA联合LY294002可协同抑制EC1细胞的增殖、迁移和PI3K、MMP-2的表达,进而可能协同抑制肿瘤血管生成。

三氧化二砷对人食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对食管癌离体肿瘤细胞EC-1的放射增敏作用,并探讨其机制。方法利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,观察As2O3对食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用。流式细胞法观察As2O3对细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果 As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应,3μmol/L As2O3作用48 h的放射增敏比为1.285。药物作用后G2/M期细胞比例增加,G0/G1期和S期细胞比例减少;细胞凋亡指数增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应。放射增敏的机制可能与As2O3抑制EC-1细胞的修复能力、使细胞周期阻滞在G2/M期、G0/G1期和S期细胞减少以及凋亡增加有关。

顺铂对TRAIL诱导EC1细胞凋亡的增敏效应

目的:观察顺铂(cDDP)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导EC1细胞凋亡的增敏效应。方法:MTT法检测单用TRAIL(10、50、100、500和1000μg/L)或cDDP(1.0、2.0、4.0、10.0和20.0mg/L)分别作用24、48和72h对EC1细胞增殖的影响。流式细胞术检测100μg/LTRAIL和10.0mg/LcDDP单用或联用48h对EC1细胞凋亡和细胞周期的影响,并设空白对照组。结果:单用TRAIL作用24、48和72h对EC1细胞增殖影响不明显(P>0.05),单用cDDP对EC1细胞增殖有抑制作用(P<0.05)。单用TRAIL对EC1细胞凋亡率无影响(FTRAIL=5.836,P=0.250),而单用cDDP可提高EC1细胞凋亡率(FcDDP=20.763,P=0.041),二者联合有交互作用(F交互=57.422,P<0.001)。单用TRAIL和cDDP对EC1细胞周期无影响,二者联用后G0/G1和S期细胞比例下降,G2/M细胞比例上升(P均<0.001)。结论:cDDP可增加EC1细胞对TRAIL的敏感性,二者联用可诱导EC1细胞凋亡,并诱导其在G/M期阻滞。

中药“龙泉复方”的不同配伍对肿瘤细胞系HepG-2和EC-1增殖的影响

通过MTT（四甲基偶氮唑盐）法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定＂龙泉复方＂有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明：对抑制HepG-2细胞增殖有效作用的浓度：七味单方（马钱子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀）浸膏混合物和龙葵单方浸膏均〈125μg/mL,七味药物复方总浸膏为250~1000μg/mL;对抑制EC-1细胞增殖有效作用的浓度：三味药物混合浸膏（马钱子,喜树果、青黛提取的浸膏的混合物）〈50μg/mL和150~400μg/mL,七味单方混合浸膏〈25μg/mL和50~400μg/mL,喜树果单方浸膏为25μg/mL和50~200μg/mL;3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度依次为：50~100、25~50、25~50μg/mL.通过对EC-1荧光染色观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度：七位单方浸膏混合物为5~10μg/mL,三味药复方混合浸膏为10~25μg/mL,喜树果约为50μg/mL.研究结果提示,药物浓度范围和细胞系的不同导致其效果也不尽相同,临床应据具体情况调整,使之用药少效果佳.

柚皮苷调控miR-199a-5p/ECE1分子轴促进骨损伤修复

目的探讨柚皮苷通过调控mi R-199a-5p/ECE1分子轴对骨损伤修复的影响。方法 Western blotting检测ECE1及成骨分化相关标志物的表达水平;RT-qPCR检测mi RNAs相对表达水平;双荧光素酶报告基因验证mi R-199a-5p和ECE1靶向关系;MTT检测MC3T3-E1细胞增殖活力;碱性磷酸酶(ALP)检测MC3T3-E1细胞成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞矿化情况。结果柚皮苷处理显著促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化指标Runx2、OPN、BMPs、OC等的表达、ALP活性以及细胞钙化能力水平(P<0.01)。其中20ng/m L浓度处理的效果最优。RT-qPCR检测结果显示,柚皮苷能显著上调mi R-199a-5p的表达水平。双荧光素酶报告基因检测结果表明ECE1是mi R-199a-5p的一个靶基因;并且,mi R-199a-5p靶向下调ECE1的表达。进一步实验表明,敲降mi R-199a-5p显著降低柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化的促进作用(P<0.01);敲降ECE1显著促进了柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和生物矿化能力的促进作用(P<0.01);柚皮苷处理加同时敲降mi R-199a-5p和ECE1组MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化能力与柚皮苷组无显著差异(P>0.05)。对细胞成骨分化标志的检测也证明了上述结果。由此可知,柚皮苷通过上调mi R-199a-5p对ECE1靶向下调作用,进而促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化和矿化能力。结论柚皮苷处理显著促进了MC3T3-E1细胞的成骨分化水平;这种作用是通过上调mi R-199a-5p/ECE1分子轴实现的。

HP根治前后胃粘膜Gas、SS、SP变化及G、D、EC_1细胞图像定量研究

该研究旨在探讨HP感染的慢性胃炎和消化性溃疡患者HP根治前后胃粘膜中胃肠激素Gas、SS、SP及G、D、EC1细胞变化和其相关性。方法 :1997年 3月～ 1999年 12月对 10 2例HP感染的病人 ,HP根治前后分别用放射免疫法及免疫组化染色图像定量分析Gas、SS、SP含量和G、D、EC1细胞密度、灰度。结果 :HP阳性的三组病人经药物治疗根治后胃粘膜Gas含量均较治疗前明显降低 (P <0 .0 1) ,SS、SP含量较治疗前升高 (P<0 .0 1,P <0 .0 5 )。图像定量分析示HP根治前后胃粘膜G、D、EC1细胞密度显著降低 (P <0 .0 5 ) ,D、EC1细胞灰度增加 (P <0 .0 5 )。结论 :三组病人HP根除后胃粘膜Gas减少 ,G细胞灰度降低 ,SS、SP升高 ,D、EC1细胞灰度增加 ,细胞分泌颗粒变化与粘膜相应激素变化呈正相关。提示HP感染干扰了这些激素分泌释放的调控 ,可能是HP相关性胃炎和消化性溃疡的发病机制之一。根除HP后SS、SP升高 ,Gas降低纠正HP感染所致的这些激素分泌释放紊乱 ,可能是HP根除后溃疡复发率降低的原因之一。在HP根除前SP ,EC1细胞灰度降低 ,根除后升高 ,提示SP抑制胃泌素分泌释放 ,而对生长抑素无抑制作用 ,具有胃粘膜保护功能。

曲古菌素A对食管癌细胞系EC1细胞凋亡的影响

目的:探讨曲古菌素A(TSA)对食管癌EC1细胞凋亡的影响。方法:用DMSO(对照组)和0.3、0.5及1.0μmol/L的TSA处理EC1细胞24 h,用Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,West-ern Blot检测4组细胞中Bax及Bcl-2表达的变化。结果:对照组、0.3、0.5及1.0μmol/L TSA组作用24 h后,EC1细胞凋亡率分别为(2.18±0.37)%、(2.96±0.34)%、(7.41±1.01)%和(14.03±1.23)%,Bax蛋白表达水平分别为(0.42±0.23)、(0.45±0.11)、(1.16±0.28)和(1.89±0.30),Bcl-2蛋白表达水平分别为(1.15±0.14)、(1.11±0.15)、(0.59±0.06)和(0.40±0.07),4组间3指标差异均有统计学意义(F=211.96,25.12和33.68,P均<0.001),随TSA作用浓度的增加,EC1细胞凋亡率、Bax蛋白表达均增加,Bcl-2表达减少。结论:一定剂量的TSA可以诱导EC1细胞凋亡,凋亡的发生可能与Bax表达增加和Bcl-2表达减少有关。

Juglone联合顺铂抑制食管癌EC1细胞增殖的研究

目的研究Pinl抑制剂Juglone与化疗药物顺铂(CDDP)单独及联合使用对食管癌EC1细胞增殖的抑制作用。方法使用不同浓度Juglone、CDDP或者两药联用处理食管癌EC1细胞后,应用MTT法测定两药单独或联合使用对食管癌EC1细胞增殖的影响,使用流式细胞仪检测其对EC1细胞周期的影响。结果 Juglone对EC1细胞的生长有明显的抑制作用,48 h细胞抑制率从11.5%上升到50.7%,具有显著的剂量效应。Juglone可造成食管癌细胞在G2/M+S期的阻滞;CDDP可增加EC1细胞对于Juglone的敏感性,CDDP与Juglone合用,明显提高了EC1细胞的生长抑制率。结论 Juglone与CDDP联合能显著抑制食管癌EC1细胞的增殖。

雷帕霉素对食管癌EC1细胞mTOR表达及细胞生长与凋亡的影响

目的:探讨雷帕霉素对人食管癌EC1细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达及细胞生长、凋亡的影响。方法:采用低、中、高浓度的雷帕霉素(100、150、200nmol/L)分别作用于EC1细胞24、48、72h,同时设溶剂对照组和空白对照组,用免疫细胞化学及原位杂交法检测EC1细胞中mTOR蛋白与mRNA的表达,MTT法检测EC1细胞的增殖情况,TUNEL法检测各组作用24h后细胞凋亡情况。结果:雷帕霉素作用24、48与72h,5组细胞mTOR蛋白与mRNA的表达差异均有统计学意义(mTOR蛋白:F=29.273、34.328、41.571,P均<0.001;mTORmRNA:F=34.969、53.614、36.943,P均<0.001),细胞生长抑制率差异亦有统计学意义(F=566.732、51.768和186.022,P均<0.001);雷帕霉素低、中、高浓度组EC1细胞mTOR蛋白与mRNA的表达均低于各对照组,且其表达随雷帕霉素浓度的增加及作用时间的延长而减弱(P<0.05)。雷帕霉素低、中、高浓度组细胞生长抑制率均高于各对照组,且随雷帕霉素浓度的增加和作用时间的延长而升高(P<0.05)。作用24h,5组细胞凋亡指数(AI)差异有统计学意义(F=524.563,P<0.001),雷帕霉素低、中、高浓度组AI均高于各对照组,且随雷帕霉素浓度的增加而增高(P<0.05)。结论:雷帕霉素可能通过抑制EC1细胞mTOR蛋白与mRNA的表达从而抑制EC1细胞的增殖,促进细胞凋亡。

地塞米松和1,25-(OH)_2D_3对EC1细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察地塞米松(DEX)和1,25-(OH)2D3及2药联用对食管鳞状细胞癌EC1细胞增殖及周期的影响。方法:分别用10-7mol/LDEX与10-7mol/L1,25-(OH)2D3以及同种浓度2药联合处理EC1细胞48、72和96h,并设溶剂对照组。采用MTT法检测细胞增殖情况及流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:1,25-(OH)2D3单独应用具有抑制EC1细胞增殖的作用(F1,25-(OH)2D3=51.185,P<0.001);DEX单独应用具有阻滞细胞周期的作用(FDEX=8.170,P=0.009)。DEX、1,25-(OH)2D3及时间3种因素两两间均存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX=11.017,P=0.003;F1,25-(OH)2D3×时间=3.668,P=0.041;FDEX×时间=7.887,P=0.002。G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX=12.381,P=0.002;F1,25-(OH)2D3×时间=6.583,P=0.005;FDEX×时间=5.096,P=0.014),且两药间提示存在拮抗作用。未发现3因素之间存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.512,P=0.606。G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.410,P=0.668)。结论:DEX和1,25-(OH)2D3单独及联合使用能对EC1细胞增殖起抑制作用,且使EC1细胞周期阻滞在G0/G1期。

ISO 362—1:2007与ECE R51/03系列差异及发展动向分析

阐述了国际标准化组织制定加速行驶车外噪声标准ISO 362—1:2007与联合国欧洲经济委员会制定的加速行驶车外噪声法规ECE R51/03系列在车辆条件、参考点定义及数据处理方面的具体差异,并利用M2≤3.5 t类车辆进行了试验数据验证。分析了2个标准体系差异产生的背景,并结合ISO与ECE提交的最新修订草稿,介绍了2个标准体系的发展动向。

含氟取代苯类化合物lgK_(ow)和-lg1/EC_(50)的QSPR研究

采用Gaussian 98程序,在B3LYP/6-311G**和HF/6-311G**2种水平上全优化计算了24个含氟取代苯化合物的分子结构,基于得到的分子结构描述符,分别建立了用于预测含氟取代苯化合物正辛醇/水分配系数(lgKow)和毒性(-lg1/EC5)0的模型,预测lgKow的模型包含3个变量(偶极矩(μ),总能量(TE)和热能修正值(Et)h),预测-lgl/EC50的模型包含2个变量(分子中原子最负的电荷(q-)和零点振动能(ZPE))。用交叉验证法对模型的稳定性进行了验证(q分别为0.8480和0.9154),并用t-检验和变异膨胀因子(VIF)对2个模型中各变量的显著性和自相关性进行了检验。预测-lg1/EC50的模型的预测能力优于溶剂化能参数得出的模型。

转录因子8在食管癌细胞EC1的表达及其对EC1细胞迁移侵袭的影响

目的:研究食管癌细胞EC1中转录因子8(transcription factor 8,TCF8)的表达对EC1细胞迁移侵袭的影响。方法:通过共聚焦显微镜观察EC1细胞中TCF8的表达;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)作用于EC1细胞24 h后,Western blot法检测NF-κBp65、TCF8和E-cadherin蛋白表达变化,划痕损伤和transwell实验检测对细胞转移和侵袭的影响。结果:TCF8表达于EC1细胞核,PDTC可以导致EC1细胞中NF-κBp65、TCF8表达降低,而E-cadherin表达增高;PDTC组细胞迁移距离和穿过的细胞数明显低于对照组。结论:食管癌细胞EC1中表达TCF8,下调TCF8可上调E-cadherin,抑制EC1细胞的迁移侵袭,为阐明食管癌侵袭转移的分子机制提供理论依据,为临床治疗提供分子靶点。

食管癌细胞系EC-1和EC-109染色体核型分析

比较人类正常体细胞染色体核型和食管癌细胞系EC-1和EC-109染色体核型,了解食管癌细胞系EC-1和EC-109的细胞遗传特征,为研究食管癌的癌变机理提供了方向.利用秋水仙素、KCl低渗液处理细胞,经卡诺氏固定液固定制备染色体,滴片,进行Giemsa染色、镜检、选取染色体长度适中且分散程度好的染色体拍照,采用Adobe Photoshop软件进行染色体核型分析.结果表明:与正常人类细胞比较,食管癌鳞状上皮细胞系EC-1和EC-109的染色体核型出现明显异常,染色体核型分析为亚三倍体,众数为46～68条.食管癌鳞状上皮细胞系EC-1和EC-109的细胞遗传特征有显著的异常改变,细胞恶性转化特质明显.它们是研究癌变机理的良好细胞模型,可用于研究CNV与癌变的关系等.

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。

HP根治前后ASCG胃肠激素及G、D、EC_1细胞变化的研究

目的 :探讨HP感染的慢性活动性浅表性胃炎 (ASCG)患者HP根治前后胃粘膜中胃肠激素Gas、SS、SP和G、D、EC1细胞变化及其相关性。方法 :对 3 5例HP感染的ASCG病人 ,HP根治前后分别用放射免疫法及免疫组化染色图像定量分析检测其胃窦粘膜中Gas、SS、SP含量和G、D、EC1细胞密度、灰度。结果 :HP阳性的ASCG病人经药物治疗根除后胃粘膜Gas含量均较治疗前明显降低 (P <0 0 1或 <0 0 5 )。图像定量分析示 ,HP根治前后胃粘膜G、D、EC1细胞密度差异不显著 (P >0 0 5 )。结论 :HP感染干扰了Gas、SS激素分泌释放的调控 ,是HP相关性胃炎的发病机制之一。SP抑制胃泌素分泌释放 ,而对生长抑素无抑制作用 ,具有胃粘膜保护功能。

三氧化二砷对食管癌细胞株EC-1的生长抑制作用

目的:探讨三氧化二砷((Arsenic trioxide,As2O3)对食管癌细胞株EC-1生长抑制作用及机制。方法:采用MTT法检测不同浓度As2O3(0.5、1、2、4、8、16、32、64μmol/L)在不同时间段(24、48、72 h)对EC-1细胞增殖的抑制率,计算半数抑制率(IC50)值。流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化。结果:三氧化二砷对食管癌EC-1细胞具有增殖抑制作用,呈剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05)。IC50约为18.74μmol/L。As2O3可使细胞阻滞在G2/M期,使G0/G1期、S期细胞比例减少,增加细胞凋亡,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:As2O3能抑制食管癌EC-l细胞株的增殖,具有明显的量效和时效关系。其机制可能与改变周期,增加其细胞凋亡有关。