钒化钠对食管癌细胞系EC109 Caspase-3表达的影响

目的:研究钒化钠对食管癌细胞系EC109 Caspase-3激活的影响,探讨钒化钠影响食管癌细胞系EC109细胞生长的机制。方法:以体外培养食管癌细胞系EC109为研究对象,给予0、0.1、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0μmol/L钒化钠,培养1小时后,用Western blot技术检测食管癌细胞系EC109 Caspase-3激活情况。结果:0、0.1、1.0、5.0、10.0μmol/L钒化钠组培养1小时后,各组Caspase-3蛋白激活与对照组比较均无统计学意义;50.0、100.0、200.0μmol/L钒化钠组培养1小时后,各组Caspase-3蛋白表达均升高。结论:高浓度的钒化钠可能激活EC109细胞Caspase-3蛋白。

食管癌EC109细胞属人类乳头状瘤病毒18型阳性细胞株

目的:探究食管癌细胞系EC109是否为人类乳头状瘤病毒(HPV)感染。方法:以HeLa细胞为阳性对照,以细胞DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HPV基因保守序列GP5/GP6基因片段;PCR扩增HPV18 E6和HPV18 E6/E7基因片段;对HPV18 E6/E7 PCR扩增产物片段进行测序;采用逆转录(RT)-PCR扩增HPV18 E6和E7基因片段;利用HPV基因分型芯片对EC109和HeLa细胞进行HPV分型。结果:PCR、RT-PCR和测序结果证明EC109细胞为HPV18阳性细胞;HPV分型芯片结果显示EC109也为HPV18阳性细胞。结论:EC109细胞是属于HPV18亚型感染型细胞。

PUMA在紫檀芪诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用

目的:探讨紫檀芪(pterostilbene,PTE)对人食管癌EC109细胞活力及凋亡的影响,并明确p53上调凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)在其中的作用。方法:不同浓度PTE(0、50、100、150μmol/L)分别处理EC109细胞,cell counting kit-8(CCK-8)法检测各组细胞活力;Annexin V-FITC/PI染色检测各组细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞Caspase-3活性;荧光探针DCFH-DA检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot检测各组PUMA蛋白的表达。Control siRNA和PUMA siRNA分别转染EC109细胞后,PTE(0、100μmol/L)处理细胞24h,Western blot检测各组PUMA蛋白的表达,CCK-8法检测各组细胞活力。结果:EC109细胞经不同浓度PTE(0、50、100、150μmol/L)分别处理12、24、36h,可有效抑制EC109细胞活力,并呈浓度时间依赖性(P<0.01)。上述浓度PTE处理24h,还可以显著增加EC109细胞凋亡率、Caspase-3活性和ROS水平(P<0.01)。siRNA干扰EC109细胞PUMA蛋白表达后,PTE对EC109细胞的活力抑制作用减弱(P<0.01)。结论:PTE可降低食管癌EC109细胞活力,其机制与激活PUMA介导的细胞凋亡通路有关,PTE可能在食管癌的药物治疗领域具有广阔的应用前景。

食管鳞癌细胞系EC109射线照射后miRNAs和DNA-PKcs的变化及相关性分析

目的探讨食管鳞癌细胞X-Ray照射后miR-126、miR-21、miR-101的表达情况及其与DNA损伤修复基因DNA-PKcs的关系。方法实时定量PCR检测不同剂量X-Ray照射EC109食管鳞癌细胞株24 h后,miR-126、miR-21、miR-101、DNA-PKcs mRNA和蛋白的表达。结果 X-Ray照射EC109后,miR-126、miR-101和DNA-PKcs mRNA表达升高(P<0.05)。放射照射后DNA-PKcs蛋白水平有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。其中miR-21与DNA-PKcs mRNA表达呈负相关。3个miRNAs表达和DNAPKcs蛋白表达无明显相关性。结论 X-Ray照射后,食管鳞癌细胞系EC109的miR-126和miR-101表达上调,DNA-PKcs mRNA表达上调,miR-21与DNA-PKcs mRNA表达呈负相关。

二巯基丙磺酸钠对食管癌EC109细胞系和小鼠艾氏腹水癌的作用研究

目的观察二巯基丙磺酸钠(DMPS)对食管癌EC-109细胞和小鼠艾氏腹水癌的作用。方法在体外培养的食管癌EC-109细胞株中,通过MTT实验,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞生长增殖的抑制作用;通过荧光显微镜和细胞凋亡-Hoechst33258染色试剂盒,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。在小鼠艾氏腹水癌中,观察不同浓度的DMPS对小鼠生存期的影响。结果体外实验中,终浓度为8、4、21、mmol/L的DMPS应用24 h和48 h后,对肿瘤细胞的生长增殖有显著地促进作用(P<0.01);应用72 h后,则显著地抑制肿瘤细胞的生长增殖(P<0.01)。终浓度为8、4、2、1 mmol/L的DMPS应用24 h和48 h后,肿瘤细胞凋亡数量无显著改变(P>0.05),但应用72 h后,各浓度组可显著增加肿瘤细胞凋亡数量(P<0.01)。体内实验中,751、50 mg/kg的DMPS腹腔注射,每天1次,连续10 d,可显著地延长小鼠生存时间(P<0.01)。结论DMPS应用72 h后,可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡而显著地抑制体外食管癌EC109细胞系的生长增殖;腹腔注射751、50 mg/kg连续10 d,可延长艾氏腹水癌小鼠的生存时间。

在食管癌细胞增殖过程中蛋白酶激活受体-2(PAR-2)对细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的调控机制

目的:探讨在食管癌细胞增殖过程中蛋白酶激活受体-2(PAR-2)影响细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的机制。方法:方法:使用食管癌EC109细胞株,实验分为:空白对照组、PAR-2激动组(加入激动剂SLIGKV)、PAR-2反激动组(加入反激动剂VKGILS)、PAR-2 shRNA组(PAR-2shRNA成功转染)和MAPK抑制组(加入阻滞剂PD98059);取对数生长期的细胞,以6×104 cells/ml的密度接种于培养瓶中,置于孵育箱中培养24 h后使用PBS清洗3次,更换为无血清的1640培养基培养24 h,之后各实验组按实验设计分别加入所需试剂,每组设置3个复孔,于孵育箱中继续培养24 h,采用RT-PCR法检测PAR-2、ERK1、CyclinD1的mRNA的表达水平;采用Western blot法检测PAR-2、ERK1、p-ERK1、CyclinD1的蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,PAR-2激动组PAR-2mRNA、ERK1 mRNA、和CyclinD1 mRN表达明显升高(P<0.05),PAR-2、p-ERK1和CyclinD1蛋白表达升高(P<0.05);PAR-2 shRNA组PAR-2mRNA、ERK1 mRNA和CyclinD1 mRNA表达降低(P<0.05),PAR-2、p-ERK1和CyclinD1蛋白表达降低(P<0.05);MAPK抑制组ERK1 mRNA和CyclinD1 mRNA表达明显降低(P<0.05),p-ERK1和CyclinD1表达降低(P<0.05)。结论:PAR-2可通过MAPK通路调节CyclinD1的表达从而促进食管癌细胞EC109的增殖。

水飞蓟宾通过抑制Notch1信号通路发挥抗食管癌EC109细胞的作用

目的:探讨水飞蓟宾(silybin,SIL)对人食管癌EC109细胞系的作用,并探求Notch1以及凋亡通路在其中的角色。方法:实验分为对照组和SIL处理组(75、150、300μM),各组细胞分别处理12、24、36小时。Cell Counting Kit-8(CCK-8)测细胞活力;粘附实验测细胞粘附能力;Caspase-Glo誖3/7定量试剂盒测细胞Caspase3/7的表达;Western-blot测Notch1、Bcl2和Bax蛋白表达。结果:CCK-8检测结果示SIL可有效抑制EC109细胞的活力(P<0.01),并呈浓度时间依赖性;粘附实验结果示SIL可以降低EC109细胞粘附能力(P<0.01);Caspase3/7检测结果示SIL可以使EC109细胞Caspase3/7活性升高(P<0.01);Western-blot检测结果显示SIL可以使EC109细胞Notch1和Bcl2表达下降,Bax表达上升(P<0.01)。结论:SIL可有效抑制食管癌EC109细胞活力,其作用机制可能与抑制Notch1通路,激活凋亡通路相关,SIL可能是食管癌药物治疗领域具有开发前景的药物。