miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

目的:探讨miR-216b-5p对食管癌Eca109细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-216b-5p在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109和耐药细胞Eca109/DDP中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic及mimic NC、自噬相关蛋白5(ATG5)过表达质粒转染到Eca109/DDP细胞中,用CCK-8、EdU法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡;mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况,WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系,WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型,观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果:miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109和Eca109/DDP细胞中均呈低表达(均P<0.05)。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP细胞的增殖并诱导凋亡(均P<0.05),减少细胞中自噬小体数量(P<0.05),下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62蛋白水平(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达(P<0.05),过表达ATG5可使miR-216b-5p mimic对Eca109/DDP细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱(均P<0.05),自噬相关蛋白P62表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1表达升高(均P<0.05)。荷瘤实验结果表明,miR-216b-5p过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论:miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。

ATP/P2X7轴介导的K^(+)外排促进NDV感染的ECA109细胞中NLRP3炎性小体激活

目的探究新城疫病毒(NDV)感染食管癌ECA109细胞后,NLRP3炎性小体是否激活、其激活是否与K^(+)外排有关及ATP/P2X7轴对NLRP3炎性小体激活的影响。方法Western blot检测NLRP3和IL-1β表达情况;ELISA检测上清液中IL-1β含量;荧光免疫技术检测ASC斑点的形成情况;荧光探针技术检测细胞内K^(+)浓度变化;使用ATP酶、ATP及P2X7受体抑制剂进行干预,研究其在NLRP3炎性小体激活中的作用。结果与control组比较,NDV F3感染细胞后,细胞内NLRP3、IL-1β和ASC蛋白表达上调;胞内钾离子浓度随感染时间延长而降低(P<0.05)。P2X7受体抑制剂干预后,胞内K^(+)外流受阻,随抑制剂浓度的增加,K^(+)外流在10 mol/L处受最大抑制(P<0.05)。ATP酶及ATP干预结果显示,ATP酶抑制K^(+)外流,ATP促进K^(+)外流。Western blot结果显示,与control组比较,抑制P2X7受体,NLRP3和IL-1β蛋白表达下调;ATP酶干预细胞后,NLRP3和IL-1β表达降低;ATP干预细胞后,NLRP3、IL-1β蛋白表达上调(P<0.05)。结论NDV F3感染ECA109细胞能激活NLRP3炎性小体,其机制可能与ATP/P2X7轴有关。

白藜芦醇通过铁死亡途径逆转食管癌细胞Eca109/DDP化疗耐药

背景白藜芦醇不仅具有抗肿瘤作用,其还能增强多种化疗药物的化疗敏感性,但其对食管癌耐药细胞的顺铂敏感性的作用尚不清楚.目的探讨白藜芦醇逆转食管癌细胞Eca109/DDP的耐药效应并从铁死亡的角度分析其潜在的作用机制.方法采用MTT法确定白藜芦醇和顺铂的最佳作用时间和浓度;检测细胞增殖、细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及铁离子的水平;Western blot检测铁死亡相关调控因子酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl coenzyme A synthetase long chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和肿瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)的蛋白表达情况.结果MTT检测结果显示,相较于单用顺铂,联用白藜芦醇对Eca109/DDP细胞的生长抑制作用较为显著(P<0.05).此外,白藜芦醇和顺铂联用可显著降低Eca109/DDP细胞克隆形成数(P<0.05),增加细胞内铁离子、MDA和ROS水平(P<0.05),降低GSH水平(P<0.05).铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和铁离子螯合剂(deferoxamine,DFO)可部分逆转白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用(P<0.05).Western blot的结果显示相较于其他组,白藜芦醇和顺铂联用组的FTH和GPX4的蛋白表达显著降低(P<0.05),而ACSL4和P53的蛋白表达显著增加(P<0.05).结论白藜芦醇可通过铁死亡抑制Eca109/DDP细胞的增殖并逆转顺铂耐药.

芝麻酚通过AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路调控食管鳞状细胞癌Eca109细胞的自噬和凋亡

目的:探讨芝麻酚(SEM)通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)通路影响食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞自噬和凋亡的机制。方法:用不同浓度的SEM(0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μmol/L)分别处理Eca109细胞、人食管上皮细胞HEEpiC 48 h,CCK-8法检测细胞增殖率,筛选适宜的SEM浓度用于后续实验。将Eca109细胞分为对照组(CK组,0μmol/L)、低剂量SEM组(SEM-L组,25μmol/L)、中剂量SEM组(SEM-M组,50μmol/L)、高剂量SEM组(SEM-H组,100μmol/L)、高剂量SEM+Compound C(AMPK抑制剂)组(SEM-H+Compound C组,100μmol/L+10μmol/L),所有各组Eca109细胞在对应的药物浓度下处理48 h后,CCK-8法检测Eca109细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜观察Eca109细胞内自噬小体,WB法检测Eca109细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、p-AMPK、SIRT1、p-NF-κB p65的表达。结果:通过预实验选择SEM实验浓度为25、50、100μmol/L用于正式研究。在SEM处理下,与CK组比较,SEM-L组、SEM-M组、SEM-H组Eca109细胞的增殖水平(24、48 h)和Bcl2、p-NF-κB p65蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率和自噬小体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、BAX、p-AMPK、SIRT1蛋白表达显著升高,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与SEM-H组比较,SEM-H+Compound C组Eca109细胞增殖水平(24、48 h)和Bcl2、p-NF-κB p65蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和自噬小体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、BAX、p-AMPK、SIRT1蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论:SEM可能通过激活AMPK/SIRT1信号通路而抑制NF-κB活性来促进Eca109细胞自噬与凋亡。

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制。方法:MTT法测定0g/L、2g/L、4g/L、8g/L、16g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24h、48h、72h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16g/L仙鹤草水提液作用72h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示16g/L仙鹤草水提液作用48h和72h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16g/L仙鹤草水提液作用72h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调。结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关。

戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的机制研究

目的探讨特异选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡及其作用机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布；电子显微镜进一步检测细胞凋亡；采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定Eca109细胞的LDH含量；流式细胞术检测p-p38MAPK及凋亡基因Fas和FasL蛋白的表达。结果戊地昔布（25—400μmol·L^-1）可诱导人食管癌Eca109细胞发生凋亡，凋亡率由（2．95±0．83）％增力口到（48．46±0．73）％；50—400μmol·L^-1时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低，G0／G1期的细胞比例增加；同时，流式细胞术显示，25μmol·L^-1戊地昔布即可上调人食管癌Eca109细胞p-p38MAPK蛋白的表达，并随剂量的增加而增强；50—400μmol·L^-1的戊地昔布可上调Eca109细胞Fas及FasL的表达。结论戊地昔布可诱导人Eca109细胞凋亡，其诱导凋亡的机制可能部分是通过激活p-p38MAPK／Fas、FasL途径实现的。

EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察

目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态。方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Westernblot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性。结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P<0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P<0.05)。结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高。

香加皮三萜类化合物抑制食管癌Eca109细胞裸鼠成瘤及其机制

目的:研究香加皮三萜类化合物(triterpenes compounde xtracted from cortex periplocae,TCCP)对荧光素酶(luciferase)标记的人食管鳞癌细胞株Eca109(Eca109-luc细胞)在裸鼠体内成瘤的作用及其机制。方法:Eca109-luc细胞经皮下接种裸鼠,构建Eca109-luc细胞裸鼠移植瘤模型,观察TCPP治疗后移植瘤体积和质量的变化,应用活体成像系统观察移植瘤生长情况,H-E染色观察移植瘤组织形态学变化,流式细胞仪检测移植瘤细胞的凋亡,Westernblotting检测移植瘤组织中survivin的表达。结果:TCPP在体内能明显抑制裸鼠Eca109-luc移植瘤的生长,移植瘤体积和质量明显减少,抑瘤率为40.7%。TCPP治疗组小鼠移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润及肿瘤细胞坏死,移植瘤细胞的凋亡率明显高于大豆油对照组(P<0.05),移植瘤组织中survivin蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论:TCCP在体内能抑制人食管癌Eca109细胞的生长,其作用机制可能与下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。

p38MAPK在戊地昔布诱导Eca109细胞凋亡中的调控作用

目的探讨p38MAPK信号转导途径在戊地昔布诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的调控作用。方法将正常培养的人食管癌Eca109细胞随机分为正常对照组、戊地昔布组和戊地昔布+SB203580组;采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡情况;RT-PCR检测p38mRNA的表达变化;流式细胞术和免疫细胞化学检测p38蛋白的表达变化。结果①戊地昔布能够诱导Eca109细胞发生凋亡,并呈剂量依赖性,而SB203580能够部分降低戊地昔布诱导的Eca109细胞的凋亡率;②戊地昔布能够上调Eca109细胞中p38mRNA和蛋白的表达,而戊地昔布+SB203580组p38mRNA和蛋白的表达下降;③p38蛋白表达与凋亡率呈正相关。结论戊地昔布能够通过部分激活p38MAPK信号途径诱导Eca109细胞发生凋亡。

RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响

目的探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制。方法设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果Si Grp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P<0.05);Si Grp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中。

CHFR基因CpG岛甲基化对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究CHFR基因启动子甲基化状态与食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别用不同浓度(2、5、10μmol/L)5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理Eca109细胞,未经药物处理的细胞为对照组。甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测CHRF基因CpG岛的甲基化状态,RT-PCR检测CHFR mRNA的表达情况,MTT法及流式细胞术检测不同浓度5-Aza-CdR处理对Eca109细胞增殖及凋亡的影响。结果:对照组Eca109细胞CHFR CpG岛处于高甲基化状态,5-Aza-CdR处理后CHFR CpG岛可发生不同程度的剂量依赖性的去甲基化。对照组Eca109细胞无CHFR mRNA表达,5-Aza-CdR处理组(2、5、10μmol/L)CHFR mRNA相对表达量显著增加(0.174±0.010、0.221±0.013、0.356±0.014)。不同浓度5-Aza-CdR处理后,Eca109细胞增殖受到抑制[作用72 h时的抑制率分别为(30.87±0.74)%、(44.60±0.79)%、(56.67±0.35)%],细胞凋亡显著增加[(7.46±1.46)%、(16.27±1.61)%、(25.29±2.25)%vs(1.83±0.41)%,P<0.01]。结论:食管癌Eca109细胞经5-Aza-CdR处理后,CHFR基因CpG岛发生部分去甲基化,出现CHFRmRNA表达,并抑制Eca109细胞增殖和促进细胞凋亡。

IL-27基因修饰Eca109细胞的体外体内凋亡作用的研究

目的研究IL-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在体外和体内对细胞凋亡的影响,从而探讨其抗肿瘤作用及其机制。方法基因转染的方法建立稳定表达IL-27基因的人食管癌细胞株(Eca109/IL-27),观察Eca109/IL-27细胞生长情况、移植瘤的生长情况及生存期,用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率和Fas的表达,采用Western blot检测Survivin的表达。结果成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有mIL-27p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P<0.01),IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长和细胞凋亡,Fas和Survivin的表达无变化(P>0.05);但体内Eca109/IL-27移植瘤生长较Eca109和Eca109/LXSN滞后,生存时间延长(P<0.05),肿瘤组织细胞凋亡率增高(P<0.05),细胞表面Fas的表达增加(P<0.05),Survivin表达降低(P<0.05)。结论IL-27在体外不影响细胞凋亡,体内可能通过降低Survivin的表达,上调Fas的表达,诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用。

二硫苏糖醇诱导Eca109细胞凋亡及P38磷酸化检测

目的:检测二硫苏糖醇(DTT)诱导Eca109细胞凋亡及磷酸化P38(PP38)水平。方法:取对数生长期Eca109细胞分为3组:2mmol/L DTT处理组、PP38抑制剂SB203580孵育细胞2h后再加DTT处理组及对照组。应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用免疫组织化学技术检测P38的磷酸化水平。结果:DTT组、SB203580+DTT组及对照组的细胞凋亡率分别为16.8%、7.8%和3.1%。DTT组和DTT+SB203580组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.01);与DTT组相比,SB203580+DTT组凋亡率下降(P<0.01)。DTT组PP38水平高于对照组(P<0.01)。结论:DTT可诱导人食管癌Eca109细胞凋亡,P38磷酸化起促进凋亡的作用。

IL-27基因对Eca109细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制

背景与目的:细胞因子为主的肿瘤生物治疗已成为肿瘤研究领域热点之一。本研究观察白细胞介素(interleukin,IL)-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制。方法:以逆转录病毒为载体,采用基因转染的方法用G418梯度筛选法建立转染IL-27基因的Eca109细胞,RT-PCR检测其基因导入情况,ELISA法检测IL-27的分泌和其诱导外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)产生γ-干扰素(interferon,IFN)的能力,MTT法观察Eca109/IL-27细胞生长情况。将Eca109/IL-27、Eca109/LXSN和Eca109细胞接种于裸鼠皮下,观察其成瘤性、移植瘤的生长情况并计算抑瘤率。流式细胞技术检测移植瘤组织肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)中CD16、FasL的表达和肿瘤细胞上Fas的表达。结果:RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有IL-27p28和IL-27EBI3亚基基因表达,Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P<0.01),从而成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,ELISA检测Eca109/IL-27中IL-27的分泌量高于Eca109/LXSN和Eca109细胞(P<0.01)。IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长(P>0.05),Eca109/IL-27诱导PBMC产生IFN-γ含量高于Eca109/LXSN和Eca109[(56.28±1.61)pg/mL vs.(12.70±0.82)pg/mL]和(11.06±0.64)pg/mL,P<0.01),Eca109/IL-27移植瘤体积较Eca109和Eca109/LXSN减小,瘤重减轻,有抑瘤作用(P<0.05);Eca109/IL-27细胞接种的肿瘤组织TIL中CD16阳性率升高,FasL的表达增高(P<0.05),肿瘤细胞表面Fas表达增加(P<0.05)。结论:IL-27基因修饰Eca109细胞在裸鼠体内产生了抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过活化自然杀伤细胞,以Fas/FasL的途径产生的。

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。

全反式维甲酸联合5-氟尿嘧啶对Eca109细胞增殖、迁移和VEGF表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)单独或联合作用对Eca109细胞增殖、迁移和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将常规传代的Eca109细胞分为4组:ATRA组、5-FU组、ATRA+5-FU组和对照组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,通过划痕实验测定各组细胞的迁移能力,采用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测各组细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况。结果:作用24、48和72 h后,ATRA+5-FU组的细胞生长抑制率均高于其他2组(F=23.432、13.605、73.369,P均<0.05);作用24 h后,ATRA+5-FU组的迁移率均低于其他3组(P均<0.001);作用48 h后,ATRA+5-FU组细胞VEGF mRNA和蛋白的相对表达量均低于其他3组(P均<0.05)。结论:ATRA、5-FU均能抑制食管癌细胞的增殖,且联合用药效果更为显著,可能与其抑制肿瘤血管生成有关。

GRP78、CHOP在α-细辛醚诱导的Eca109细胞凋亡中的作用

目的:研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在α-细辛醚诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡中的作用。方法:采用0.25、0.50及1.00 g/L的α-细辛醚作用于体外培养的Eca109细胞,并以无干预的细胞作为对照。分别于培养后12、24、36、48 h,采用MTT法检测Eca109细胞的增殖抑制情况;采用免疫荧光染色法检测细胞凋亡情况;运用Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因GRP78和CHOP的表达水平。结果:α-细辛醚对Eca109细胞的增殖具有抑制作用(P<0.05),且具有时间、剂量效应关系。α-细辛醚作用48 h后,GRP78和CHOP mRNA和蛋白的相对表达量明显增加(P<0.05)。结论:α-细辛醚可抑制Eca109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与调节内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP表达有关。

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响

目的:探讨自噬基因Beclin 1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响。方法:运用Beclin 1过表达质粒p IRES2-ZsGreen1-h Beclin 1转染食管癌Eca109细胞株,RT-PCR和Western blot检测Beclin 1的m RNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化。结果:p IRES2-Zs Green-h Beclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株。目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制(P=0.000,P=0.000);目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组(P值均<0.05);Beclin 1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制。结论:Beclin 1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因。

lncRNA NUP50-AS1在食管鳞癌组织中的表达及其对Eca109细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)NUP50-AS1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer, ESCC)组织及细胞株中的表达及其对人食管癌Eca109细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取自2015年1月至2016年12月河北医科大学第四医院生物标本库的49例ESCC手术患者的癌组织和相应癌旁组织,qRT-PCR检测ESCC癌组织、癌旁组织及5种食管癌细胞株(TE1、TE13、Eca109、Kyse150和Kyse170)中NUP50-AS1表达水平。shRNA转染NUP50-AS1后,选用sh2-NUP50-AS1进行后续功能实验。采用MTS法、克隆形成实验检测敲减NUP50-AS1表达对Eca109细胞增殖的影响,划痕实验检测敲减NUP50-AS1表达对细胞迁移的影响,Transwell小室实验检测敲减NUP50-AS1表达对细胞侵袭的影响。结果:NUP50-AS1在ESCC组织中的相对表达量显著高于癌旁组织(2.003±0.870 vs 1.000±0.000,P<0.05);NUP50-AS1在ESCC组织中的表达水平与淋巴结转移及TNM分期相关(均P<0.01),NUP50-AS1在5株食管癌细胞系中相对表达量均明显上调(P<0.05),其中Eca109细胞的NUP50-AS1表达水平最高。转染后,sh2-NUP50-AS1转染组干扰效率最高,敲低NUP50-AS1可明显抑制Eca109细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论:ESCC组织中lncRNA NUP50-AS1表达明显高于癌旁组织,且与癌症分期和淋巴结转移有关,敲减其表达明显抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,NUP50-AS1的高表达可能与ESCC的发生发展密切相关。

LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

目的 探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法 以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上的表达。结果 LIGHT Fc基因的表达可以抑制Eca10 9细胞的生长。在低血清培养时 ,Eca10 9 LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低 ;MTT比色显示Eca10 9 LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 LIGHT Fc基因转染对人食管癌Eca10 9细胞具有体外抑制作用 。