siRNA沉默ECHS1基因对大肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的探讨ECHS1基因在人大肠癌细胞系HCT-8细胞中的表达及其功能。方法构建p U6-si ECHS1重组质粒,稳定转染HCT-8细胞,采用Western blotting检测转染后细胞中ECHS1蛋白的表达及Akt、糖原合成酶激酶GSK3β蛋白磷酸化情况,CCK-8法和Transwell实验检测转染后细胞的增殖与迁移情况。结果采用siRNA沉默ECHS1基因的表达后,HCT-8细胞中ECHS1蛋白表达水平降低约40%,细胞增殖水平和迁移能力亦明显下降,且与亲本细胞或转染空载体细胞比较,Akt和GSK3β磷酸化水平明显下降。结论 ECHS1在大肠癌细胞的增殖和迁移过程中具有重要作用,其机制可能与Akt和GSK3β相关信号通路的活化有关。

ECHS1基因突变致线粒体短链烯酰CoA水合酶1缺乏症1例

对重庆医科大学附属儿童医院诊治的1例ECHS1基因突变致线粒体短链烯酰CoA水合酶1缺乏症患儿的临床资料及相关文献进行回顾性分析。患儿,男,3个月28 d,病史特点:哭吵、惊厥发作;查体:竖颈不稳,双侧巴氏征引出。血乳酸增高。头颅核磁共振提示双侧基底核区对称性病变。基因检查示患儿ECHS1基因复合杂合突变:c.796A>G(p.T266A)和c.463G>A(pG155S),结合患儿病史推测此为致病基因。故幼儿期有肌张力异常、运动发育迟缓或倒退、痉挛、乳酸增高、头颅磁共振成像示基底核区异常低密度影,病因未明时,应考虑到线粒体方面的疾病。

短链烯酰辅酶A水合酶1基因突变导致线粒体短链烯酰辅酶A水合酶1缺乏症1例

目的:总结1例短链烯酰辅酶A水合酶1(ECHS1)基因导致线粒体短链烯酰辅酶A水合酶1缺乏症(ECHS1D)患儿的临床特征及基因突变特点。方法:回顾性分析2021年1月就诊于徐州市儿童医院神经内科的1例ECHS1D患儿的临床特点及基因检测结果,并通过检索国内外相关文献对该疾病的临床特征进行复习。结果:患儿男性,年龄6个月4 d,急性起病,临床以肢体活动障碍为主要表现。患儿运动发育迟缓,竖头尚可,不能翻身、独坐,不能追视,不能逗笑出声,四肢肌张力增高。入院检查示血乳酸水平升高至6.2 mmol/L,提示代谢性酸中毒。头颅磁共振成像(MRI)示双侧基底节区异常信号,左侧大脑半球脑膜异常强化。全外显子组测序发现该患儿ECHS1基因存在复合杂合突变,分别为c.563C>T(p.A188V)和c.5C>T(p.A2V),患儿父亲携带c.563C>T突变,母亲携带c.5C>T突变,均为错义突变。结论:ECHS1基因以错义突变为主,大部分为复合杂合突变,少部分为纯合突变。ECHS1基因突变导致线粒体ECHS1D常累及婴幼儿,发病相对较早,临床表现为代谢性酸中毒、运动发育迟缓、肌张力障碍等,头颅MRI可存在基底节区异常信号。对具有类似临床表现和MRI基底节异常信号的病例,应考虑基因检测明确诊断。

烯脂酰辅酶A水合酶短链1促进肝癌HepG2细胞的增殖

目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,蛋白质印迹法检测细胞中ECHS1蛋白的表达水平。pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染HepG2细胞后,CCK-8(cellcountingkit-8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)法检测细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平。结果:成功建立稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞中ECHS1蛋白的表达水平明显低于空白对照组(未转染质粒的HepG2细胞)和阴性对照组(转染空载体pGPU6的HepG2细胞)(P<0.05)。与阴性对照组比较,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05),p-ERK、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:ECHS1可能通过上调p-ERK、cyclinD3和cyclinD1的表达而促进肝癌HepG2细胞的增殖。