SEZ6L2通过ECM-受体信号调节肺鳞癌细胞的增殖与凋亡

该研究探讨癫痫相关6同源物样2(seizure-related 6 homolog like 2,SEZ6L2)对肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)细胞的增殖与凋亡的影响及其潜在的作用机制。该研究采用癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)分析SEZ6L2在肺鳞癌组织中的表达情况;采用实时逆转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RTqPCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测正常人支气管上皮细胞BEAS-2B和肺鳞癌细胞(NCIH520、NCI-H1703、SK-MES-1)中SEZ6L2表达情况;采用RT-qPCR和Western blot检测SEZ6L2的干扰效率;采用CCK-8、EdU染色法和细胞克隆实验检测细胞增殖水平;采用细胞划痕和侵袭实验检测细胞迁移水平和侵袭能力;采用流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡水平及凋亡相关蛋白的表达水平;借助基因集合富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)软件,分析SEZ6L2在细胞外基质(extracellular matrix,ECM)-受体信号中的富集情况;借助linkedomics和基于基因表达水平值的交互式分析平台(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)分析SEZ6L2与ECM-受体信号蛋白整合素Β3(integrin beta 3,ITGB3)、整合素Β6(integrin beta 6,ITGB6)、整合素α3(integrin alpha3,ITGA3)的关系;采用Western blot检测ITGB3、ITGB6、ITGA3及其下游信号蛋白磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、p-SRC、FAK、SRC的表达情况。该研究发现,TCGA数据库显示SEZ6L2在肺鳞癌组织中的表达水平增加,且表达水平越高LUSC患者预后越差;与BEAS-2B组比较,SEZ6L2表达在肺鳞癌细胞NCI-H520、NCI-H1703和SK-MES-1中显著上调,且在NCI-H1703细胞中表达水平最高。因此,选择NCI-H1703细胞做后续研究。构建SEZ6L2的干扰质粒,SEZ6L2在si-SEZ6L2-3组中表达水平更低,表现出更好的转染效率,因而选择si-SEZ6L2-3(以下简称为si-SEZ6L2)进行后续研究。干扰SEZ6L2表达后,与si-NC组比较NCI-H1703细胞增殖、迁移和侵袭水平下降,凋亡水平上升,促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase3表达水平增加,抗凋亡蛋白BCL2表达水平下降,ECM-受体信号蛋白ITGB3、ITGB6、ITGA3及其下游信号蛋白p-FAK、p-SRC表达水平下调。该研究得出,SEZ6L2通过ECM-受体信号调节肺鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。