维A酸衍生物ECPIRM对维A酸核受体的影响及小鼠皮肤刺激反应

目的探讨维A酸衍生物ECPIRM对维A酸核受体的影响，评估ECPIRM对小鼠皮肤的红斑、脱屑等刺激反应。方法10μmol／LECPIRM和全反式维A酸（ATRA）作用于SCL-1细胞24h，用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法分别检测维A酸受体（RARa、RARD、RAR＇,／和RXRa）的蛋白和mRNA表达变化。用实时荧光定量PCR检测维A酸受体RAR激活通路的靶基因细胞色素P450家族成员26A1和他扎罗汀诱导基因1（TIG1）的mRNA表达变化。BALB／c小鼠剃毛后外涂ECPIRM凝胶，以等摩尔浓度的全反式维A酸乳膏为对照，观察小鼠皮肤刺激反应。结果ATRA作用后，RARa、RARD、RAR＂／的蛋白和mRNA表达明显增高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。CYP26A1和TIGl的mRNA表达分别增加到25．49倍和3．88倍，差异有统计学意义（P〈0．01）。但ECPIRM作用后并不增加核受体RAR仪、RAR8、RAR＇y及RXRa的蛋白表达；RARa、RARp、RARγ的mRNA表达变化差异无统计学意义（P〉0．05）；RAR靶基因CYP26A1和TIGl的mRNA表达变化差异无统计学意义（P〉0．05）。BALB/c小鼠外用全反式维A酸乳膏后2d出现明显的红斑、脱屑反应，用药5d达高峰。而连续外用0．075％ECPIRM凝胶21d，小鼠一直未出现红斑、脱屑反应。结论ECPIRM不激活经典的维A酸受体通路，未出现ATRA样皮肤刺激反应。

新型维A酸ECPIRM及全反式维A酸对白细胞介素17刺激HaCaT细胞白细胞介素1β表达的影响

目的 探讨新型维A酸ECPIRM及全反式维A酸（ATRA）对白细胞介素17（IL-17）刺激人表皮角质形成细胞株（HaCaT细胞）IL-1β表达的影响。 方法 MTT法检测不同浓度ECPIRM及ATRA与IL-17共同作用于HaCaT细胞后对其细胞增殖活力的影响；IL-17（20 μg/L）刺激HaCaT细胞或与ECPIRM（80 μmol/L）、ATRA（5 μmol/L）共培养24 h，收集细胞培养上清液并提取总RNA，分别进行酶联免疫吸附实验（ELISA）和荧光定量PCR，检测IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平的变化。数据处理采用单因素方差分析，组间比较采用LSD法。 结果 低浓度ECPIRM可促进HaCaT细胞增殖，随着药物浓度和时间的增加，对HaCaT细胞生长出现抑制现象，并呈浓度及时间依赖性。ATRA抑制HaCaT细胞生长呈浓度及时间依赖性。IL-17刺激HaCaT细胞后细胞培养上清液中IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平（20.312 ± 2.053 ng/L、4.05 ± 0.47）与对照组（11.427 ± 0.929 ng/L、1.00 ± 0.03）相比明显升高，差异有统计学意义（P 〈 0.05）；ECPIRM作用后IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平（12.470 ± 1.897 ng/L、0.82 ± 0.12）与IL-17刺激组（20.312 ± 2.053 ng/L、4.05 ± 0.47）相比降低，差异有统计学意义（P 〈 0.05）；ATRA作用后IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平（12.694 ± 1.478 ng/L、0.87 ± 0.16）与IL-17刺激组（20.312 ± 2.053 ng/L、4.05 ± 0.47）相比明显降低，差异有统计学意义（P 〈 0.05），同时ECPIRM处理组、ATRA处理组与溶媒对照组比较差异无统计学意义。 结论 IL-17可促进HaCaT细胞分泌IL-1β，ECPIRM及ATRA对其诱导的HaCaT细胞IL-1β的表达具有明显的抑制作用。

维A酸衍生物ECPIRM对皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞增殖、凋亡的影响及其机制初探

目的探讨维A酸衍生物ECPIRM对人皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞的增殖抑制作用及潜在机制。方法以0(对照组)、5、10、20μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用CCK8法检测ECPIRM对HH细胞增殖活力的影响,采用流式细胞仪检测ECPIRM对HH细胞凋亡的影响。以10μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用转录组学测序分析ECPIRM对HH细胞基因表达的调控作用,结合KEGG通路分析和GO功能富集分析比较ECPIRM诱导的差异表达的相关基因。采用反转录qPCR验证相关通路中关键基因的表达变化。组间差异采用单因素方差分析,采用LSD-t检验进行两两比较。结果CCK8结果显示,ECPIRM对HH细胞IC50为(4.91±2.48)μmol/L,对照组与5、10、20μmol/L ECPIRM组HH细胞活力分别为100.00%±2.87%、49.58%±4.53%、48.36%±2.88%、31.44%±2.46%,4组细胞活力差异有统计学意义(F=162.86,P<0.001),5、10、20μmol/L组细胞活力均低于对照组(t值分别为15.36、15.73和20.89,均P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示,4组细胞凋亡率差异有统计学意义(11.51%±1.84%、23.83%±5.72%、36.19%±8.33%、49.75%±4.10%,F=17.62,P<0.001),10、20μmol/L组细胞凋亡率均高于对照组(t值分别为4.46、6.92,均P<0.01)。转录组学分析发现,ECPIRM诱导的增殖抑制作用可能与类固醇的代谢调控有关。反转录qPCR验证发现,10μmol/L ECPIRM组L-氨基酸氧化酶(IL4I1)、乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)、甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MVD)、3-β-羟基类固醇-8,7-异构酶(EBP)、极低密度脂蛋白受体(VLDLR)、3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA相对表达与对照组比较明显受到抑制(均P<0.05)。结论维A酸衍生物ECPIRM对HH细胞可发挥显著的抗增殖及凋亡诱导作用,其机制可能与类固醇代谢关键基因的表达抑制有关。