川芎嗪对缺氧缺糖状态下培养的血管内皮细胞ECV-304的影响

目的 :观察缺氧缺糖条件下血管内皮细胞 (ECV 30 4 )释放乳酸脱氢酶 (LDH)、一氧化氮 (NO)、丙二醛(MDA)水平和细胞膜流动性的变化及川芎嗪对它们的影响。方法 :缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 ,自动生化分析仪测定培养液和细胞层中LDH活性 ;用比色法测定细胞培养液中NO水平 ;用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物MDA以评价脂质过氧化程度 ;荧光偏振法测定内皮细胞膜流动性。结果 :缺氧缺糖引起的血管内皮细胞LDH释放增加、MDA生成增多和膜流动性增高 ,NO水平降低。而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞释放LDH ,MDA生成和降低细胞膜流动性 ,提高NO水平。结论 :川芎嗪可保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞的损伤 ,其作用机制有待进一步研究。

氧化低密度脂蛋白对人血管内皮细胞ECV-304促增殖及诱导凋亡的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (ox -LDL)对血管内皮细胞损伤作用的多样性。方法 :通过细胞形态学、台盼蓝活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)、流式细胞凋亡和细胞凋亡小分子量DNA片段凝胶电泳测定法 ,观察 (0 1、1、10、10 0、15 0和 2 0 0 )mg/L的ox-LDL的条件培养液对人血管脐静脉内皮细胞ECV- 3 0 4的影响。结果 :(0 1- 10 )mg/L的ox -LDL对ECV - 3 0 4细胞具有促增殖作用 ,而增加浓度达 10 0mg/L及以上时 ,其表现则主要是对ECV - 3 0 4的细胞毒性 ;而且 ,这种细胞毒性以当ox -LDL的浓度达到 15 0和 2 0 0mg/L时 ,在12h开始诱导ECV - 3 0 4细胞出现凋亡 ,分别达 15 86%和 2 1 89%。而当ox-LDL作用ECV - 3 0 4细胞 18h后 ,则出现伴随凋亡的细胞坏死。结论 :ox -LDL具有很强的细胞毒性 ,其对内皮细胞的细胞毒性经历了促细胞增殖、凋亡前期。

丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清致伤ECV-304细胞活性的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对高血压病血瘀证患者血清致伤ECV-304活性的影响。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞株ECV-304按空白对照组、血瘀证组、TanⅡA40、20、10、5μg/mL组分组,MTT法检测ECV-304活性。结果:24h和48h血瘀组与空白对照组比较,细胞活性显著降低(P<0.01);24h和48h TanⅡA 10μg/mL组与血瘀组比较,细胞活性显著增强(P<0.05,或P<0.01)。结论:高血压病血瘀证患者血清可以损伤内皮细胞,丹参酮ⅡA对内皮细胞具有保护作用。

两种剂型的鱼肝油酸钠对ECV-304细胞系病理作用的对比研究

目的对比研究鱼肝油酸钠的普通剂型和脂质体剂型对ECV-304细胞系的病理作用。方法以ECV-304细胞系为实验对象,分别加入鱼肝油酸钠的普通剂型和脂质体剂型,通过对比形态学(倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察)、细胞活性(MTT法)及流式细胞仪检测来探讨不同剂型对ECV-304细胞系作用及其机制。结果普通剂型组出现细胞水肿、线粒体和内质网肿胀、染色质絮状化等坏死性变化;脂质体剂型组中染色质出现了新月状边集,碎裂并向胞膜移动,形成凋亡小体。细胞活性测定显示普通剂型组活细胞数目下降速度快;脂质体剂型组活细胞数目下降速度较慢。脂质体剂型组PI染色后行流式细胞仪检测,结果出现典型亚二倍峰。结论鱼肝油酸钠普通剂型表现为剧烈的毒性作用,呈现坏死性变化;而鱼肝油酸钠脂质体剂型对ECV-304细胞系表现为渐进性的缓释作用,诱导细胞发生凋亡性变化。

同型半胱氨酸硫内酯对ECV-304细胞凋亡及ROS生成的影响

目的 探讨同型半胱氨酸硫内酯(HcyT)对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)的损伤作用及其可能机制。方法 采用倒置显微镜、四唑盐(MTT)比色法及碘化吡啶(PI)染色流式细胞仪检测HeyT对细胞毒性作用，以荧光标记流式细胞仪检测细胞内反应性氧类(ROS)的生成。结果 一定剂量HcyT刺激后，内皮细胞发生凋亡，且凋亡呈浓度时间依赖性。随着HcyT浓度的增加，ROS的生成逐渐增加。结论 HcyT通过ROS呈时间浓度依赖性地诱导内皮细胞凋亡，这可能是Hey致血管病变的机制之一。

β-榄香烯对ECV-304细胞碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA表达的调节作用

β-榄香烯（β-elemene）是基于20世纪70年代莪术挥发油局部治疗宫颈癌有良好效果发现的一种有效抗癌成分[1]。随着对其研究的深入,发现β-榄香烯对多种肿瘤细胞的增殖活性具有选择性抑制作用、诱导肿瘤细胞凋亡及分化、抗肿瘤转移、逆转肿瘤细胞耐药性、免疫增强、抗瘤谱广、抑制血管生长等特点,得到临床广泛的应用。

高级蛋白氧化产物对人脐静脉内皮细胞ECV-304的作用

目的 观察体外制备的高级蛋白氧化产物修饰蛋白（AOPP-HSA）对人脐静脉内皮细胞（ECV-304细胞株）的作用.方法 在高压液相色谱仪（HPLC）中将人血清白蛋白（HSA）用次氯酸处理制备AOPP-HSA,观测AOPP-HSA对ECV-304细胞增殖和凋亡,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素（E-selectin）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达,以及P50、P65和I-кB的mRNA表达含量的影响.结果 （1）AOPP-HSA与ECV-304细胞共同孵育后,可使其增殖指数下降,约为对照组的70%～80%.凋亡试验结果：AOPP-HSA组细胞早期凋亡较对照组升高17%.（2）ECV-304细胞有ICAM-1和MCP-1的基础表达,与AOPP-HSA共同孵育24 h后,两者的表达均有上调,以VitE预先孵育后,其表达量均较相应浓度AOPP-HSA组有明显下降;ECV-304细胞无E-selectin的基础表达,给予AOPP-HSA后也无改变.（3）ECV-304细胞与AOPP-HSA共同孵育后,其P50、P65的mRNA的相对表达含量均显著上调,在VitE干预组,P50、P65的相对表达含量较相应AOPP-HSA组下降.I-кB mRNA的相对表达含量在AOPP-HSA 100～400 μmol/L各组均明显下降,而在AOPP-HSA 600 μmol/L组中,其I-кB的相对表达含量出现显著的升高,给予VitE干预后,I-кB的相对含量也出现明显升高.结论 AOPP-HSA对ECV-304细胞具有多种生物学效应,可抑制增殖、促进凋亡、上调黏附分子和趋化因子的表达.这些作用可能是通过影响NF-кB而产生的.氧化应激参与了这些作用的发生.

硒对人脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 观察硒对人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)表达的影响。方法 分别用高葡萄糖、糖基化终末产物 ,高胰岛素和过氧化氢孵育人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 ;在先加入 10 0 nmol/L硒后 ,再给予以上 4种因素 ,分别检测人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA的表达并比较。结果 4种因素均可作为独立因素 ,导致人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA表达量增加 ;硒能抑制 4种因素所致的MCP- 1m RNA表达。结论 硒抑制 MCP- 1m RNA在人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4中的表达。

川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用。方法:用过氧化氢致ECV-304细胞损伤,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量。结果:川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物具有对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用,其活性比川芎嗪强。结论:川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物具有对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用。

同型半胱氨酸对ECV-304细胞NO和ROS形成的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 (Hcy)对ECV 30 4细胞产生一氧化氮 (NO)及其对细胞内活性氧 (ROS)产生的影响。 方法 :将不同浓度的Hcy与ECV 30 4细胞体外共培养 2 4h ,硝酸还原酶法检测 3种一氧化氮合酶 (NOS)激动剂前后各组NO含量 ;流式细胞术检测细胞荧光强度 ,以反映ROS水平。结果 :0 .5 0、1.0 0mmol/LHcy作用 2 4h时NO量明显低于对照组(P <0 .0 1) ;加入 3种NOS激动剂刺激后 ,仍显示Hcy对ECV 30 4细胞释放NO反应的抑制作用 ,1.0 0mmol/LHcy组与对照组和低浓度组差异均有显著性 (P <0 .0 1)。 0 .5 0、1.0 0mmol/LHcy组的荧光强度明显高于对照组和低浓度组 (P <0 .0 1)。结论 :Hcy可促进血管内皮细胞内ROS的产生 ,并抑制NO的形成 ,且呈剂量

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞株ECV-304生长的抑制作用

目的 :观察同型半胱氨酸 (Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4细胞生长的影响 ,探讨高同型半胱氨酸血症 (HHCY)致动脉粥样硬化 (As)的机制。方法 :将不同浓度Hcy与ECV 30 4细胞体外共培养不同时间 ,倒置显微镜下观察细胞形态 ,MTT法检测细胞生长抑制率 ,3 H TdR掺入法检测细胞DNA合成。结果 :显微镜见对照组细胞呈单层鹅卵石样紧密排列 ,而实验组随Hcy浓度的升高及作用时间的延长 ,细胞排列杂乱 ,聚集成团。低浓度Hcy对细胞生长的抑制作用不明显 ,5 .0、10 .0mmol/LHcy对细胞生长呈现抑制作用 ,且两组浓度作用 72h的生长抑制率高于作用 4 8h(P <0 .0 1)。 5 .0、10 .0mmol/LHcy作用 4 8h、72h ,3 H TdR掺入抑制率高于相应对照组和低浓度组 ,且作用 72h的掺入抑制率显著高于 4 8h(P <0 .0 1)。结论 :Hcy对VEC具有直接损伤作用 ,可以时间及剂量依赖方式抑制ECV 30 4细胞的生长及DNA的合成。

蒿甲醚对体外培养SGC-7901细胞及ECV-304细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察中药蒿甲醚对体外培养SGC-7901细胞及ECV-304细胞增殖及细胞周期的影响。方法:取对数生长期的SGC-7901细胞配制成5×104mL-1的单细胞悬液,接种于96孔板,培养24h,加入不同浓度(1000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25mg/L)的蒿甲醚,以生理盐水为空白对照,继续培养48h,采用MTT法测定SGC-7901细胞的生长抑制率和IC50,并以人脐静脉内皮细胞ECV-304作对照。应用流式细胞仪分析500mg/L蒿甲醚作用24、48、60、72、84h后细胞凋亡率和细胞周期变化。结果:随着药物浓度的增加和作用时间的延长,蒿甲醚对SGC-7901和ECV-304细胞的生长抑制作用具有时间和剂量依赖性(P<0.05)。蒿甲醚作用于SGC-7901、ECV-304细胞24、48、72h的IC50分别为(504.74±3.87)、(130.46±3.12)、(83.46±2.92)和>1000、>1000、(384.42±13.74)mg/L,2种细胞间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。流式细胞术结果显示SGC-7901细胞出现明显的凋亡峰,随着作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高(P<0.05),细胞周期S及G2/M期细胞数大量减少,细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05)。结论:蒿甲醚具有诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。

Baicalein抑制人血管内皮细胞ECV-304的增殖和迁移

目的 探讨选择性 12 -脂氧酶抑制剂baicalein对血管内皮细胞增殖和移行的抑制作用。方法 采用倒置显微镜、光镜、流式细胞仪进行细胞周期分析、MTT检测、缺损闭合实验观察分析不同浓度baicalein作用后 ,人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞形态、增殖和迁移的变化。结果 (1)不同浓度 (0 .1～ 10 0 μM )的baicalein处理ECV 30 4细胞 2 4～ 12 0h后或一定浓度 (30 μM)的baicalein处理ECV 30 4细胞不同时间 (1～ 6d)后 ,内皮细胞变形 ,有不同程度的变性、坏死 ,与baicalein的浓度和作用时间成正比 ;(2 )细胞周期分析显示baicalein处理后细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,4 8h时相点最为显著 ;并在G0 /G1期前出现高于对照的凋亡峰 (Sub G1) ,12h时相点最高(10 .6 % ) (P <0 .0 1) ;(3)缺损闭合实验baicalein处理组的ECV 30 4细胞缺损区面积显著大于对照组 (P <0 .0 1)。结论 选择性 12 脂氧酶抑制剂baicalein抑制血管内皮细胞的增殖和迁移 ,初步证明亦有诱导凋亡的作用 。

人巨细胞病毒感染对单核细胞和内皮细胞株ECV-304间趋化和黏附的增强作用

目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对单核细胞及内皮细胞株表达趋化因子的影响,以及对两者之间趋化和黏附的影响。方法 通过ELISA法和半定量RT-PCR的方法,检测CMV感染对单核细胞株(THP-1)及内皮细胞株(ECV-304)几种趋化因子及其受体表达的改变,同时通过趋化实验和黏附实验研究内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附的改变。结果 HCMV感染可刺激ECV-304分泌MCP-1、GROα,在mRNA水平可改变内皮细胞MCP-1、CRO-α和IL-8表达,先下调后上调(IL-8除外);而对单核细胞趋化因子受体CCR2、CXCR2的表达在mRNA水平却有明显的下调作用(P<0.05)。HCMV感染可显著增强内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附。结论 HCMV感染可增强内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附,参与炎症反应,这可能与CMV上调内皮细胞趋化因子表达有关。

脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对下游粘附分子及趋化因子基因表达的影响

目的探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下脂质体(invivoLiposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其细胞分子表达的影响。方法ECV-304在10%FBS的RPMI1640培养液,37℃、5%CO2条件下培养,生长至单层融合后进行试验。使用前配制Liposome/decoyODN和scrambledODN复合物,Liposome与ODN的+/-电荷比率为2。应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在4℃条件下,ODN浓度1.0μM的ECs缺氧保存6h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照,观察Liposome介导ODN对ECV-304的转染效率。利用RT-PCR方法检测各组ECV-304的ICAM-1、VCAM-1、IL-8、MCP-1以及P-selectin的mRNA表达。结果在ECs中、4℃缺氧保存ECV-3046h后,Liposome介导ODN对ECV-304转染的MFI为1072.71±33.14,是裸ODN转染的91.1倍,细胞对ODN的摄取率为93.06±2.60%,是裸ODN转染的71.5倍。Liposome介导ODN转染的ECV-304,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞浆,胞核内可见强荧光颗粒;而裸ODN转染的ECV-304,胞浆内偶见少量荧光,胞核内未见荧光颗粒。RT-PCR检测显示Liposome/decoyODN转染ECV-304后,其ICAM-1,VCAM-1,IL-8,MCP-1以及P-selectin的mRNA的?

CD40L诱导ECV-304细胞VCAM-1表达的分子机制

目的 研究人类脐静脉内皮细胞(ECV-304)、CD40/CD40L系统诱导血管细胞黏附分-1(VCAM-1)表达的分子机制。方法 体外培养ECV-304,免疫印迹分析法及TransAMTM系统分别检测CD40L干预前后转染核因子-κB(NF-κB)P65的表达量及活性。阳离子脂质体介导法短暂转染NF-κB(P65)正反义寡核苷酸(ODN),流式细胞仪检测VCAM-1表达。结果CD40L干预后24 h,VCAM-1的表达显著升高(P<0.05);未干预内皮细胞核内几乎无P65蛋白的表达,CD40L刺激30 min后,P65蛋白表达显著升高(P<0.01);CD40L干预后内皮细胞核抽提物的NF-κB(P65)转录因子活性明显升高。阳离子脂质体转染P65反义ODN至内皮细胞,可以显著抑制 rhsCD40L介导的VCAM-1的表达(P<0.05),转染P65正义ODN则不能抑制rhsCD40L介导的VCAM-1的表达。结论 NF-κB的活化可能部分参与了CD40/CD40L介导VCAM-1表达的信号转导途径。

缺氧对ECV-304细胞CASK表达及细胞内分布的影响

目的了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化。方法将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2)条件培养1、3、6、12h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况。结果ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3h开始增加,6h达高峰,12h下降但仍高于正常。免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象。结论缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白。

瘦素(leptin)对ECV-304细胞氧化应激的保护作用

目的:研究外源性瘦素(leptin)在细胞氧化应激中对细胞存活率的影响,探讨leptin在抗氧化应激方面的作用。方法:利用H2O2诱导人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞建立细胞氧化应激模型,设立正常对照、单纯损伤和不同浓度leptin干预组,每组7例,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;比色法测定细胞上清液中丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与正常对照组相比,加入外源性leptin的三组正常ECV-304细胞存活率无显著变化,但25μg/Lleptin组有升高的趋势,100μg/Lleptin组有降低的趋势。与单纯损伤组相比,加入外源性leptin的三组损伤ECV-304细胞存活率显著升高(P均<0.05)。与单纯损伤组相比,加入外源性leptin的三组ECV-304细胞上清液中MDA生成量和LDH释放量显著下降(P均<0.05)。结论:leptin对ECV-304细胞的氧化应激具有剂量依赖性的保护作用。

瘦素对血管内皮细胞ECV-304缺氧/复氧损伤的保护作用

探讨外源性瘦素(Leptin)对血管内皮细胞ECV-304缺氧/复氧(H/R)损伤保护作用及其作用机制。建立人脐静脉(ECV-304)内皮细胞缺氧/复氧损伤模型,观察不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用。设立正常对照组、损伤组、干预组,每组6例;利用试剂盒测定乳酸脱氢酶、丙二醛和超氧化物歧化酶的释放量;四唑盐比色法(MTT)测定血管内皮细胞的存活率。结果显示,单纯缺氧组和缺氧/复氧组均可见细胞变圆、收缩、脱落;细胞死亡率较正常组增加;细胞上清中丙二醛(MDA)与乳酸脱氢酶(LDH)含量增加,超氧化物歧化酶(SOD)含量降低;缺氧/复氧组较单纯缺氧组损伤更加明显,与正常培养组相比具有显著意义(P<0.05)。Leptin晚期预处理后,细胞形态基本上保持正常,上述检测指标与缺氧/复氧组相比有显著意义(P<0.05)。并且50μg/LLeptin的保护作用最为明显。表明Leptin对ECV-304细胞缺氧/复氧损伤的保护作用具有剂量依赖性。