miR-145-5p在原发性高血压患者血清中的表达及其对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-145-5p在原发性高血压(EH)患者血清中的表达及对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响。方法以2019年1月至2022年3月于山西医科大学汾阳学院就诊的160例EH患者及160例同期体检正常者为研究对象,RT-qPCR检测EH患者及同期体检正常者血清中的miR-145-5p表达水平。体外培养HUVEC,将之分为对照组、miR-145-5p mimic组、mimic-NC组、miR-145-5p inhibitor及inhibitor-NC组,CCK-8法检测各组HUVEC增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组HUVEC凋亡情况;Western blot检测各组HUVEC增殖、凋亡相关蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病基因-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)]表达情况。结果miR-145-5p在EH患者血清中的表达水平明显低于体检正常者(P<0.05);与对照组、mimic-NC组比较,miR-145-5p mimic组HUVEC细胞增殖率及PCNA、Cyclin D1蛋白表达均增加,早期凋亡率、晚期凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达均减少(P<0.05);与对照组、inhibitor-NC组比较,miR-145-5p inhibitor组HUVEC细胞增殖率及PCNA、Cyclin D1蛋白表达均减少(P<0.05),早期凋亡率、晚期凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.05)。结论miR-145-5p在EH患者血清中呈低表达,过表达miR-145-5p可促进HUVEC增殖并抑制其凋亡。

神经调节蛋白4对2型糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨神经调节蛋白4(Nrg4)对2型糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响。方法将C57小鼠分为对照(Vehicle)组、糖尿病(DM)组和Nrg4干预糖尿病小鼠(Nrg4)组。Nrg4组腹腔注射Nrg4重组蛋白(100μg/kg,3次/周),Vehicle组与DM组小鼠注射等量生理盐水,干预周期均为8周。实验结束后,TUNEL荧光染色检测主动脉内皮细胞凋亡,Western blot检测主动脉内皮组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Cleaved-caspase 3的表达。结果与Vehicle组相比,DM组主动脉内皮细胞凋亡率明显升高[(33.0±5.4)%vs.(20.5±3.0)%;P<0.05],促凋亡蛋白Bax与凋亡执行蛋白Cleaved-caspase 3表达明显增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少(P<0.05);而Nrg4干预明显抑制糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡[(19.2±3.8)%vs.(33.0±5.4)%;P<0.05],降低Bax与Cleaved-caspase 3的表达并促进Bcl-2表达(P<0.05)。结论Nrg4干预能缓解2型糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡。

晚期糖基化终末产物受体在波动性高糖致人冠状动脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究持续性高糖(CHG)和波动性高糖(IHG)环境下,人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)的细胞凋亡情况,并探索HCAECs细胞凋亡是否由晚期糖基化终末产物受体(RAGE)介导发生。方法取对数生长期的HCAECs分为4组:①正常血糖组(CNG组,5 mmol/L葡萄糖);②持续性高糖组(CHG组,20 mmol/L葡萄糖);③波动性高糖组(IHG组,5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖每8 h波动1次);④波动性甘露醇对照组(IM组,5 mmol/L和20 mmol/L甘露醇每8小时波动1次,保持与波动性高糖相同的波动性渗透压环境)。不同条件处理后的HCAECs,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力,流式细胞术检测HCAECs细胞凋亡情况,Westernblot检测Caspase-3、RAGE的蛋白表达水平变化,qRT-PCR检测RAGE的转录水平变化情况。用靶向RAGE的shRNA慢病毒敲低HCAECs中RAGE的表达量,观察IHG中Caspase-3的活化表达情况。结果与CNG组相比,CHG组和IHG组细胞活力均降低(P<0.05),但IHG组细胞活力更低(P=0.035);IHG组细胞凋亡率增加(P=0.028),Caspase-3活化状态(P=0.037)和RAGE表达量显著增加(P<0.05)。用靶向RAGE的shRNA慢病毒敲低RAGE表达水平,发现波动性高糖导致的细胞凋亡情况得到明显改善(P<0.05)。结论波动性高糖可通过增强RAGE表达,促进细胞凋亡,引起HCAECs损伤。

高糖环境下XIST对人视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨高糖环境下长链非编码RNA X-非活性特异转录本(XIST)对人视网膜血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法:以人视网膜血管内皮细胞为研究对象,设对照组和高糖组,分析高糖对人视网膜血管内皮细胞XIST表达的影响;设对照组、高糖组、高糖+XIST组、高糖+阴性对照组,分析过表达XIST对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响;设对照组、高糖组、高糖+XIST组、高糖+XIST+pcDNA3.1-Wnt1组、高糖+XIST+pcDNA3.1-CON组,分析XIST通过Wnt1/β-catenin通路对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)高糖组XIST相对表达量较对照组低(P<0.05)。(2)与对照组比,高糖组细胞增殖活力低,而凋亡率、Wnt1和β-catenin水平高(P<0.05);与高糖+阴性对照组比,高糖+XIST组增殖活力高,而凋亡率、Wnt1和β-catenin水平低(P<0.05)。(3)与对照组比,高糖组细胞增殖活力低,而凋亡率高(P<0.05);与高糖组比,高糖+XIST组增殖活力高,而凋亡率低(P<0.05);与高糖+XIST+pcDNA3.1-CON组比,高糖+XIST+pcDNA3.1-Wnt1组增殖活力低,而凋亡率高(P<0.05)。结论:XIST通过负调控Wnt1/β-catenin通路抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡。

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景:同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,但机制尚不清楚。目的:探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸的干预浓度均为100μmol/L。干预细胞72 h后,应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.01);②与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中hsa-circ-0001360的表达明显升高(P<0.01);③hsa-circ-0001360在人脐静脉内皮细胞的细胞质中表达显著高于细胞核(P<0.01);④与干扰对照组或干扰对照+同型半胱氨酸组相比,干扰hsa-circ-0001360组和干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);⑤与过表达对照组或过表达对照+同型半胱氨酸组相比,过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);⑥以上结果表明,hsa-circ-0001360可以促进同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡。

双波长脉冲染料激光抑制血管瘤内皮细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨双波长脉冲染料激光对血管瘤内皮细胞(HemECs)的增殖和凋亡的影响。方法体外分离培养HemECs并随机分为4组:脉冲染料激光组(PDL,595 nm波长)、Nd∶YAG激光(1064 nm波长)组、双波长组(595 nm PDL+1064 nm Nd∶YAG)、对照组(不照射激光)。于照射结束后第1、3、7天,采用CCK-8法检测各组HemECs的增殖能力,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测新生血管生成相关蛋白VEGF、bFGF的表达水平。结果激光照射后HemECs细胞较对照组细胞逐渐变长、变疏。照射后第1天,与对照组相比,双波长组HemECs的增殖抑制率显著升高(P=0.015),而PDL组、Nd∶YAG组的增殖抑制率均无明显改变(均P>0.05);照射后第3、7天,与对照组相比,PDL组、Nd∶YAG组及双波长组的HemECs的增殖活性、VEGF和bFGF蛋白表达水平均显著降低(均P<0.001),增殖抑制率与凋亡率均显著升高(均P<0.001),且双波长组较PDL组、Nd∶YAG组更明显(均P<0.05)。结论双波长脉冲染料激光可显著抑制HemECs增殖、促进其凋亡,降低血管生成因子水平,其作用较595 nm PDL或1064 nm Nd∶YAG单波长激光照射更明显。

金丝桃苷对棕榈酸诱导内皮细胞凋亡的保护作用及相关机制的实验研究

目的:研究金丝桃苷对棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响和相关机制。方法:建立棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型,实验分为正常组、棕榈酸组(50μmol/L棕榈酸)、金丝桃苷组(50μmol/L棕榈酸+0.1μmol/L金丝桃苷),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax(Bcl-2相关X蛋白)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2蛋白)和内质网应激相关蛋白CHOP(C/EBP同源蛋白)、GRP78(葡萄糖调节蛋白78)的表达水平,PCR检测凋亡相关基因Bax、CHOP mRNA水平,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:与正常组比较,棕榈酸组细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Bax/Bc-l2蛋白表达比值显著升高(P<0.01),Bax mRNA表达水平显著升高(P<0.01),迁移能力显著降低。与棕榈酸组比较,金丝桃苷组细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比值显著降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平显著降低(P<0.01),迁移能力显著升高(P<0.01)。研究还发现,棕榈酸可提高CHOP(P<0.01)表达(P<0.01),降低GRP78表达(P<0.01);与棕榈酸组相比,金丝桃苷组CHOP和GRP78蛋白和mRNA表达水平均逆转(P<0.01)。结论:金丝桃苷能够缓解棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞内质网应激,减少细胞凋亡,提高细胞迁移能力。

伊曲康唑对人血管瘤内皮细胞增殖和凋亡的体外研究

目的 检测不同浓度的伊曲康唑对人血管瘤内皮细胞凋亡的影响,为伊曲康唑治疗血管瘤的机制研究提供依据。方法 体外培养的人血管瘤内皮细胞(HemECs)经不同浓度伊曲康唑干预不同时间后,倒置显微镜观察HemECs形态学变化;CCK-8法检测HemECs细胞抑制率;流式细胞术检测伊曲康唑诱导HemECs的凋亡率。结果 当伊曲康唑浓度≥30μg/mL时,作用效果逐渐显著,浓度与细胞凋亡呈正相关性,各浓度的抑制率和空白组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。伊曲康唑干预时间与对HemECs细胞增殖的抑制和凋亡呈正相关。结论伊曲康唑能抑制HemECs增值有抑制作用,并促进其凋亡。浓度越高,干预时间越长对HemECs的细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的促进作用会越显著。浓度≥30μg/mL时,效果会逐渐显著,与细胞凋亡和抑制细胞增殖呈正相关性,24 h为较为适宜的干预时间。

流体剪切力通过激活Piezo 1蛋白促进肾小球内皮细胞凋亡

目的探讨流体剪切力(FS)对肾小球内皮细胞(GECs)凋亡的影响及Piezo 1蛋白在其中的作用。方法对SD大鼠肾小球内皮细胞进行培养,使用Flexcell-T5000拉力仪模拟流体剪切力刺激,使用流式细胞测量技术检测细胞凋亡水平,通过免疫荧光染色试验检测Piezo 1蛋白在GECs中的表达水平。使用Ca 2+指示剂(Cal-590 AM)观察流体剪切力对Piezo 1通道的激活作用。使用化学激动剂Yoda1、抑制剂GsMtx 4及慢病毒Lv-shPiezo 1调控Piezo 1蛋白功能或表达后,观察Piezo 1对GECs凋亡的影响。结果与对照组相比,剪切力组细胞凋亡率增高(P<0.05),且随着流体剪切力强度升高,细胞凋亡率增高;Piezo 1在GECs中普遍表达,且流体剪切力可以激活Piezo 1通道并增强其表达;激动剂Yoda 1可以促进GECs的凋亡,抑制剂GsMtx 4可以抑制流体剪切力诱导的凋亡;Lv-shPiezo 1敲低GECs中Piezo 1的表达,且敲低组GECs的凋亡率较对照组及Lv-Ctrl组降低(P<0.05)。结论流体剪切力通过激活Piezo 1蛋白及增强其表达促进GECs的凋亡。

PM_(2.5)诱导血管内皮细胞凋亡在老年冠心病中的作用机制

目的分析老年冠心病患者的心功能分级与本市大气中细颗粒物(PM_(2.5))含量的相关性,并通过体外培养血管内皮细胞,探讨PM_(2.5)是否会导致血管内皮细胞凋亡,并进一步探讨炎症和氧化应激在其中的可能作用和机制。方法本研究分为两部分,第一部分为临床研究,回顾性收集安徽中医药高等专科学校附属芜湖市中医院2021年1月—2022年9月诊断为冠心病的103例老年患者,按照冠心病的心功能分级将其分为1~4级,分析老年冠心病患者的心功能分级与本市大气中PM_(2.5)含量的变化趋势。首先按照冠心病的心功能分级,在心功能<3级和心功能≥3级2组病例中,分别比较PM_(2.5)浓度、血压、糖尿病史、糖化血红蛋白和住院史的差异;其次按照PM_(2.5)浓度分组,在PM_(2.5)<75μg/m^(3)和PM_(2.5)≥75μg/m^(3)2组人群中,分别比较老年冠心病患者的心功能分级、血压、糖尿病史、糖化血红蛋白及住院史的差异。第二部分则通过培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),予以不同浓度梯度的PM_(2.5)干预HUVECs细胞48 h后,Tunel染色检测细胞凋亡情况,荧光显微镜观察ROS的表达与分布,ELISA方法检测SOD活力,RT-PCR方法检测细胞中炎症因子IL-6的mRNA表达。结果第一部分研究结果显示老年冠心病患者的心功能分级与本地区空气中PM_(2.5)的浓度变化趋势一致,且心功能<3级和心功能≥3级2组人群所暴露的大气PM_(2.5)浓度差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分研究结果显示不同浓度的PM_(2.5)可诱导HUVECs细胞凋亡;PM_(2.5)呈浓度依赖性地诱导HUVECs细胞中ROS表达和分布增多;并抑制HUVECs细胞的SOD活性(P<0.05);不同浓度PM_(2.5)可诱导HUVECs细胞的炎症因子IL-6 mRNA表达量明显上调(P<0.05)。结论老年冠心病的心功能严重程度与大气中的PM_(2.5)含量高低有关;PM_(2.5)可导致血管内皮细胞凋亡,同时刺激炎症因子表达和氧化应激水平的增加,这可能是其参与老年患者冠心病进展的重要机制之一。

丹酚酸A调控LncRNA TSPOAP1-AS1缓解H_(2)O_(2)诱导脑微血管内皮细胞凋亡及血管新生能力的影响

目的 探讨丹酚酸A调控lncRNA TSPAOP1-AS1缓解H2O2诱导脑微血管内皮细胞凋亡及血管新生能力的影响。方法 选取2021年1月-2023年3月在我院收治的80例高血压脑出血患者和健康体检者,分别设为研究组和对照组。将对数生长的HBMECs分为9组,即Control组、H_(2)O_(2)组、SAA-L组、SAA-M组、SAA-H组、si-TSPOAP1-AS1组、si-NC组和pcDNA-TSPOAP1-AS1组。RT-PCR法检测患者血清及细胞中TSPOAP1-AS1的相对表达水平;分别采用CCK-8法、流式细胞仪和Matrigel体外成管试验检测细胞存活率、凋亡率及血管生成能力;ELISA检测细胞氧化应激;蛋白质印迹法检测细胞中Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 与对照组(1.00±0.09)相比,研究组患者血清中TSPOAP1-AS1相对表达量(4.36±0.37)明显升高(P<0.01)。与Control组比较,H2O2组细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平(2.65±0.23)、细胞凋亡率(18.29±1.65)、细胞中MDA含量(40.81±3.72)和Caspase-3蛋白(0.78±0.08)、Bax蛋白(0.82±0.09)表达均明显增加,细胞存活率(35.36±3.65)、小管形成数目(85.32±7.68)、细胞中SOD活性(15.48±1.63)、GSH-Px含量(9.43±0.82)及Bcl-2蛋白(0.21±0.02)表达均明显降低(P<0.01);与H2O2组相比,SAA-H组和si-TSPOAP1-AS1组细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平(1.21±0.12)(1.30±0.13)、细胞凋亡率(5.31±0.50)(6.01±0.62)、细胞中MDA含量(8.95±0.82)(9.39±0.92)和Caspase-3蛋白(0.32±0.04)(0.35±0.04)、Bax蛋白(0.40±0.05)(0.45±0.05)表达均明显降低,细胞存活率(87.21±7.64)(82.31±7.50)、小管形成数目(198.75±18.32)(180.31±17.64)、细胞中SOD活性(60.27±5.89)(55.26±5.24)、GSH-Px含量(40.63±4.17)(38.76±3.27)及Bcl-2蛋白(0.70±0.08)(0.68±0.07)表达均明显升高(P<0.01)。与SAA-H组相比,pcDNA-TSPOAP1-AS1组细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平(2.49±0.20)、细胞凋亡率(16.90±1.60)、细胞中MDA含量(39.01±3.83)和Caspase-3蛋白(0.72±0.08)、Bax蛋白表(0.78±0.08)达均明显增加,细胞存活率(40.47±2.89)、小管形成数目(90.15±8.62)、细胞中SOD活性(20.16±2.11)、GSH-Px含量(11.56±1.08)及Bcl-2蛋白(0.28±0.03)表达均明显降低(P<0.01)。结论 丹酚酸A可促进H2O2诱导的HBMECs存活和血管生成,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激反应,其作用机制可能和抑制lncRNA TSPOAP1-AS1相关。

氧化低密度脂蛋白对人血管内皮细胞ECV-304促增殖及诱导凋亡的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (ox -LDL)对血管内皮细胞损伤作用的多样性。方法 :通过细胞形态学、台盼蓝活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)、流式细胞凋亡和细胞凋亡小分子量DNA片段凝胶电泳测定法 ,观察 (0 1、1、10、10 0、15 0和 2 0 0 )mg/L的ox-LDL的条件培养液对人血管脐静脉内皮细胞ECV- 3 0 4的影响。结果 :(0 1- 10 )mg/L的ox -LDL对ECV - 3 0 4细胞具有促增殖作用 ,而增加浓度达 10 0mg/L及以上时 ,其表现则主要是对ECV - 3 0 4的细胞毒性 ;而且 ,这种细胞毒性以当ox -LDL的浓度达到 15 0和 2 0 0mg/L时 ,在12h开始诱导ECV - 3 0 4细胞出现凋亡 ,分别达 15 86%和 2 1 89%。而当ox-LDL作用ECV - 3 0 4细胞 18h后 ,则出现伴随凋亡的细胞坏死。结论 :ox -LDL具有很强的细胞毒性 ,其对内皮细胞的细胞毒性经历了促细胞增殖、凋亡前期。

哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响

目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。

HIF-1α对缺氧条件下人脐静脉内皮细胞ECV304增殖和凋亡的影响

缺氧是临床常见下肢静脉性疾病如静脉曲张、静脉血栓等形成与发展的重要原因之一。低氧诱导因子1α（hypoxiainduciblefactors-1α，HIF-1α）是最早发现的缺氧状态下特异性发挥作用的DNA结合蛋白，当缺氧发生时，HIF-1α多有特异性表达并引起一系列相关分子改变，在疾病发生进展过程中广泛作用于细胞增殖、细胞凋亡和细胞分化等过程。

DSS诱导血管内皮细胞ECV304凋亡及机制研究

为了研究葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导血管内皮细胞:ECV304增殖和凋亡的影响。体外培养血管内皮细胞ECV304,采用不同浓度DSS诱导细胞,流式细胞术分析细胞凋亡、活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、细胞周期;WST-1法检测细胞增殖抑制率。结果显示,随着DSS浓度的增加细胞凋亡率增加,并导致细胞GOG1期阻滞,细胞内活性氧含量减少,同时线粒体膜电位下降,细胞增殖抑制率明显升高。结果表明,DSS可以抑制血管内皮细胞ECV304增殖并诱导细胞凋亡。

人巨细胞病毒诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染ECV304血管内皮样细胞的致病机制。方法常规方法传代细胞和接种病毒。以PCR法和间接免疫荧光法检测病毒即刻早期基因(IE gene)及其蛋白表达;相差显微镜及电子显微镜观察病毒感染后细胞和细胞器形态变化;DNA梯度法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果病毒感染后72 h开始出现胞体变圆、缩小、脱壁,胞质内颗粒增多,细胞边缘模糊不清的特征,可明显检测出病毒特异IE gene及其蛋白表达;电镜结果显示病毒感染96 h后,胞质内明显空泡化,细胞膜微绒毛减少,核染色质浓集、边缘化,线粒体出现溶酶体化、空泡化和自噬现象,呈早期凋亡特征;DNA梯度电泳结果显示感染细胞DNA片段化特征的条带;流式细胞仪检测发现感染4 d和6 d时,细胞调亡率分别为4.1%和45.7%。结论巨细胞病毒在体外细胞培养中可诱导ECV304血管内皮样细胞的凋亡。

沉默lncRNA ANRIL对Ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡相关蛋白的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA(ANRIL对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡相关蛋白的影响。方法:培养HUVECs,设置空白对照(control)组和不同浓度(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)Ox-LDL诱导组,用RT-qPCR检测ANRIL的表达量。采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默ANRIL基因表达,将siANRIL(ANRIL基因沉默组)和siNC(沉默对照组)转入细胞内,培养24 h,再选择最佳Ox-LDL浓度(100 mg/L)干预24 h进行实验。用RT-qPCR检测转染ANRIL干扰片段后人脐静脉内皮细胞中ANRIL表达情况,Western blot检测BAX和BCL-2的相对表达量。结果:Ox-LDL干预组ANRIL表达量较control组显著增高(P<0.05),且随着Ox-LDL浓度增加,ANRIL的表达越高(P<0.05)。转染ANRIL干扰片段后,与control组相比较,Ox-LDL组、Ox-LDL+siNC组和Ox-LDL+siANRIL组ANRIL的表达水平显著上调(P<0.05);与Ox-LDL组比较、Ox-LDL+siANRIL组ANRIL的表达水平显著下调(P<0.05),Ox-LDL+siNC组ANRIL表达未见明显差异;与Ox-LDL+siNC组相比,Ox-LDL+siANRIL组ANRIL的表达水平显著下降(P<0.05)。与control组相比较,Ox-LDL组、Ox-LDL+siNC组和Ox-LDL+siANRIL组BAX上调,BCL-2下调(P<0.05)。同Ox-LDL组比较,OxLDL+siANRIL组BAX下调,BCL-2上调(P<0.05),Ox-LDL+siNC组BAX和BCL-2表达未见明显差异。与Ox-LDL+siNC组相比,Ox-LDL+siANRIL组BCL-2上调,BAX下调(P<0.05)。结论:Ox-LDL可以上调ANRIL的表达量,使内皮细胞功能障碍,导致动脉粥样硬化的发生。沉默lncRNA ANRIL使BAX下调,BCL-2上调,减轻Ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,抑制AS的进程。

薯蓣皂苷通过调控PDCD4对高糖诱导的血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨薯蓣皂苷(DIO)通过调控程序性细胞死亡(PDCD)4对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组(葡萄糖浓度为5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30 mmol/L)、高糖+DIO-L组(DIO 5μg/ml,进行高糖处理)、高糖+DIO-M组(DIO 15μg/ml,进行高糖处理)、高糖+DIO-H组(DIO 30μg/ml,进行高糖处理),高糖+si-NC组(转染si-NC后进行高糖处理)、高糖+si-PDCD4组(转染si-PDCD4后进行高糖处理)、高糖+DIO+pcDNA组(转染pcDNA后进行高糖和DIO 30μg/ml处理)、高糖+DIO+PDCD4组(转染PDCD4后进行高糖和DIO 30μg/ml处理)。采用MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测PDCD4、p21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PDCD4 mRNA表达。结论高糖组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组,细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);高糖+DIO各剂量组的细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显高于对照组,细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。高糖处理HUVECs后,PDCD4 mRNA和蛋白明显增加,加入30μg/ml DIO作用细胞后PDCD4 mRNA和蛋白明显降低(P<0.05)。高糖+si-PDCD4组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显高于高糖+si-NC组,而细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显低于高糖+si-NC组(P<0.05)。高糖+DIO+PDCD4组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显低于高糖+DIO+pcDNA组,而细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显高于高糖+DIO+pcDNA组(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可以通过下调PDCD4表达抑制高糖诱导的血管内皮细胞的增殖和促进细胞的凋亡。

miR-150-5p对脑小血管病大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响

目的 分析miR-150-5p对脑小血管病(CSVD)大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响。方法 56只雄性大鼠14只作为正常组并不做处理,剩余42只建立CSVD模型,建模中途死亡6只。将建模成功的大鼠随机分为模型组、上调组、下调组,每组8只,做miR-150-5p转染,鉴定miR-150-5p转染率、氧化应激指标水平、神经凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果 与正常组、模型组相比,上调组miR-150-5p表达量升高,下调组miR-150-5p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-150-5p转染成功。与正常组相比,模型组、下调组细胞凋亡率、LDH释放率、丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与上调组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,具有统计学差异(P<0.05)。结论 miR-150-5p可能作用于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,影响CSVD大鼠脑微血管内皮细胞凋亡。

胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡

目的研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预,高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型,高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞,高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞,所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果与对照组比较,高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比,高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P<0.05),Bcl-2的表达明显降低(P<0.05);与高糖组相比,高糖+ghrelin组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达均明显降低(均P<0.05),Bcl-2的表达明显升高(P<0.05)。与高糖+ghrelin组相比,高糖+ghrelin+衣霉素组的细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论Ghrelin可以减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡,其机制可能与ghrelin抑制激活的内质网应激有关。