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EDAG-1在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达 被引量:8
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作者 周颖 许望翔 +6 位作者 詹轶群 李长燕 徐诚望 郑红 李菲菲 杨晓明 汪思应 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1238-1243,共6页
背景与目的:EDAG-1(embryonicdevelopassociatedgene1,EDAG-1)定位于9q22,在造血细胞特异表达,并与造血调控关系密切。本研究通过检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞中的表达和编码区基因结构,探讨EDAG-1与白血病和淋巴瘤发病的关系。... 背景与目的:EDAG-1(embryonicdevelopassociatedgene1,EDAG-1)定位于9q22,在造血细胞特异表达,并与造血调控关系密切。本研究通过检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞中的表达和编码区基因结构,探讨EDAG-1与白血病和淋巴瘤发病的关系。方法:选用白血病或淋巴瘤细胞株共15种,采用RT-PCR法检测表达EDAG-1基因的细胞株,并回收该基因cDNA编码区片段,构建相应的重组质粒并测序分析编码区突变情况。通过Northernblot和Westernblot分别确证EDAG-1mRNA和蛋白在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达情况,利用Southernblot检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞株中基因重排和扩增情况。结果:红系(K-562、HEL)、巨核系(DAMI、MEG-01)、Jurkat细胞在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG-1,但其编码区结构未发现异常,也没有EDAG-1基因组的扩增和重排。发现HL-60细胞缺失EDAG-1,HuT78细胞EDAG-1发生重排。结论:EDAG-1可能与红系、巨核系白血病的发病机制有关,该基因激活的机制可能与编码区突变无关。 展开更多
关键词 白血病 淋巴瘤 edag-1 重排 表达
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利用ChIP-seq技术研究转录因子EDAG在全基因组的结合谱 被引量:3
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作者 董小明 郑巍薇 +3 位作者 尹荣华 詹轶群 杨晓明 李长燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期578-584,共7页
为揭示红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)在造血中的作用机制,利用ChIP-seq分析EDAG的全基因组结合谱.首先从产妇脐带血分离CD34+细胞,EPO诱导CD34+细胞培养5 d.利用EDAG抗体进行染色体免疫共沉淀(chro... 为揭示红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)在造血中的作用机制,利用ChIP-seq分析EDAG的全基因组结合谱.首先从产妇脐带血分离CD34+细胞,EPO诱导CD34+细胞培养5 d.利用EDAG抗体进行染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验、Western印迹法检测EDAG抗体的富集情况.将富集到的DNA样品进行高通量测序,最后利用生物信息学分析测序结果.成功富集染色体DNA,经高通量测序和生物信息学分析,共得到1 292个EDAG结合位点的Peaks数目,代表了975个结合的基因且错误发现率(false discovery rate,FDR)小于0.0001.EDAG Peaks主要分布在基因间区和内含子区.进一步利用Q-PCR对ChIP-Seq数据进行了验证,证实EDAG可结合在检测的靶基因调控区上.将EDAG结合的基因进行基因功能(gene ontology,GO)注释,表明EDAG参与了细胞周期、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡及信号通路等多种生物学过程.综上,利用ChIP-seq技术在促红细胞生成素(EPO)诱导分化的CD34+细胞中鉴定了1 292个EDAG结合的peaks对应975个基因,并对该结果进行了随机验证,提示EDAG广泛参与了多种生物学过程.该研究为揭示EDAG的功能及作用机制提供了线索. 展开更多
关键词 红系分化相关基因(edag) 染色体免疫共沉淀-高通量测序(ChIP-seq) CD34+细胞 生物信息学分析
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敲低EDAG加强NPM1蛋白的降解并增加AML病人对药物的敏感性(英文) 被引量:2
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作者 郑巍薇 杨扬 +9 位作者 张美江 董小明 唐刘军 王晓辉 詹轶群 于淼 葛常辉 宁红梅 李长燕 杨晓明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第9期877-886,共10页
Nucleophosmin(NPM1或B23.1)是在细胞核内广泛表达的蛋白磷酸酶,在多方面发挥重要作用,如核糖体合成、中心体复制、细胞周期控制、细胞增殖及转化.NPM1是急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中最常见的突变基因之一.红系分化... Nucleophosmin(NPM1或B23.1)是在细胞核内广泛表达的蛋白磷酸酶,在多方面发挥重要作用,如核糖体合成、中心体复制、细胞周期控制、细胞增殖及转化.NPM1是急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中最常见的突变基因之一.红系分化相关基因(erythroid differentiation associated gene,EDAG)是在造血组织特异表达的基因,在造血细胞的增殖与谱系分化调节方面发挥重要作用.在AML病人中,高表达的EDAG与较差的预后相关联.我们前期研究结果显示,EDAG与NPM1相结合并调节NPM1稳定性,但在AML病人体内EDAG与NPM1的关系,及EDAG与NPM突变体(NPMc+)的关系尚未明确.在本文中发现:在AML病人骨髓CD34+细胞中,敲低EDAG表达导致NPM1蛋白稳定性降低并提高了对柔红霉素的敏感性;EDAG虽不与突变体NPMc+相互作用,但在蛋白出核抑制剂(leptomycin B,LMB)作用下,过表达EDAG提高NPMc+蛋白稳定性;表达突变NPMc+的AML病人与表达NPM1蛋白的病人相比,其骨髓CD34+细胞对柔红霉素具有更高的敏感性,且敲低EDAG能微弱提高其敏感性.上述结果表明,EDAG在AML病人药物治疗中发挥的可能作用以及NPMc+"逃脱",使EDAG无法保护其稳定性,这提示了在AML病人药物治疗过程中EDAG的潜在作用,同时也提示,携带NPMc+蛋白的AML患者具有较好预后,可能与NPMc+蛋白"逃脱"出EDAG对其稳定性的保护有关. 展开更多
关键词 edag NPMl NPMc’ 柔红霉素 AML
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siRNA对白血病细胞株HEL中EDAG-1基因的干涉作用 被引量:2
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作者 周颖 程勇 +4 位作者 高宗侠 肖敏 冯定庆 沈国栋 凌斌 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期688-690,共3页
目的探讨抑制胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)的表达对白血病细胞株生长的影响及其机制。方法收集重组质粒转染包装病毒细胞的上清转染HEL细胞株,经嘌呤霉素筛选稳定抑制EDAG-1基因表达的细胞株,RT-PCR检测EDAG-1基因的抑制情况,运用MTT检... 目的探讨抑制胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)的表达对白血病细胞株生长的影响及其机制。方法收集重组质粒转染包装病毒细胞的上清转染HEL细胞株,经嘌呤霉素筛选稳定抑制EDAG-1基因表达的细胞株,RT-PCR检测EDAG-1基因的抑制情况,运用MTT检测转染细胞的增殖能力,并将稳定转染的细胞株种植到裸鼠皮下检测成瘤情况。结果成功建立了抑制EDAG-1基因表达的HEL细胞株。与HEL/negative相比,HEL/siRNA细胞株增殖速度降低(P<0.05),接种裸鼠皮下的肿瘤生长明显减慢(P<0.05)。结论沉默EDAG-1基因的表达可以抑制白血病细胞株的增殖,提示EDAG-1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。 展开更多
关键词 edag-1 RNA干扰 白血病 细胞凋亡
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EDAG-1在人髓系白血病细胞株中的表达 被引量:4
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作者 周颖 许望翔 +6 位作者 郑红 李菲菲 詹轶群 李长燕 徐诚望 杨晓明 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第3期173-177,共5页
目的 研究EDAG 1在人髓系白血病细胞株中的表达情况。方法 选取 4种人髓系白血病细胞株分别通过NorthernBlot、PCR、WesternBlot、SouthernBlot了解EDAG 1基因在mRNA、蛋白以及其基因组结构表达情况 ;通过凝胶阻滞实验分析选用白血病... 目的 研究EDAG 1在人髓系白血病细胞株中的表达情况。方法 选取 4种人髓系白血病细胞株分别通过NorthernBlot、PCR、WesternBlot、SouthernBlot了解EDAG 1基因在mRNA、蛋白以及其基因组结构表达情况 ;通过凝胶阻滞实验分析选用白血病细胞系NF κBDNA结合活性。结果 发现向红系分化的K 5 6 2、HEL在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG 1基因 ,但未发现突变、扩增和重排。HL 6 0细胞缺失EDAG 1基因。 4种白血病细胞株NF κBDNA结合活性是增强的 ,以高表达EDAG 1基因的细胞株明显。结论 红系白血病细胞株高表达EDAG 1基因 ,该基因的激活可能与编码区结构无关。 展开更多
关键词 白血病 基因表达 edag-1
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siRNA靶向EDAG-1基因对K562细胞株生长的影响 被引量:2
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作者 周颖 凌斌 +4 位作者 程勇 朱园园 冯定庆 沈国栋 程志祥 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第12期1002-1006,共5页
背景与目的:胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)是造血系统发育相关的新基因,定位于9q22。本研究探讨抑制EDAG-1基因的表达对白血病细胞株生长的影响及其机制。方法:将靶向EDAG-1基因的特异序列连接到逆转录病毒载体中,脂质体介导的重组质粒转... 背景与目的:胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)是造血系统发育相关的新基因,定位于9q22。本研究探讨抑制EDAG-1基因的表达对白血病细胞株生长的影响及其机制。方法:将靶向EDAG-1基因的特异序列连接到逆转录病毒载体中,脂质体介导的重组质粒转染包装病毒细胞(PT67),收集细胞上清感染K562细胞株,经嘌呤霉素筛选稳定抑制EDAG-1基因表达的细胞株,RT-PCR检测EDAG-1基因的抑制情况,应用MTT、流式细胞仪检测转染细胞的增殖能力及细胞周期。结果:成功构建了靶向EDAG-1基因的逆转录病毒重组质粒,建立了抑制EDAG-1基因表达的K562细胞株。抑制EDAG-1基因表达的细胞株增殖速度、增殖指数(PI)、增殖活性(SPF)相应降低,其G0/G1期细胞比例明显升高。结论:EDAG-1基因的沉默可以抑制白血病细胞株的增殖,使其阻滞在G0/G1期,提示EDAG-1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。 展开更多
关键词 edag-1 RNA干扰 白血病 细胞周期 培养的肿瘤细胞
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RACE策略扩增EDAG-1基因3′端及序列分析 被引量:1
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作者 程勇 周颖 +4 位作者 张红雁 马军 钱立庭 赵于飞 汪思应 《临床输血与检验》 CAS 2007年第4期289-292,共4页
目的通过RACE(rapid amplification of cDNA Ends)技术分析K-562细胞株中高表达的EDAG-1基因3′端。方法采用Marathon-ReadyTMcDNA方法扩增HLCM cDNA(人白血病细胞株K-562,Marathon-ReadyTMcDNA)的EDAG-1基因3′端,将扩增的特异带回收纯... 目的通过RACE(rapid amplification of cDNA Ends)技术分析K-562细胞株中高表达的EDAG-1基因3′端。方法采用Marathon-ReadyTMcDNA方法扩增HLCM cDNA(人白血病细胞株K-562,Marathon-ReadyTMcDNA)的EDAG-1基因3′端,将扩增的特异带回收纯化,构建到原核表达载体中,提取质粒并且测序分析。结果第1次扩增、第1次巢式PCR扩增未见明显特异带,2次巢式PCR结果可见200bp特异带,回收后连接到pMD18-T中,转化到大肠杆菌中并筛选阳性菌落,提取质粒测序,结果未发现该段序列存在点突变、插入或缺失。结论EDAG-1基因在白血病细胞株K-562中高表达的机制可能与3′端无关。 展开更多
关键词 RACE技术 CDNA edag 序列分析
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诱导K562细胞分化对EDAG基因表达的影响 被引量:1
8
作者 方芳 陈忠航 +2 位作者 张宸豪 许望翔 马爱新 《吉林医药学院学报》 2005年第4期195-197,共3页
目的研究EDAG在红系肿瘤分化中的表达及意义。方法用PCR的方法从人的血液基因组中分离出EDAG基因的调控区2200bp片段,将其克隆到pGL3-basic的含有荧光素酶报告基因的质粒中,转染K562细胞,用Hemin和PMA诱导细胞分化;通过不同时间检测荧... 目的研究EDAG在红系肿瘤分化中的表达及意义。方法用PCR的方法从人的血液基因组中分离出EDAG基因的调控区2200bp片段,将其克隆到pGL3-basic的含有荧光素酶报告基因的质粒中,转染K562细胞,用Hemin和PMA诱导细胞分化;通过不同时间检测荧光素酶报道基因的方法,观察用两种不同方法处理细胞后对EDAG基因表达的影响。结果用Hemin和PMA分别诱导K56272h和48h后,EDAG基因表达下调。结论用Hemin和PMA诱导K562细胞分化后,EDAG基因表达下调可能与细胞分化有关。 展开更多
关键词 edag 基因表达 诱导分化
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EDAG-1基因真核表达载体的构建及其对细胞恶性生物学行为的影响
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作者 郑贤芳 杨帆 +1 位作者 储著朗 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第11期1133-1137,共5页
目的构建胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1,并检测其对细胞的恶性生物学行为的影响。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法从白血病细胞株YAC-1中扩增到EDAG-1基因片段,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+... 目的构建胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1,并检测其对细胞的恶性生物学行为的影响。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法从白血病细胞株YAC-1中扩增到EDAG-1基因片段,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1。利用克隆PCR、限制性内切酶消化进行验证。将重组pcD-NA3.1(+)-EDAG-1真核表达载体和阴性对照的空载体pcDNA3.1分别转染到NIH3T3细胞和Ba/F3细胞中,应用软琼脂集落实验检测NIH3T3细胞转染前后的集落形成能力,流式细胞术检测Ba/F3细胞不依赖白介素-3(IL-3)抗凋亡能力以及其发生的机制。结果①扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与GenBank公布一致,克隆成功,且鉴定证实pcDNA3.1(+)-EDAG-1真核表达载体构建成功。②转染真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1后的NIH3T3细胞集落形成能力明显增高,而对照组不能形成集落。转染后Ba/F3细胞的不依赖IL-3抗凋亡能力明显提高。③在Ba/F3-EDAG细胞中,核因子κB的DNA结合活性明显高于对照细胞,而Stat3与Stat5的磷酸化未发生明显的变化。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDAG-1,为进一步研究EDAG-1基因在白血病和甲状腺癌细胞中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 edag-1 基因表达 克隆 基因转染 NF-ΚB 肿瘤
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德国汽车工程技术服务商EDAG公司落户上海
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作者 田海英 《汽车与配件》 北大核心 2005年第18期12-12,共1页
4月22日,正值上海2005年车展开幕的首日,德国EDAG公司在上海的嘉定工业园区举行了其在中国首家分公司——爱达克车辆工程(上海)有限公司的开业仪式。德国汽车工业协会主席等中外贵宾100多人参加了此次开业仪式。
关键词 德国 汽车工程技术服务商 edag公司 上海 工程设计
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敲低EDAG抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖
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作者 毕俊杰 董小明 +4 位作者 郑巍薇 詹轶群 葛志强 杨晓明 李长燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期571-578,共8页
为研究EDAG在人乳头状甲状腺癌病人组织中的表达及在乳头状甲状腺癌细胞中的作用,利用免疫组化检测31例乳头状甲状腺癌癌组织及癌旁组织中EDAG蛋白的表达,并进行数据分析.包装EDAG敲低慢病毒颗粒,感染乳头状甲状腺癌细胞系K1,建立EDAG... 为研究EDAG在人乳头状甲状腺癌病人组织中的表达及在乳头状甲状腺癌细胞中的作用,利用免疫组化检测31例乳头状甲状腺癌癌组织及癌旁组织中EDAG蛋白的表达,并进行数据分析.包装EDAG敲低慢病毒颗粒,感染乳头状甲状腺癌细胞系K1,建立EDAG敲低稳定细胞株,检测EDAG敲低对细胞增殖、克隆形成、周期和凋亡的影响.结果显示,EDAG蛋白在乳头状甲状腺癌癌组织中异常高表达,而在对应癌旁组织极低表达或不表达.建立稳定敲低EDAG的K1细胞株,敲低效果达到约96%,敲低EDAG后细胞增殖变缓,倍增时间由18.49±0.19 h变为19.47±0.11 h,且克隆形成能力下降,G0/G1期比例升高,无血清培养时凋亡增多.本文报道了EDAG在乳头状甲状腺癌病人中高表达,且敲低甲状腺癌细胞系K1中内源EDAG抑制细胞增殖,降低细胞克隆形成能力,G0/G1期增多,凋亡升高,提示EDAG异常高表达可能在甲状腺癌发生发展中具有重要作用. 展开更多
关键词 红系分化相关基因 乳头状甲状腺癌 K1 细胞增殖
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胚胎发育相关基因(EDAG)的研究进展
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作者 石洋 马小彤 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期363-365,372,共4页
胚胎发育相关基因(EDAG)是新近发现的基因,主要表达于人类造血系统细胞中,可能参与调控造血细胞的增殖、分化。将EDAG稳定表达于小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,可导致NIH3T3发生恶性改变。白血病细胞系中EDAG高表达,可能与白血病细胞未分化... 胚胎发育相关基因(EDAG)是新近发现的基因,主要表达于人类造血系统细胞中,可能参与调控造血细胞的增殖、分化。将EDAG稳定表达于小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,可导致NIH3T3发生恶性改变。白血病细胞系中EDAG高表达,可能与白血病细胞未分化状态的维持有关。另外还发现,EDAG的表达可以提高NF-kB的转录活性和DNA结合活性,推测NF-_kB可能是EDAG发挥调控功能的途径之一。 展开更多
关键词 edag 白血病细胞 分化 NF-ΚB
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EDAG在白血病细胞系K562中的细胞内自激因子作用 被引量:2
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作者 安莉莉 吴克复 +2 位作者 马小彤 林永敏 郑国光 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2005年第4期197-200,共4页
目的为肿瘤细胞自律性生长的细胞内自激因子假设提供实验证据。方法将新发现的造血相关核蛋白EDAG基因转染人白血病细胞系K562,比较过表达EDAG对K562细胞的增生能力,以及对细胞的造血调控、凋亡及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果在无... 目的为肿瘤细胞自律性生长的细胞内自激因子假设提供实验证据。方法将新发现的造血相关核蛋白EDAG基因转染人白血病细胞系K562,比较过表达EDAG对K562细胞的增生能力,以及对细胞的造血调控、凋亡及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果在无血清培养条件下,过表达EDAG的K562细胞的增生能力明显高于两组对照细胞,并且有c蛳myb和bcl蛳2mRNA表达的显著上调。结论过表达的EDAG可以起细胞内自激因子作用。为核蛋白异常表达可以起细胞内自激因子作用提供了实验证据。 展开更多
关键词 自律性生长 细胞内自激因子 核蛋白 edag 白血病细胞系
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胚胎发育相关基因-1对人肺癌细胞增殖及凋亡的影响 被引量:1
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作者 史红阳 邓文静 +1 位作者 张玉萍 张德信 《山西医科大学学报》 CAS 2016年第1期26-30,共5页
目的探讨一种新近克隆的胚胎发育相关基因-1(embryonic development associated gene-1,EDAG-1)对人肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核表达载体pc DNA3.1(+)-EDAG-1,以脂质体法稳定转染入人肺癌细胞A549和H460,分别通过qRT-PCR和W... 目的探讨一种新近克隆的胚胎发育相关基因-1(embryonic development associated gene-1,EDAG-1)对人肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核表达载体pc DNA3.1(+)-EDAG-1,以脂质体法稳定转染入人肺癌细胞A549和H460,分别通过qRT-PCR和Western blot检测EDAG-1基因mRNA和蛋白的表达,同时检测细胞的增殖及凋亡。结果转染EDAG-1后,A549和H460细胞中EDAG-1的mRNA和蛋白表达水平均显著性升高(P<0.01)。与转染空载体的A549和H460对照组细胞相比,转染EDAG-1的A549和H460细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著性升高(P<0.01)。结论 EDAG-1可以抑制肺癌细胞增殖,促进其凋亡,其可能在肺癌的发生中起着重要作用。 展开更多
关键词 胚胎发育相关基因 肺癌 基因表达 细胞增殖 细胞凋亡
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迭代过程的边界收敛条件及应用 被引量:2
15
作者 郑程遥 《长沙交通学院学报》 1998年第1期4-7,共4页
对非线性方程的迭代过程进行研究,得到了几个新的、简单实用的收敛性判据,并介绍了在工程计算中的应用。
关键词 非线性方程 迭代格式 边界收敛条件
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造血干细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 被引量:1
16
作者 苗丽丽 王磊 +3 位作者 许望翔 李长燕 杨晓明 葛常辉 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2011年第10期933-937,共5页
EDAG是在胚胎发育阶段造血干细胞特异性表达的基因.为了在早期造血组织细胞中实现相关基因的条件敲除,构建了含有早期造血组织特异性表达的EDAG启动子和Cre重组酶基因的转基因EDAG-Cre表达载体质粒.通过显微注射的方法将线性化的5.6kb的... EDAG是在胚胎发育阶段造血干细胞特异性表达的基因.为了在早期造血组织细胞中实现相关基因的条件敲除,构建了含有早期造血组织特异性表达的EDAG启动子和Cre重组酶基因的转基因EDAG-Cre表达载体质粒.通过显微注射的方法将线性化的5.6kb的EDAG-Cre转基因片段导入小鼠受精卵细胞核,获得的新生小鼠经过PCR鉴定,常规方法培育传代.结果发现,共获得了6只阳性转基因首建鼠,其中4只已经建系并稳定传代.RT-PCR分析表明Cre重组酶基因在阳性转基因小鼠的骨髓、脾脏、胸腺、外周血以及胎肝等组织中均有表达,重组酶活性也在脾和骨髓中获得确认.EDAG-Cre重组酶转基因小鼠的建立,为研究早期造血组织以及造血干细胞特异性基因条件敲除小鼠模型的建立奠定了基础. 展开更多
关键词 CRE-LOXP 重组系统 edag 转基因小鼠 组织特异性表达
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蜕皮素诱导基因表达细胞系的建立及其应用
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作者 詹轶群 许望翔 +1 位作者 田芳 杨晓明 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第6期457-459,462,共4页
目的 :建立一个可诱导表达目的基因的细胞系以研究新基因的功能。方法 :将含蜕皮素受体基因的表达载体pVgRXR稳定转染NIH3T3细胞 ,经zeocin抗性筛选 ,获得单克隆抗性细胞株 ,并进一步将可诱导表达质粒pIND_LacZ分别转染各单克隆细胞 ,... 目的 :建立一个可诱导表达目的基因的细胞系以研究新基因的功能。方法 :将含蜕皮素受体基因的表达载体pVgRXR稳定转染NIH3T3细胞 ,经zeocin抗性筛选 ,获得单克隆抗性细胞株 ,并进一步将可诱导表达质粒pIND_LacZ分别转染各单克隆细胞 ,经松甾酮 (ponasterone)A诱导和 β_半乳糖苷酶活性检测 ,鉴定出阳性单克隆。 结果与结论 :在建立稳定表达功能性蜕皮素受体的NIH3T3细胞系的基础上 ,我们进一步建立了一个可诱导表达红系分化相关基因 (EDAG)的细胞系 ,并对目的基因诱导表达特性及诱导目的基因表达后细胞表型的改变进行了初步观察 ,结果提示EDAG可能与血液细胞的增殖分化密切相关。 展开更多
关键词 蜕皮素 诱导基因表达 红系分化相关基因 转染 细胞系
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红细胞分化相关基因敲除小鼠对低剂量辐射损伤敏感性的研究 被引量:2
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作者 潘婷婷 尹荣华 +4 位作者 董小明 赵珂 詹轶群 杨晓明 李长燕 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期423-426,467,共5页
目的构建红细胞分化相关基因(EDAG)敲除小鼠并研究其对低剂量辐射损伤的敏感性。方法利用锌指核酸酶技术(ZFNs)建立EDAG敲除小鼠模型;通过外周血细胞计数、骨髓细胞的DNA损伤和集落形成能力评价低剂量辐射损伤。对野生型及EDAG敲除小鼠... 目的构建红细胞分化相关基因(EDAG)敲除小鼠并研究其对低剂量辐射损伤的敏感性。方法利用锌指核酸酶技术(ZFNs)建立EDAG敲除小鼠模型;通过外周血细胞计数、骨髓细胞的DNA损伤和集落形成能力评价低剂量辐射损伤。对野生型及EDAG敲除小鼠进行剂量率为0.31 Gy/min的X线照射,1 min/d,连续照射7 d,小鼠累计照射剂量为2.17 Gy。在X线照射后第1、3、5、7天称重并进行血常规检测(n=7);照射后第3天分离小鼠骨髓细胞,利用免疫荧光实验检测DNA损伤标志物p-H2A.x的表达水平(n=3);照射后第5天分离小鼠骨髓细胞,接种集落并于7 d后进行集落计数(n=3)。结果成功建立了EDAG敲除小鼠模型并在蛋白水平进行了敲除效果的鉴定;X线照射后第3天,与野生型相比,EDAG敲除小鼠白细胞明显减少,敲除小鼠骨髓细胞DNA损伤标志物p-H2A.x表达水平增加;X线照射7 d后骨髓细胞的集落形成能力降低。结论研究发现EDAG敲除小鼠对低剂量辐射诱导的损伤更加敏感,表现为血细胞数量减少,骨髓细胞成集落能力下降,DNA损伤增加。表明EDAG敲除小鼠作为一种对辐射高度敏感的动物模型,可作为低剂量辐射损伤生物学效应评价的有力工具。 展开更多
关键词 小鼠 基因敲除 红细胞分化相关基因 低剂量辐射损伤 血细胞计数 骨髓细胞 集落形成 DNA损伤
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胚胎发育相关基因精子转录本在白血病细胞系中的表达及其调节
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作者 安莉莉 马小彤 +3 位作者 石洋 林永敏 郑国光 吴克复 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2006年第1期1-3,9,共4页
目的探讨胚胎发育相关基因(EDAG)在白血病细胞中的调控机制。方法用半定量RT-PCR方法检测白血病细胞系中EDAG精子转录本EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,检测EDAG-t的表达改变情况。结果在白血病细胞系K562和U... 目的探讨胚胎发育相关基因(EDAG)在白血病细胞中的调控机制。方法用半定量RT-PCR方法检测白血病细胞系中EDAG精子转录本EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,检测EDAG-t的表达改变情况。结果在白血病细胞系K562和U937中也可检测到EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,发现EDAG精子转录本和造血转录本的表达都会随细胞分化而下调,但它们的下调步伐不一致,总的说来,EDAG-t的减弱较EDAG-h慢。结论EDAG精子转录本在白血病细胞中的异常表达值得进一步研究。 展开更多
关键词 胚胎发育相关基因精予转录本 白血病细胞系
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