胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测中的应用评价

目的评估胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48-like)、bla_(NDM)),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果PCR结果发现25株菌携带bla_(KPC)基因、7株携带bla_(NDM)基因、4株携带bla_(IMP)基因、4株同时携带bla_(KPC+NDM)基因、1株同时携带bla_(KPC+NDM+IMP)基因,另外24株未检出相应耐药基因。41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性。24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性。mCIM试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000;检测金属酶的敏感性为68.75%、特异性为100.00%,Kappa值为0.725。胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000。结论胶体金免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用。

改良碳青霉烯灭活法和EDTA双纸片增效法检测产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌耐药表型的分析

目的 通过改良碳青霉烯灭活法(mCIM)检测产碳青霉酶铜绿假单胞菌的耐药表型,评估EDTA双纸片增效法检测产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌的分型,为临床选择合理抗菌药物提供依据。方法 收集2020年1-12月北京该院临床标本分离的铜绿假单胞菌626株,筛选耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌35株,分别采用改良碳青霉烯灭活法和EDTA双纸片增效法检测碳青霉烯酶耐药表型,采用聚合酶链反应技术(PCR)进行铜绿假单胞菌常见耐药基因分析。结果 mCIM试验中,6株检出碳青霉烯酶,5株为结果不确定;EDTA双纸片增效法中,7株产丝氨酸型碳青霉烯酶,2株产金属型碳青霉烯酶,1株为同时产丝氨酸型和金属型碳青霉烯酶,1株阴性;PCR法中,PDC、OprD2基因阳性率较高,IMP-9、Intl1阳性率较低,三株产金属型碳青霉烯酶铜绿假单胞菌均检出IMP-9耐药基因。结论 改良碳青霉烯灭活法结合EDTA双纸片增效法可用于实验室初筛产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌的耐药表型。

应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌

目的评估碳青霉烯酶失活法(carbapenem inactivation method,CIM)试验检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶的能力。方法收集121株鲍曼不动杆菌,应用全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,CIM检测鲍曼不动杆菌所含碳青霉烯酶,应用PCR方法检测OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果 121株鲍曼不动杆菌中68株对亚胺培南和美罗培南耐药,其中65株菌PCR显示携带OXA-23基因,66株菌CIM试验为阳性。52株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,其中49株菌OXA-23阴性,52株菌CIM试验全为阴性。1株菌对亚胺培南耐药、对美罗培南敏感,CIM试验阴性,OXA-23阳性。CIM试验的敏感性和特异性分别为94.2%和98.1%。结论与PCR方法相比较CIM试验操作简便,成本小,结果易读,易于在实验室开展。应用CIM试验可以检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶,

碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌的价值

目的:分析CIM(碳青霉烯酶失活法)检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌的价值。方法:2014年5月-2017年2月,分离出鲍曼不动杆菌121株,行药敏试验、菌株鉴定,测定鲍曼不动杆菌中的碳青霉烯酶含量与OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果:将OXA-23作为标准,得知CIM阴性预测值、阳性预测值分别为98.1%(51/52)、94.2%(65/69。结论:CIM法能够有效检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶。

MTS法与仪器MIC法检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素敏感性的差异

目的了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)临床分布特点,分析菌株产酶情况及验证替加环素的体外抗菌活性。方法分析某院2015年1—12月临床患者送检标本中分离的53株CRKP的药敏结果,对目标菌株进行改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,同时采用EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶,使用MIC测试条(MTS)确认仪器MIC法中替加环素药敏结果。结果 53株CRKP科室分布主要为重症监护病房(ICU)14株,占26.42%,烧伤科13株(24.53%);标本来源主要为痰23株(43.40%),创面分泌物15株(28.30%);年龄分布主要为≥60岁患者,检出35株(66.04%)。CRKP对替加环素的敏感率最高(96.2%)。经改良Hodge试验确认有48株产碳青霉烯酶,阳性率90.6%,同时15株产金属β-内酰胺酶。仪器MIC法判读为替加环素耐药的菌株经MTS法验证后均应判读为敏感。结论该院CRKP主要产碳青霉烯酶,其中部分菌株可产2类不同的β-内酰胺酶;替加环素在药敏试验中对CRKP具有良好的抗菌活性,经仪器MIC法检测为替加环素耐药的菌株须进行MTS法确认。

CIM法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类检测的价值

目的:探讨改良Carba NP法和碳青霉烯酶失活(CIM)法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物快速检测中的价值。方法:纳入东莞市长安医院2020年3月至2021年3月期间临床分离的88株铜绿假单胞菌及88株鲍曼不动杆菌为研究对象,所有菌株均采用改良Carba NP法和CIM法检测,后以基因检测作为金标准,观察两种方法的检测价值(灵敏度、特异度、阴性预测值与阳性预测值)。结果:铜绿假单胞菌通过CIM法检测的灵敏度(96.15%)、阴性预测值(75.00%)均高于改良Carba NP法(84.62%、29.41%),差异均具有统计学意义(P<0.05);特异度(90.00%)、阳性预测值(98.68%)与改良Carba NP法(50.00%、92.96%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);鲍曼不动杆菌通过CIM法检测的灵敏度(90.67%)、特异度(92.31%)、阴性预测值(63.16%)及(98.55%)均高于改良Carba NP法(78.67%、53.85%、30.43%、90.77%),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CIM法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物快速检测的价值比改良Carba NP法更高。

改良CarbaNP法和CIM法在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌检测中的应用价值分析

目的探讨改良CarbaNP法和碳青霉烯酶失活法(CIM)在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌检测中的应用价值。方法收集2014年1月~2015年6月河北省邢台市第三医院临床分离的120株鲍曼不动杆菌和100株铜绿假单胞菌。采用全自动微生物仪进行细菌鉴定和药敏试验;采用改良CarbaNP法和CIM法检测细菌碳青霉烯酶,后采用基因检测进行验证。结果120株鲍曼不动杆菌中,碳青霉烯类抗生素耐药株和敏感株分别占61.67%和38.33%;100株铜绿假单胞菌中,碳青霉烯类抗生素耐药株和敏感株分别占60.00%和40.00%。在鲍曼不动杆菌中,OXA-23基因携带率为94.59%(70/74),以其为标准,改良CarbaNP法和CIM法与基因检测法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。改良CarbaNP法和CIM法分别与基因检测结果比较,CIM法的敏感性和特异性均略高于改良CarbaNP法,但差异无统计学意义(P>0.05)。在铜绿假单胞菌中,VIM-1阳性携带率为93.33%(56/60),以其为标准,改良CarbaNP法和CIM法与基因检测法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。改良CarbaNP法和CIM法分别与基因检测结果比较,CIM法的敏感性和特异性均略高于改良CarbaNP法,但差异无统计学意义(P>0.05)结论改良CarbaNP法和CIM法在鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗生素快速检测中均具有一定价值,以后者检测效能较好。

imCIM检测B类碳青霉烯酶的效果评价

目的评价抑制剂增强改良碳青霉烯失活法(im CIM)在B类碳青霉烯酶检测中的应用价值,并与EDTA纸片增效试验(EDPT)进行比较分析。方法收集碳青霉烯类抗生素不敏感菌株181株,其中肺炎克雷伯菌44株、大肠埃希菌44株、鲍曼不动杆菌43株、铜绿假单胞菌50株;碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,其中肺炎克雷伯菌25株、大肠埃希菌16株、鲍曼不动杆菌25株、铜绿假单胞菌17株。采用im CIM和EDPT对上述264株菌株进行B类碳青霉烯酶的筛查,以PCR结果作为金标准。应用一致性检验、Wilcoxon符号秩和检验、独立样本Kruskal-Wallis H检验及ROC曲线进行统计学分析。结果 181株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中144株PCR扩增耐药基因阳性,A、B、D类碳青霉烯酶分别为39株、77株、28株;im CIM检测70株阳性,111株阴性,其中166株与PCR结果一致;EDPT检测72株阳性,109株阴性,其中134株与PCR结果一致。碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,PCR扩增耐药基因、im CIM及EDPT检测结果均为阴性。im CIM敏感性和特异性分别为85.71%(66/77)和97.86%(183/187),与PCR结果一致性Kappa值为0.859;EDPT敏感性和特异性分别为66.23%(51/77)和88.77%(166/187),Kappa值为0.561。im CIM抑菌圈差值(Δdim CIM)与EDPT抑菌圈差值(ΔdEDPT)有差别,差异有统计学意义(Z=-6.941,P<0.05)。采用im CIM检测B类碳青霉烯酶的Δdim CIM水平与A、D类酶Δdim CIM总体分布位置不同,差异有统计学意义(χ2=108.887,P<0.05)。im CIM与EDPT的ROC曲线下面积分别为0.988(95%CI:0.977~0.999)和0.936(95%CI:0.909~0.963)。结论 im CIM是一种准确、高效、便捷的碳青霉烯酶表型筛选方法,敏感性、特异性较高,适合用于流行病学监测。

CIM,mCIM 和MHT筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的方法评价

目的评估碳青霉烯类抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)、改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和改良Hodge试验(modified hodge test,MHT)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选能力。方法以PCR检测碳青霉烯酶基因作为金标准,对120株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterbacteriaceae,CRE)和50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌,分别进行CIM,mCIM和MHT表型筛选试验,评估三种方法的表型筛选能力。结果120株CRE中,93株携带碳青霉烯酶耐药基因,表型筛选试验显示,CIM,mCIM和MHT的敏感度分别是95.6%,96.8%和95.8%,特异度分别为72.7%,92.3%和50%。三种方法筛选碳青霉烯酶,差异有统计学意义(χ^2=12.796,P<0.05)。与PCR结果相比较,CIM,MHT和mCIM的一致率分别为90%,95%和77.4%,Kappa值分别为0.898,0.949和0.771。mCIM和CIM试验与PCR高度一致。50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌PCR检测和三种方法均为阴性。结论三种表型筛选方法均有较高的敏感度,但mCIM较CIM,MHT具有更高的特异度和一致率,是筛选CRE的有效方法。

双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验筛查CRE的临床应用价值

目的评估双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床应用价值。方法以VITEK 2 Compact N335卡的体外药物敏感性试验结果为标准,采用双浓度联合mCIM在231株分离自临床样本的肠杆菌科细菌中筛查CRE。结果VITEK 2 Compact N335卡筛选出CRE阳性菌株52株,阴性菌株179株,阳性检出率为22.5%;mCIM筛出CRE阳性菌株52株,双浓度联合mCIM筛出CRE阳性菌株53株,阴性菌株178株,阳性检出率为22.9%。以VITEK 2 Compact检测结果为参考,符合率为98.7%,敏感性为98.1%,特异性为98.9%;将mCIM检测阳性的52株CRE继续进行乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM),结果显示有13株肠杆菌科细菌金属-β-内酰胺酶为阳性,金属-β-内酰胺酶占碳青霉烯酶的25%。结论双浓度联合mCIM筛查CRE具有操作简单、不需要特殊仪器、结果易于观察等优点,适合在各级医院的微生物实验室中推广使用。对mCIM阳性菌株加做eCIM非常必要,有利于临床个性化用药。

耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌的感染特点及耐药基因分析

目的了解该院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。方法收集该院2018年1月至2019年2月临床标本中分离的非重复耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌,采用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏检测,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶表型、聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶常见基因型。结果共收集95株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,细菌对多种临床常用抗菌药物均显著耐药。改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)91株阳性,EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)3株阳性。PCR结果显示92株携带碳青霉烯酶基因,未检测出耐药基因有3株,其中有86株携带KPC基因(93.4%),3株携带NDM基因,3株既携带KPC基因又携带NDM基因。结论耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药,对四环素、多西环素、替加环素相对敏感,而产KPC型碳青霉烯酶是该院肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因。因此临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布特点及药物敏感性分析

目的分析该院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点及药物敏感性,为临床合理有效治疗CRE菌株提供理论依据。方法收集医院2019年全年临床标本中分离的肠杆菌科细菌(共计2435株),采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行细菌鉴定、药敏试验,对筛选出的CRE菌株采用K-B药敏纸片扩散法对亚胺培南进行复核,并采用改良碳青霉烯灭活(mCIM)试验和EDTA改良碳青霉烯灭活(eCIM)试验进行碳青霉烯酶表型分析。所有实验数据采用WHONET5.6和SPSS17.0软件进行统计分析处理。结果共分离出213株CRE菌株,以肺炎克雷伯菌为主(161株);标本来源以呼吸道痰液标本为主(41.3%);54.5%的标本分离自重症监护室(ICU),CRE菌株在ICU的分离率明显高于普通病房(χ^2=81.00,P<0.01)。药敏结果显示,CRE菌株除对替加环素比较敏感(耐药率为2.8%),对阿米卡星(51.6%)和四环素(52.0%)的耐药率低一些外,对其余大多数抗菌药物的耐药率均在80%以上。与碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌(CSE)的耐药率相比,CRE菌株对除四环素以外的其他抗菌药物的耐药率均明显高于CSE菌株(P<0.01)。mCIM和eCIM试验结果显示,213株CRE菌株中,170株为丝氨酸酶阳性,43株为金属酶阳性,且43株产金属酶的CRE菌株中,22株都来源于ICU,占比超过50%。不同细菌种类的CRE菌株中,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌和耐碳青霉烯类大肠埃希菌产金属酶的比例均≥50%。结论CRE菌株对多种抗菌药物高度耐药,其临床分离率逐年增高,给临床治疗带来困难。因此应加强抗菌药物的管理,合理选择和使用抗菌药物,注重医院感染的预防和监测,防止医院内感染的传播和流行。

mCIM与eCIM筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的效果评价

目的评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,m CIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTAcarbapenem inactivation method,e CIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力。方法分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用m CIM和e CIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析。结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;m CIM检出阳性98株,阴性4株。98株m CIM阳性菌中,e CIM阳性46株,阴性52株。53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及m CIM试验均为阴性。m CIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0%,特异性为96.6%,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;e CIM筛选金属酶敏感性为93.5%,特异性为94.6%,Kappa值为0.881;e CIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6%,特异性为95.8%,Kappa值为0.882。结论 m CIM试验与e CIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义。

mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型。以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6%(57/59)。21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0%(21/21)。33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8%(28/33)。47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0%(47/47)。27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0%(27/27)。53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2%(51/53)。结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高。

肺炎克雷伯菌临床分布及其碳青霉烯酶基因型检测分析

目的探讨肺炎克雷伯菌临床分布特征及检测其碳青霉烯酶基因型,为完善本院分子流行病学资料提供理论依据。方法对2015年1月~2017年12月本院患者送检的临床标本进行分离培养,采用BIOFOSUN微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏分析,采用WHONET5.6进行临床分布及耐药性分析;对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行改良碳青霉烯类失活法试验(mCIM),PCR法检测碳青霉烯酶3种基因型(blaKPC、blaNDM、blaIMP),扩增产物使用BLAST软件分析;对mCIM试验结果与PCR结果进行一致性检验。结果共分离888株肺炎克雷伯菌,标本来源主要是痰液595株(67.0%)、尿液86株(9.7%)、分泌物80株(9.0%)、血液71株(8.0%);科室分布主要是新生儿科147株(16.6%)、呼吸科107株(12.0%)、普儿科103株(11.6%)、神经外科89株(10.0%)及ICU73株(8.2%)。肺炎克雷伯菌对大多数抗菌药物存在不同程度的耐药,耐药率低于15%的只有亚胺培南、美罗培南、阿米卡星及哌拉西林/他唑巴坦。对30株(3.4%)亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行mCIM试验,其中阳性29株(敏感性为96.7%);30株亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有7株扩增阳性,检出均为blaNDM基因型(敏感性为23.3%),mCIM试验结果与PCR结果一致性Kappa值为0.766;与此同时无检出blaKPC、blaIMP基因型。结论blaNDM基因型是本院肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶主要型别及对亚胺培南耐药的主要机制。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及碳青霉烯类失活法检测分析

目的分析临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)对临床常用药物的耐药情况及碳青霉烯类失活法(CIM)、改良Hodge试验(MHT)对产碳青霉烯酶的筛选能力。方法使用聚合酶链式反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法检测菌株携带碳青霉烯酶相关基因结果为标准,评估CIM和MHT对医院2016年1月-2017年9月临床分离的非重复30株CRKP及40株敏感菌株的碳青霉烯酶(CSKP)表型筛选能力。结果 30株CRKP对替加环素、阿米卡星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率分别为0、13.33%、16.67%,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和美罗培南耐药率分别为86.67%、93.33%、93.33%,对其他9种β-内酰胺类抗菌药物的耐药率为100.00%;除磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢唑林及替加环素外,CRKP对其他抗菌药物的耐药性较CSKP差异有统计学意义(P<0.05)。PCR结果表明30株CRKP均携带碳青霉烯酶基因;CIM和MHT灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00%、100.00%、100.00%和100.00%;96.67%、100.00%、100.00%和97.56%。结论 CRKP对常用抗菌药物表现出较高耐药性,碳青霉烯酶的产生是主要耐药机制,提示临床应加强抗菌药物的管理;与PCR相比,MHT和CIM均具有较高的灵敏度、特异度和预测值,可在常规实验室开展,CIM具有结果更准确、更易于观察、结果读取时间短等优势。

改良碳青霉烯类失活试验联合EDTA碳青霉烯类失活试验在耐碳青霉烯类肠杆菌表型筛查中的应用

目的探讨改良碳青霉烯类失活试验(mCIM)联合EDTA碳青霉烯类失活试验(eCIM)在耐碳青霉烯类肠杆菌(Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae,CRE)表型筛查中的价值。方法收集2019年1月—2020年12月临床240株肠杆菌科细菌,其中CRE 120株,敏感菌120株,所有菌株均剔除重复株。根据待测菌是否水解美罗培南,对美罗培南敏感的大肠杆菌(ATCC 25922)是否被抑制生长判断该菌是否产碳青霉烯酶,不确定的mCIM结果归类为假阴性,而对于不携带碳青霉烯酶基因菌株,则将其归类为假阳性,以PCR法为金标准。结果120株CRE菌株经PCR检测:KPC(n=66)、IMP(n=12)、NDM(n=23)、KPC+IMP(n=3)、KPC+NDM(n=6)、IMP+NDM(n=1),KPC+CIT(n=1)、NDM+DHA(n=1)、KPC+DHA(n=1)、NDM+CIT(n=1)、IMP+NDM(n=1)、KPC+NDM+CIT(n=1)、4株未检出碳青霉烯酶基因;mCIM试验阳性菌120株,eCIM试验阳性菌48株;mCIM试验的敏感度为96.7%,特异度为100%;eCIM试验的灵敏度和特异度均为100%;mCIM联合eCIM试验与PCR法检测碳青霉烯酶间比较差异无统计学意义(χ^(2)=2.288,P>0.05);具有很高的一致性,Kappa值为0.967(P<0.01)。结论mCIM联合eCIM试验适合临床微生物实验室常规开展筛查CRE表型。

两种表型方法检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌基因型别的应用价值

目的 评估改良碳青霉烯灭活试验/乙二胺四乙酸(EDTA)改良碳青霉烯灭活试验(mCIM/eCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌基因型别的临床价值。方法 本研究纳入复旦大学中山医院2020年1-12月耐厄他培南或亚胺培南或美罗培南的190株肠杆菌目细菌,分别用mCIM/eCIM和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测CRE产生的碳青霉烯酶型别,同时使用聚合酶链式反应(PCR)检测结果作为金标准。结果和PCR比较,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶的灵敏度98.16%,特异性为100.00%;检测金属β-内酰胺酶的灵敏度为100.00%,特异性为100.00%。mCIM/eCIM检测A类丝氨酸碳青霉烯酶的灵敏度为95.70%,特异性为100.00%;检测金属β-内酰胺酶的灵敏度93.10%,特异性为100.00%,但eCIM试验无法检测同时产A和B类酶的菌株。结论 碳青霉烯酶抑制剂增强试验和mCIM/eCIM方法检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和金属β-内酰胺酶都具有较高的灵敏度和特异性。其中碳青霉烯酶抑制剂增强试验操作性更强,并能区分同时产A和B类碳青霉烯酶的菌株,但测试成本较mCIM/eCIM高。因此不同层级的微生物实验室可以根据自身条件包括成本、人员、场地和设备等客观因素,选择性地常规开展CRE的表型检测。

mCIM法与PAE-MHT法检测铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的性能评价

目的评估改良的碳青霉烯类灭活法(mCIM)和铜绿假单胞菌改良Hodge试验(PAE-MHT)法对铜绿假单胞菌(PAE)产金属β-内酰胺酶(MBLs)的表型筛选能力。方法收集176株耐碳青霉烯类PAE,PCR检测IMP和VIM基因,采用mCIM法和PAE-MHT法检测产MBLs菌株,其中mCIM法分别选择亚胺培南(IMP)和美罗培南(MEM)作为药物底物进行筛选能力的研究,对几种方法与PCR检测结果的一致性进行统计分析。结果以IMP为底物mCIM法和以MEM为底物mCIM法检测MBLs的阳性率差异无统计学意义(χ^2=0.01,P>0.05)。以IMP为底物mCIM法、以MEM为底物mCIM法和PAE-MHT法的准确度分别为94.9%,96.6%和94.3%;敏感度分别为90.5%,100%和85.7%;特异度分别为95.5%,96.1%和95.5%。三者在准确度、敏感度和特异度之间两两相比,差异均无统计学意义(χ^2=0.01~2.99,均P>0.05)。三种方法与PCR法均具有良好的一致性。结论PAE-MHT法经济、操作简便,结果易于判读。以MEM为底物的mCIM法具有高敏感度与高特异度,更适合于检测PAE的MBLs。

Carba NP试验及CIM试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的性能评估

目的评估Carba NP试验(CNPt)及碳青霉烯类失活(CIM)试验在碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中检测碳青霉烯酶的性能及临床价值。方法收集南京医科大学附属无锡市第二人民医院2014—2015年临床分离的各种标本碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌菌株92株,同时选取碳青霉烯敏感的菌株90株作为对照组。所有菌株进行碳青霉烯酶耐药基因PCR检测、碳青霉烯类失活(CIM)试验、CNPt、改良Hodge试验(MHT)检测。结果 92株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌包括产碳青霉烯酶肠杆菌87株及非产碳青霉烯酶肠杆菌5株;87株产酶株中79株产A组酶;8株产B组酶,未检测到D组的碳青霉烯酶。CNPt与CIM试验诊断菌株是否产碳青霉烯酶的敏感性和特异性均为100%;MHT实验诊断菌株是否产碳青霉烯酶敏感性为96.5%,特异性为98.9%。结论 CNPt及CIM试验能快速、准确筛查出临床分离鉴定的产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,在常规的微生物实验室有发展前景,可作为表型确认试验和耐药监测的手段。