EDTA脱钙在骨组织大切片制片中的应用效果

骨肿瘤病理大切片可以观察组织全貌,准确评估病灶大小、侵袭范围以及手术切缘,对于确定骨肿瘤的边界和临床预后非常重要。但骨组织中丰富的钙盐导致完整制片困难,尤其是大切片的制作。普通酸性脱钙液因破坏细胞及组织结构,影响染色、镜下观察和分子检测,已不适用于日常工作,而EDTA脱钙液性质温和,能有效保护组织内的核酸和组织抗原,日益成为骨标本处理的首选[1-2]。本科室将EDTA脱钙液应用于骨组织大切片制片及染色过程,总结了骨组织大切片的制作方法,以期在临床骨病变标本的处理中推广应用。

混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析

目的 比较不同脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响.方法 选取16例大鼠胫骨标本,运用两种常用的脱钙液(混合脱钙液和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响.结果 两种脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别.结论 混合脱钙液时间最短,但切片和染色效果最差;EDTA脱钙液对骨组织损伤小,HE染色效果最好,但用时较长.

改良EDTA脱钙法和酸脱钙法在乳腺癌骨转移免疫组织化学中的比较研究

背景与目的:晚期乳腺癌骨转移发生率大于70%,对骨组织进行脱钙处理是一大技术难点。探索乳腺癌骨转移的临床特点及更适合对骨组织进行脱钙的方法。方法:收集2012年1月—2018年1月期间病理学诊断为乳腺癌骨转移患者的临床资料,分析临床特征;分析改良乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)脱钙法及酸脱钙法对骨转移组织进行处理后,骨组织形态、结构的差异;比较两组原发灶与转移灶免疫组织化学检查结果中雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)的一致性;分析两组骨转移组织ER、PR、Ki-67的阳性率;分析乳腺癌骨转移患者ER、PR阳性和阴性的生存差异。结果:116例乳腺癌骨转移患者中91.4%为溶骨性骨转移,80.1%骨转移的数量为4~20,81.9%发生骨相关事件(skeletal-related event,SRE)。41例为改良EDTA脱钙,75例为酸脱钙,两组骨组织的形态结构无明显差异。改良EDTA脱钙组ER一致性为95.1%,明显高于酸脱钙组(69.3%)(P<0.05);改良EDTA脱钙组骨组织ER的阳性率为90.2%,明显高于酸脱钙组(73.3%)(P<0.05);改良EDTA组PR的阳性率(58.5%)明显高于酸脱钙组(36.0%)(P<0.05),Ki-67增殖指数明显高于酸脱钙组(P<0.05);骨转移组织ER+患者的平均生存时间为(41.09±4.26)个月,明显优于ER-患者[(25.81±5.71)个月](P<0.05)。结论:乳腺癌骨转移多为多发溶骨性,且SRE发生率高。改良EDTA脱钙法优于酸脱钙法,更适于对骨组织进行脱钙和免疫组织化学制片。

两种EDTA脱钙方法的比较

目的寻求切片制作更容易、染色效果更好的脱钙方法。方法对兔下颌骨分别使用15%EDTA微波脱钙法及15%EDTA低温脱钙法进行脱钙,从切片制作、免疫组化染色等方面进行比较。结果以15%EDTA低温脱钙法对兔下颌骨进行脱钙后,制作切片时脱片率明显降低,染色效果更好。结论以科学实验为目的对骨组织进行脱钙时,选用15%EDTA低温脱钙法能取得更准确的实验结果。

不同脱钙方式对骨组织样本不同病理分析的影响

骨与软组织肿瘤生物学特性复杂,在临床病理工作中有时依据形态学较难做出准确的病理诊断,需行免疫组化、FISH、PCR、Sanger测序及NGS等检测^([1])。骨组织质地坚硬,应使用脱钙液将组织软化后制片。目前,临床使用较多的仍为混合酸性脱钙液,其脱钙速度快,但易对组织抗原及DNA造成不可逆的损伤;EDTA性质温和,对组织抗原及核酸保存较好,但缺点是脱钙时间久且效果差。有研究显示改良EDTA常温处理骨髓样本20~24 h,HE染色佳,免疫组化染色强度适中,定位准确^([2])。本科室采用酸性脱钙液和改良EDTA两种脱钙液通过5种不同的脱钙条件,寻找出最佳的脱钙方法,现报道如下。

大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。它的应用，使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。适用组织化学、免疫组化等技术的染色。大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙，其直接影响到制片的成败。现在大鼠关节组织石蜡制片实验中，分别用10％硝酸和乙二胺四乙酸二钠（EDTA）复合液进行脱钙处理后，石蜡包埋、制片、染色。对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色，镜下观察形态及着色效果。

不同浓度EDTA脱钙液对骨骼DNA提取效率的影响

目的 比较不同浓度EDTA脱钙液对骨骼DNA提取效率,探讨快捷高效的骨骼DNA提取方法。方法 成人股骨预处理后,使用0.25mol/L、0.5mol/L、1mol/L EDTA脱钙液,分别脱钙3h、6h、12h、24h;提取DNA,并进行浓度测定和STR检测。结果 在3~24h时间段内,骨骼样本经3种不同浓度的EDTA脱钙液脱钙,提取的DNA浓度值不同;其中使用0.25mol/L EDTA脱钙,浓度值逐渐增高,12~24h最高,16个STR基因座全部检出率为62.5%;使用0.5mol/L EDTA脱钙,浓度值先升高再降低,6~12h最高,基因座全部检出率为90%;使用1mol/L EDTA脱钙,浓度值逐渐降低,3~6h最高,基因座全部检出率为67.5%。比较相同脱钙时间不同EDTA浓度脱钙效果,0.5mol/L EDTA所有时间段效率均为最高。结论 EDTA脱钙液浓度和时间对骨骼DNA的提取有一定影响,使用0.5mol/L EDTA脱钙液脱钙6~12h效果最佳。

骨髓活检标本的透射电镜样品制备

在骨髓活检标本的透射电镜样品制备中,对固定与脱钙问题进行了实验研究,结果表明,标本先经固定、再同时固定并脱钙所制备的样品,超薄切片顺利,细胞微细结构优良。

综合改良技术在牙及牙周组织联合切片中应用的效果观察

目的观察综合改良技术在牙及牙周组织联合切片中应用的效果,探讨提高牙及牙周组织联合切片效果的处理方法。方法选择正畸拔除牙标本32例,采取综合改良技术处理标本,观察标本处理的制片情况及制片效果。结果上述标本经综合改良技术处理后,脱钙时间明显缩短,HE制片质量满意,免疫组织化学染色能理想的显示抗原物质。结论综合改良技术在牙及牙周组织联合切片中能够取得满意的制片效果,且不改变骨组织中的蛋白抗原,值得广泛推广施行。