伴EEF1G∷ROS1融合婴儿型半球胶质瘤1例

患儿女,12个月,因下肢活动减少2个月入院。CT检查提示:右侧额顶部巨大肿块,大小9.8 cm×7.6 cm,边界清楚,内见斑片状低密度影及钙化灶,增强扫描后病变呈明显不均匀强化(图1)。病灶推挤邻近右侧大脑中动脉及双侧大脑前动脉,右侧脑室及第三脑室受压,左侧脑室扩张、积水,脑室旁间质性水肿。

克唑替尼治疗伴有ROS1基因融合晚期肺鳞癌1例并文献复习

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)分为非鳞状细胞癌和鳞状细胞癌,大约有30%新诊断的NSCLC为鳞状细胞癌[1]。ROS1基因融合主要发生在不吸烟的年轻女性晚期肺腺癌患者中,突变概率仅为1%~2%[2-4],伴有ROS1基因融合的肺鳞癌患者极为罕见[5-9]。多项数据表明[10-13],克唑替尼对ROS1基因融合的NSCLC表现出良好的治疗效果,被推荐为伴有ROS1基因融合的晚期NSCLC的一线治疗方案[14-15]。本文报道1例伴有ROS1基因融合的晚期肺鳞癌患者经克唑替尼治疗后肿瘤病灶得到良好控制,病情稳定时间为9个月,提示伴有ROS1基因融合的肺鳞癌对克唑替尼治疗敏感,为临床中对伴有ROS1基因融合肺鳞癌患者的诊疗提供一定的参考。

间变性大细胞淋巴瘤患儿EEF1G/ALK 融合基因的鉴定与检测

目的明确1例伴少见ALK融合基因的间变性大细胞淋巴瘤患儿的分子诊断,建立该融合基因的实时荧光定量PCR检测方法。方法采用基于锚定多重PCR的二代测序技术,鉴定患儿腹股沟肿大淋巴结组织中ALK基因的伙伴基因。建立EEF1G/ALK融合基因实时荧光定量PCR方法,并对方法的重复性、灵敏度和特异性进行性能评价。在此基础上检测此患儿肿瘤组织、骨髓、外周血和脑脊液EEF1G/ALK融合基因的表达。结果经二代测序鉴定该患儿肿瘤细胞EEF1G/ALK融合基因阳性,Sanger测序验证为EEF1G Exon 6和ALK Exon 20的融合。建立的实时荧光定量PCR方法最低定量限为40拷贝/体系;弱阳性标本和强阳性标本的批内精密度CV分别为0.52%和0.17%;批间精密度CV分别为1.32%和1.14%,重复性好;检测其他ALK融合阳性标本结果为阴性,特异性好。复发时送检的淋巴结穿刺组织和外周血的融合基因定量检测结果为138.92%和0.0039%,其余检测为阴性。结论明确此例间变性大细胞淋巴瘤为少见EEF1G/ALK融合基因阳性。建立的EEF1G/ALK融合基因定量检测方法特异性、重复性好,灵敏度高,完全满足融合基因MRD监测的需要。

洛拉替尼成功治疗伴有ROS1基因G2032R突变的晚期肺鳞癌1例

患者女性,52岁。于外院行右颈部淋巴结穿刺活检确诊为转移性中-低分化鳞状细胞癌,结合免疫组织化学检测,考虑肺来源。患者经标准的一线、二线治疗后肿瘤持续进展,右锁骨上窝转移性淋巴结持续增大伴有肿瘤局部破溃,压迫症状明显,为进一步治疗就诊于天津市人民医院,入院诊断为左肺中央型肺癌(T2bN3M0,ⅢB期),肺部靶病灶大小4.9 cm×3.6 cm。2022年4月12日行右锁骨上窝淋巴结穿刺活检,病理提示转移性鳞状细胞癌,免疫组织化学:CK7(-),CK5/6(+),P40(-),P63(+),Ki-67(阳性率70%),P53(+)。

非小细胞肺癌患者组织原发灶和转移灶中ROS1融合基因的研究

目的:研究晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)原发灶和转移灶ROS1融合基因阳性率,探讨其相关性。方法:收集2013年1月至2015年5月中国人民解放军北京军区总医院、军事医学科学院附属医院、浙江省肿瘤医院、大连大学附属中山医院和山西医学科学院山西大医院原发灶384例,其中配对转移灶246例,统计得出ROS1融合基因阳性率并分析原发灶与转移灶ROS1融合基因的一致性、ROS1融合基因阳性与临床基线资料间的关系。结果:ROS1融合基因阳性率原发灶为2.60%(10/384)。ROS1融合基因阳性率配对原发灶为2.85%(7/246),配对转移灶为1.63%(4/246),配对的246对原发灶、转移灶组织中,转移灶融合基因阳性而对应的原发灶融合基因阴性1例,原发灶融合基因阳性而对应的转移灶融合基因阴性4例,转移灶较原发灶检出ROS1融合基因阳性率高,两者差别有统计学意义(χ2=52.341,P=0.000);转移灶和原发灶ROS1融合基因阳性的一致率好(κ=0.536,P=0.000),通过转移灶判断原发灶融合阳性的情况,敏感性为42.86%(3/7),特异性为99.58%(238/239)。结论:非小细胞肺癌中转移灶可以预测原发灶ROS1融合基因情况,在难以取得原发灶的情况下转移灶可以作为ROS1融合基因测的备选手段。

非小细胞肺癌ROS1融合基因的靶向治疗研究进展

ROS1融合基因是在2007年由科学家们通过应用络氨酸激酶蛋白组学技术从一个肺腺癌患者肿瘤组织中筛选肿瘤致癌基因时与赖皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因同时被发现的另一个融合基因。作为新的独特分子亚型代表,ROS1融合基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中发生率约为1%-2%,远远低于EGFR基因突变率和ALK基因重排变异率（分别为10%-40%,3%—7％），但是在EGFR／KRAS／ALK均为阴性的人群中的发生率明显提高，且有一定的种族差异。

非小细胞肺癌ROS1融合基因少见融合伙伴的故事

ROS1属于酪氨酸激酶胰岛素受体基因,在多种肿瘤细胞系中高表达。其基因重排最初是1987年在神经胶质细胞瘤中被发现的[1-2]。2007 年Rikova等[3]利用磷酸化蛋白质组学技术证实ROS1重排是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生、发展中的驱动基因。现有的研究表明[4-6],ROS1在NSCLC中突变率为1%~2%,因此可以作为一种潜在的靶向治疗分子。在NSCLC 中ROS1最常见的融合伙伴为CD74-、EZR-、SLC34A2-、SDC4-和TPM3-,其余均为ROS1融合基因少见融合伙伴。

晚期非小细胞肺癌原发灶和转移灶ROS1融合基因表达差异分析

目的分析ROS1(c-ros oncogene 1,receptor tyrosine kinase)融合基因在晚期非小细胞肺癌原发灶和转移灶中的差异表达。方法选取非小细胞肺癌原发灶162例,其中配对转移灶139例。采用实时荧光定量PCR检测ROS1融合基因的表达,并分析其在晚期非小细胞肺癌原发灶和转移灶中的表达差异。结果晚期非小细胞肺癌原发灶ROS1融合基因表达阳性率4.3%(7/162),配对原发灶ROS1融合基因表达阳性率2.6%(5/139),配对转移灶融合基因表达阳性率2.2%(3/139);原发灶较转移灶ROS1融合基因检出阳性率显著增高,差异具统计学意义(χ~2=13.517,P=0.000);ROS1融合基因阳性表达在原发灶和转移灶一致性好(κ=0.479,P=0.000)。非小细胞肺癌原发灶中ROS1融合基因表达与病理类型存在密切关系(χ~2=5.195,P=0.031),与患者性别、年龄等不存在明显相关性(P>0.05)。非小细胞肺癌配对原发灶以及转移灶中ROS1融合基因表达与患者性别、年龄、吸烟以及病理类型不存在明显相关性(P>0.05)。结论晚期非小细胞肺癌ROS1融合基因的阳性表达在原发灶中与病理类型有关,其在配对原发灶和转移灶中阳性表达一致性较好,可作为检测ROS1融合基因的备选手段。

非小细胞肺癌治疗的新靶点：ROS1融合基因

随着对晚期非小细胞肺癌（Non—smallcelllungcancer，NSCLC）发病机制及其生物学行为研究的不断深入，针对本病相关靶点的分子靶向治疗已成为一种重要的手段。近年来在部分NSCLC中发现新的靶基因——ROS1。该融合基因常见于不吸娴的肺腺癌患者，并有其独特的病理学特征。ROS1抑制剂能够作用于该基因的下游信号传导通路，拈抗其促肿瘤生成活性。因此，ROSl融合基斟可能成为继EGFR及ALK—EMIA后NSCLC治疗的新靶点。本文主要介绍ROS1融合基因在NSCLC中的研究进展。

非小细胞肺癌EGFR、ALK、ROS1基因突变和临床病理特征分析

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)驱动基因突变与临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR法检测NSCLC中EGFR、ALK、ROS1基因突变,并分析其与临床病理特征的关系。结果347例NSCLC中EGFR基因突变率为49.3%(171/347),突变易发生于女性、腺癌、年龄(≤62岁)及不吸烟患者(P<0.05),与有无淋巴结转移及肿瘤分期无关(P>0.05);突变类型以19-del和L858R为主(占87.1%)。ALK基因突变率为4.3%(15/347),ROS1基因突变率为1.7%(6/347),两基因突变均与患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、有无淋巴结转移及肿瘤分期无关(P>0.05),但ALK基因突变和ROS1基因突变者均为腺癌。另外,EGFR和ROS1基因突变共存者占0.3%(1/347)。结论NSCLC患者中EGFR基因突变率明显高于ALK及ROS1基因突变率。EGFR突变易发生于女性、腺癌、年龄≤62岁、不吸烟者,ALK和ROS1基因突变可能更易发生于腺癌患者。EGFR基因突变和ROS1基因突变可以共存。

ROS1融合基因突变在非小细胞肺癌诊断与治疗中的研究进展

ROS1基因重排/融合在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的发生率约为1%～2%。ROS1基因融合靶向药物的问世,明显改善了ROS1融合晚期NSCLC患者的生存质量和总生存期,但大部分患者在持续用药后仍会出现获得性耐药。本文分别就ROS1融合基因的背景、检测方法、ROS1靶向治疗的临床疗效以及耐药后的策略和展望进行综述。

非小细胞肺癌新靶点ROS1融合基因

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是造成人类死亡最多的恶性肿瘤之一,其五年生存率一直徘徊在20%以下。自肺癌领域首个分子靶向药物吉非替尼上市以来,靶向药物因其低毒、高效、便于给药的临床特点,己逐渐成为治疗NSCLC的重要选择之一。因此,筛选和证实肿瘤驱动基因已经成为未来靶向药物研发的重中之重。近来,越来越多的学者把焦点转移到ROS1融合基因上,并且已经有相关数据及研究表明ROS1融合基因被证实为NSCLC新的有潜力的治疗靶点,因此我们现就ROS1融合基因在NSCLC中的相关研究进展做一综述。

非小细胞肺癌组织中ALK、ROS1、RET融合基因检测方法的比较

非小细胞肺癌在恶性肿瘤中的发病率和死亡率中高居榜首,是中国首要的一个公共卫生问题。近年出现的分子靶向药能显著改善非小细胞肺癌患者的生存质量,因此对患者突变基因的准确检测显得尤为重要。目前临床上检测非小细胞肺癌患者ALK、ROS1、RET融合基因的主要方法有荧光原位杂交、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应以及新兴起的下一代测序,但这4种方法优缺点各异。本文通过比较这几种常见的检测方法,为融合基因检测方法的选择提供参考。

ROS1融合基因在非小细胞肺癌诊疗中的进展

近年来,随着分子生物学的快速发展,肺恶性肿瘤的治疗策略发生了巨大变化,既往传统一线化疗方案不再是非小细胞肺癌的首选,而随着基因突变、融合、重排在肺恶性肿瘤发病机制中的进一步阐明,针对晚期非小细胞肺癌精准靶向治疗逐渐被重视。其中,新发现的基因c-ros原癌基因1酪氨酸激酶(ROS1)在非小细胞肺癌的诊疗中具有重要意义,与非小细胞肺癌的发病、复发及预后有着密切联系。现就ROS1基因的生物学特性、与非小细胞肺癌的关系及其在非小细胞肺癌的诊疗新进展做一综述。

ROS1融合基因的研究背景及在非小细胞肺癌中的应用现状

非小细胞肺癌是一种常见且多发的恶性肿瘤性疾病。在非小细胞肺癌的研究中,分子靶向治疗是当前的热点内容。继表皮生长因子受体(EGFR)和间变性淋巴瘤激(ALK)基因等靶点被发现后,不断有新型肿瘤标志物进入大众研究视野。ROS1基因重排/融合作为新发现的非小细胞肺癌亚型,ROS1基因融合靶向药物的问世,在提高ROS1融合晚期非小细胞肺癌患者的生活质量及延长生存期方面作用显著,但仍有部分患者在长期用药后出现耐药性。因此,本文旨在通过ROS1融合基因的研究背景、检测、临床及出现获得性耐药后的展望进行综述。

汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因的克隆与表达

目的 构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H82 0 5株G1基因片段 ,将回收的G1片段经双酶切插入到pcD NA3 1/His B IL 2 ,构建成新的质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1。采用脂质体介导包裹 ,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达 ;采用原位杂交观察细胞内的基因表达 ,SDS PAGE法作重组质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1瞬时表达产物的鉴定。结果 融合基因可转录并表达一分子量为 78kD左右的蛋白 ,对照组则未见电泳条带出现。结论 成功构建pcDNA3 1/His B IL 2 G1融合基因 。

eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化

eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。

非小细胞肺癌中不同ROS1融合伴侣对克唑替尼敏感性的研究现状分析

c-ros致癌基因1(ROS1)重排(融合)已被广泛证实是非小细胞肺癌(NSCLC)发生的驱动因素,众多临床研究和临床实践结果证实克唑替尼显示出持久的临床获益。克唑替尼在中国已经纳入医保,是中国ROS1重排阳性NSCLC患者一线治疗的首选药物。目前在NSCLC中至少发现了24种基因可作为ROS1的融合伴侣,不同ROS1融合突变的患者使用克唑替尼的疗效差异巨大,融合伴侣的种类可能是其重要的影响因素。目前很少有研究探讨不同融合伴侣与克唑替尼疗效的相关性。本文通过检索PubMed、ScienceDirect等文献数据库及TCGA、COSMIC和My Cancer Genome等肿瘤基因突变公共数据库,对克唑替尼治疗不同ROS1融合伴侣患者的现有研究成果和数据作一综述性分析,旨在为克唑替尼治疗不同ROS1融合伴侣NSCLC的预后判断提供依据。

ROS1基因在非小细胞肺癌靶向治疗中的研究进展

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,ROS1基因是新近发现的出现在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的原癌基因,它编码的蛋白是受体络氨酸激酶超家族成员之一,是一种对细胞生长和生存起着重要作用的蛋白。越来越多的研究表明,ROS1基因的改变是NSCLC个体化治疗的一个新的分子靶点。本文将重点综述ROS1的重排在NSCLC的特点、ROS1基因重排的检测方法,以及NSCLC中以ROS1重排基因作为药物靶点的研究进展。

非小细胞肺癌ROS1突变与EGFR突变及临床病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中ROS1融合突变与表皮生长因子受体(EGFR)突变及临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测2014年12月至2017年12月收治的3487例中国西北地区NSCLC患者ROS1基因的突变情况,同时采用ARMS法检测ROS1基因突变患者的EGFR基因突变情况,分析ROS1和EGFR共突变患者的临床病理特征。结果 3487例NSCLC患者中,ROS1基因突变54例(1. 5%)。ROS1基因突变与年龄、性别、吸烟史、病理类型和临床分期有关(P<0. 05)。54例ROS1融合基因突变患者中有3例(5. 6%)同时存在EGFR基因突变,其中19外显子缺失突变(19-del) 2例,L858R突变1例。3例ROS1突变均为突变体2型(R2)。结论中国西北地区NSCLC患者ROS1融合基因突变率为1. 5%,与EGFR基因突变可以共存。