耻垢分枝杆菌EF-G敲低菌株的构建和耐药分析

GTPase延伸因子G(elongation factor G,EF-G)是蛋白质翻译过程中重要的翻译因子。作为唯一在翻译延伸和核糖体再生2个翻译环节发挥重要功能的翻译因子,EF-G成为潜在的抗菌药物作用靶点。耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmetics,Msm)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)基因组中均存在2个EF-G同源编码基因,分别为Msm EFG1(MSMEG_1400)和Msm EFG2(MSMEG_6535),fusA1(Rv0684)和fusA2(Rv0120c)。基因突变库和生物信息学推测Msm EFG1(MSMEG_1400)和fusA1(Rv0684)是生长必需基因。为探究分枝杆菌中EF-G的生物学功能及特点,利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference,CRISPRi)技术构建了耻垢分枝杆菌中2个EF-G诱导型敲低菌株(Msm-ΔEFG1(KD)和Msm-ΔEFG2(KD)),研究发现EF-G2的敲低对细菌生长无影响,而EF-G1的敲低显著影响分枝杆菌的生长,成膜能力显著减弱、菌落形态显著变化、菌体长度显著增长,推测EF-G可能与细菌的分裂相关。最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)实验结果表明,抑制EF-G1的表达可增强分枝杆菌对利福平、异烟肼、红霉素、夫西地酸、卷曲霉素等抗菌药物的敏感性,提示EF-G1可能成为未来抗结核药物筛选的潜在靶标,为探究EF-G在分枝杆菌中的生理功能及作为潜在药物靶标提供基础。

保守GTP酶EF-G在蛋白质合成中的功能研究

延伸因子G(elongation factor G,EF-G)是一种保守的GTP水解酶,它是蛋白质翻译过程中一个重要的调控因子。同源模拟发现EF-G与核糖体保护蛋白Tet(O)具有相似的空间结构且都包含5个结构域,序列比对发现E.coliEF-G与Campylobacter jejuniTet(O)结构域Ⅳ保守的两个环状区不同。通过分子克隆构建EF-G嵌合体,表达纯化后的蛋白突变体通过核糖体依赖的GTP水解酶(GTPase)活性检测、多聚尿嘧啶(polyU)为mRNA合成苯丙氨酸多肽链、多聚核糖体的解聚检测及相关的体内实验,检测EF-G在肽链合成中的作用,结果发现EF-G嵌合体能够影响肽链生成过程中tRNA-mRNA复合物的移位,但不影响核糖体的再循环过程。

结核分枝杆菌来源翻译延伸因子EF-G的蛋白纯化、表征分析及蛋白晶体学研究

目前,结核分枝杆菌来源翻译延伸因子EF-G的作用机理已有较明确的研究,但其晶体结构和催化中心尚不清楚。对结核分枝杆菌来源EF-G进行了蛋白纯化、表征分析和蛋白晶体学研究。通过层析技术成功地从大肠杆菌中获得高纯度结核分枝杆菌来源EF-G。采用悬滴扩散法获得EF-G蛋白晶体,优化得到分辨率为0.383 nm的X-射线衍射数据。该晶体空间群为P61,晶胞参数:a=26.079 nm,b=26.079 nm,c=6.280 nm;α=β=90.00°,γ=120.00°。此外,SAXS结果表明EF-G在溶液中以紧凑形式存在。以上为最终解析EF-G的结构奠定了基础。

细粒棘球蚴重组延伸因子-1抗原的免疫原性研究

目的对细粒棘球蚴重组抗原EF-1的免疫原性进行初步鉴定,为重组疫苗研制的后续工作提供依据。方法用重组目的蛋白及融合表达蛋白作为抗原,分别免疫昆明小鼠获得抗血清,通过蛋白免疫印迹试验 (Western blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中产生的特异性抗体成分及其程度。结果重组目的蛋白EF-1和融合蛋白GST／EF-1免疫小鼠后均诱发产生了特异性抗体,实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义(P<0．05);目的蛋白和融合蛋白免疫两组小鼠所得血清的抗体含量差异没有统计学意义。结论目的蛋白EF-1和融合蛋白GST／EF-1都具有一定的免疫原性。

某三甲医院医务人员主观幸福感、自我效能感和生活满意度的相关研究

目的:了解某三级甲等综合医院医务人员生活满意度、自我效能感与主观幸福感的特点及三者的关系,探讨相应对策,以期达到提高医护人员心理健康水平。方法:采用随机整群抽样的方法,应用一般资料调查问卷、主观幸福感量表、生活满意度量表和自我效能感量表,对芜湖市某三甲医院399名在职医务人员进行问卷调查。结果:医务人员幸福感指数平均(9.01±2.04)分,低于成人常模(t=-27.45,P<0.01),中度幸福感占69.2%;自我效能感、生活满意度及其各维度与主观幸福感呈显著正相关;回归分析显示,生活满意度、自我效能感对主观幸福感具有正向预测作用,其中影响最显著的预测变量为生活满意度。结论:医务人员主观幸福感处于中等水平,生活满意度、自我效能感是影响医务人员主观幸福感的重要因素,可通过提高医务人员生活满意度、自我效能感以增强其主观幸福感。

不同批发价格谈判模式与渠道权力结构下的双渠道供应链博弈研究——基于营销努力视角

考虑双渠道供应链成员在批发价格制定过程中的讨价还价问题以及在供应链中权力的差异问题,基于批发价格制定的两种谈判基准和供应链的三种渠道权力结构,构建销售价格和营销努力共同影响需求的六种博弈模型,通过博弈模型分析得到两种批发价格谈判模式和三种渠道权力结构下的最优渠道定价策略。研究发现:相比于制造商营销努力,零售商营销努力对渠道定价和利润的影响受到更多因素的制约;制造商与零售商均愿意作为跟随方发挥后动优势;当网络直销渠道市场份额较低时,制造商与零售商偏好于以对方销售价格为基准的批发价格谈判模式,当网络直销渠道市场份额较高时,二者偏好于以自身销售价格为基准的批发价格谈判模式。

多目标规划有效解与G—真有效解等价的条件

本文给出了多目标数学规划的有效解与G-真有效解等价性的一系列充分条件。

二甲双胍联合磷酸西格列汀片治疗糖尿病的疗效及安全性

目的观察二甲双胍联合DPP-4抑制剂磷酸西格列汀片治疗糖尿病的临床疗效及安全性。方法选择50例2型糖尿病患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组25例。对照组采用二甲双胍治疗,观察组采用二甲双胍联合磷酸西格列汀片治疗,2组患者均连续治疗3个月。比较2组患者治疗前后空腹血糖、随机血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)的变化。结果 2组患者治疗前空腹血糖、随机血糖、HbA1c比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗3个月后,2组患者空腹血糖、随机血糖、HbA1c均较治疗前有明显改善,观察组患者改善幅度明显优于对照组(均P<0.05)。2组患者治疗过程中均未出现肾功能损害病例。结论二甲双胍联合DPP-4抑制剂磷酸西格列汀片治疗糖尿病患者疗效优于单用二甲双胍治疗,且安全性高。

对护理本科生经历自主学习教学改革内心体验的质性研究

[目的]了解护理本科生在自主学习教学改革中的内心感受与看法,为完善自主学习教育教学改革提供参考。[方法]采用质性研究方法中的现象学研究方法,对某高校护理学院本科2013级自主学习教学模式改革实验班的19名学生进行半结构访谈。[结果]提炼出4个主题:(1)绝大多数学生认可自主学习教学改革及其成效;(2)学生的多种能力和综合素质切实提高;(3)学生对传统被动学习模式具有依赖惯性,个体需求与情绪体验复杂多样;(4)需要注意与改进的问题。[结论]自主学习教学改革在切实提高学生多种能力和综合素质的同时,存在着部分学生被动学习的依赖惯性较大、学生的个体需求和情绪体验复杂多样、教师安排学习任务的合理性以及与学生沟通交流的及时性、有效性尚需加强等问题,着力改变学生惯性的被动学习模式,采取契合学生个体需求的多元化教学法,并加强学生的情绪引导,充分发挥教师指导者与促进者的作用才能有利于提高自主学习教改成效。

门控心肌灌注显像不同采集模式对左心室运动功能参数测定的影响

探讨每个心动周期8帧和16帧采集模式对门控心肌灌注显像(G-MPI)测定左心室运动功能参数的影响。前瞻性纳入2010年1月-2011年1月于四川大学华西医院核医学科拟行腺苷负荷/静息G-MPI的患者,利用共行成像技术,1次显像同时行16帧和8帧门控采集模式,采用Auto Quant软件分别计算两种采集模式所得的左心室舒张末期容积、收缩末期容积和射血分数(EF)。共48例患者的负荷/静息G-MPI纳入分析,其中男性29例,女性19例,平均年龄(51±16)岁。Bland-Altman一致性检验显示,负荷和静息状态下,16帧和8帧采集所得的EF值间的平均差值分别为3.13%(95%CI:5.93%～0.32%)和3.27%(95%CI:6.42%～0.12%)。16帧和8帧采集模式所获得的心肌缺血和(或)梗死患者的心室腔容积均较心肌灌注正常者大,相比EF值较心肌灌注正常者小。8帧和16帧采集模式不可相互替代来探测左心室EF。