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半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析
1
作者
李丽
朱贵明
+1 位作者
汪坤福
张鹏霞
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1868-1870,共3页
目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5'端存在的天然酶切位点进行酶连,...
目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5'端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3.1(-)载体。采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达。结果准确快捷地将EFsec-基因补齐了其5'端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFsec,转染哺乳动物细胞后检测到了EFsec基因的显著表达。结论半合成-酶连法可以高效快捷地补齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础。
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关键词
半合成-酶连法
克隆
表达
efsec
硒蛋白
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职称材料
题名
半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析
1
作者
李丽
朱贵明
汪坤福
张鹏霞
机构
佳木斯大学
出处
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1868-1870,共3页
基金
黑龙江省卫生厅项目(2010-482)
佳木斯大学重点科研项目(Szj2008-013)
佳木斯大学研究生创新项目(YJSCX2011-013JD)
文摘
目的将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸-tRNA特异性延伸因子(EFsec-)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析。方法采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5'端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3.1(-)载体。采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达。结果准确快捷地将EFsec-基因补齐了其5'端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFsec,转染哺乳动物细胞后检测到了EFsec基因的显著表达。结论半合成-酶连法可以高效快捷地补齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础。
关键词
半合成-酶连法
克隆
表达
efsec
硒蛋白
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
Q255 [生物学—细胞生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析
李丽
朱贵明
汪坤福
张鹏霞
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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