TRAF4和Eg5在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨TRAF4和Eg5在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法收集65例行手术治疗的卵巢癌患者术后石蜡包埋组织标本,并选取同期行手术治疗的36例卵巢上皮性良性病变肿瘤组织和36例因子宫肌瘤行全子宫及附件切除术的正常卵巢组织。采用免疫组化法检测组织中TRAF4和Eg5的阳性表达情况,实时荧光定量PCR法检测TRAF4和Eg5 mRNA的表达,Person相关性分析TRAF4和Eg5水平的相关性,通过绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析TRAF4和Eg5水平对卵巢癌的诊断效能,Kaplan-Meier曲线分析卵巢癌患者的生存情况。结果卵巢癌组织中TRAF4和Eg5的阳性表达率、TRAF4和Eg5 mRNA明显高于良性病变组织和正常卵巢组织(P<0.001);有淋巴结转移者TRAF4和Eg5 mRNA水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.001),FIGO分期中Ⅲ~Ⅳ期TRAF4和Eg5 mRNA水平明显高于Ⅲ~Ⅳ期(P<0.001),浸润程度T3-T4期中TRAF4和Eg5 mRNA水平显著高于T1-T2期(P<0.001);TRAF4和Eg5水平呈正相关性(γ=0.326,P<0.001);TRAF4的ROC曲线面积为0.837(95%CI:0.765~0.908,P<0.001),截断值为1.36时,灵敏度为73.85%,特异度为81.54%;Eg5的ROC曲线面积为0.913(95%CI:0.864~0.961,P<0.001),截断值为1.48时,灵敏度为87.69%,特异度为81.54;TRAF4高表达组5年总生存率为47.06%,明显低于TRAF4低表达组(67.74%)(P<0.05);Eg5高表达组5年总生存率为42.86%,明显低于Eg5低表达组(73.33%)(P<0.05)。结论TRAF4和Eg5在卵巢癌中呈高表达,与淋巴结转移、FIGO分期和浸润程度相关,TRAF4和Eg5的表达检测对卵巢癌的早期诊断和预后具有一定的诊断价值。

驱动蛋白Eg5抑制剂在肿瘤研究中的进展

有丝分裂双极纺锤体是癌症化学疗法中一个已证实的药物靶点，如紫杉烷和长春碱等作用于微管抑制纺锤体形成，在临床上是一类很成功的抗肿瘤药物。但微管在细胞的高尔基体、突触小泡等细胞器的转运具有重要作用，对轴突微管也有抑制影响。因此，作用于微管的抗增殖药物具有不可逆转的神经毒性，长期使用这类药物会使肿瘤产生抗药性。

巨桉无性系EG5叶片高效再生体系的建立

以巨桉栽培无性系EG5无菌苗的叶片为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究。结果表明:愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适培养基为改良MS+0.12 mg·L-1TDZ+0.25 mg·L-1NAA;硝酸铵对EG5叶片愈伤组织生长及植株分化的影响较大,最适宜质量浓度为0.412 5 g·L-1;最佳伸长培养基配方为改良MS+0.3 mg·L-16BA+0.05 mg·L-1IBA+0.3 mg·L-1IAA;暗培养10 d能促进不定芽分化,延缓愈伤组织老化和褐变速度。生根培养基为改良MS+0.4 mg·L-1NAA时生根率最高,为65.47%,移植成活率为90%以上。

巨桉无性系Eg5的卡那霉素和头孢霉素敏感性研究

以巨桉无性系Eg5叶片为外植体材料,试验了硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,Km)对外植体愈伤组织诱导增殖、芽分化、芽生根的影响,并且试验了头孢霉素(Cefotaxime,Cef)对外植体再生的影响及其对根癌农杆菌GV3101的抑制效果。结果表明:抑制愈伤组织增殖培养的卡那霉素浓度为17.5 mg/L,完全抑制芽分化的卡那霉素浓度为60 mg/L,完全抑制生根的卡那霉素浓度为400 mg/L;Cef在0～500mg/L范围内,0～300mg/L Cef对外植体的生长分化影响最小;共培养结束后的外植体经过500 mg/L的Cef处理后,共培养基中添加100 mg/L的Cef便可以完全抑制农杆菌GV3101的生长。

二氢喹唑啉类Eg5抑制剂的设计、合成及生物活性

目的:设计并合成新型的Eg5抑制剂并测定其对Eg5蛋白的抑制活性。方法:利用药物设计软件,采用碎片生长的方法获得新结构的Eg5抑制剂,用化学合成的方法进行制备,通过测定Eg5蛋白水解ATP后释放出的无机磷的量,得出化合物对Eg5蛋白的抑制活性。结果与讨论:设计并合成了未见文献报道的Eg5抑制剂12个,目标化合物结构经IR、1H NMR、MS与元素分析确证。对所有目标化合物进行了Eg5的抑制活性测试,有10个化合物对Eg5的抑制活性强于阳性对照药Monastrol。

肺癌中Eg5、Ki-67的表达及临床意义

目的观察Eg5、Ki-67在肺癌中的表达及与临床病理特征的关系,探讨两者与肺癌预后的关系。方法采用免疫组化法检测79例肺癌组织、20例肺良性病变组织中Eg5、Ki-67蛋白表达,分析两者表达与临床病理特征的关系;并随访患者生存期,采用Kaplan-Maier生存分析和Cox回归法分析Eg5、Ki-67在肺癌组织中表达和预后的关系。结果 Eg5在肺癌组织中的阳性率为65.8%,Ki-67在肺癌组织中的强阳性率为48.1%,Eg5、Ki-67表达均与患者临床分期、淋巴结转移明显相关。Kaplan-Maier生存分析提示Eg5阳性、淋巴结转移和中晚期的肺癌患者预后较差(P<0.05);Cox多因素回归分析显示临床分期、淋巴结转移是影响肺癌患者预后的独立危险因素,Eg5表达与淋巴结转移明显相关(r=0.539,P<0.05)。结论 Eg5蛋白在肺癌组织中呈阳性表达;Eg5、Ki-67蛋白高表达与淋巴结转移密切相关,Eg5阳性提示肺癌患者预后不良。

驱动蛋白Eg5及其靶向治疗药物的抗肿瘤机制

Eg5又名Kif11(kinesin family member 11)是驱动蛋白家族成员之一,在增殖组织细胞中高表达,定位于有丝分裂期的微管,主要与细胞分裂中染色体的定位、中心体的分离以及双极纺锤体的形成和分离有关。Eg5是近年来研究较多的一种驱动蛋白分子,已开发出抑制其活性的肿瘤靶向治疗药物。该文介绍Eg5生物学特性、其抑制物在肿瘤靶向治疗中作用及与疾病关系等方面的最新研究进展。

驱动蛋白Eg5在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的:检测驱动蛋白Eg5在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达水平,并探讨其与非小细胞肺癌转移的关系。方法:选取63例非小细胞肺癌的手术切除标本和20例正常肺脏组织标本,采用免疫组化检测Eg5的表达,并分析其与非小细胞肺癌临床病理特征和转移之间的关系。结果:Eg5在正常肺组织中未见明显表达,在非小细胞肺癌组织中的表达阳性率为68.3%(43/63),且与非小细胞肺癌的肿瘤直径(χ~2=4.506,P=0.034)、临床分期(χ~2=8.866,P=0.012)、淋巴结转移情况(χ~2=19.52,P<0.001)有关,差异有统计学意义;而与患者性别、年龄、分化程度等指标无明显的相关性(P>0.05)。结论:Eg5在正常肺组织中未见明显表达,在非小细胞肺癌组织中高表达,Eg5的表达与非小细胞肺癌临床分期及转移有关,Eg5可预测非小细胞肺癌的淋巴结转移情况,可能作为非小细胞肺癌化学治疗的潜在靶点。

农杆菌介导转化巨桉Eg5影响因素的研究

以巨桉无性系Eg5叶片为外植体材料,以GUS瞬时表达率和瞬时表达率指数作为评价指标,主要探讨了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养基pH、共培养时间和乙酰丁香酮（Acetosyringone,AS）对遗传转化的影响,结果表明预培养3 d、菌液浓度OD600 nm为0.5、接种30~60 min、共培养基pH值为5.8~6.0、共培养基中添加150 mg.L-1AS、菌液中不添加AS、共培养1 d遗传转化效果最佳,初步建立了巨桉Eg5的遗传转化体系。

Eg5通过c-Myc/SP1/CDK1通路调节去势抵抗性前列腺癌细胞的恶性增殖

目的:探究纺锤体有丝分裂驱动蛋白(Eg5)对去势抵抗性前列腺癌细胞株DU145生长、凋亡、细胞周期及侵袭转移的调节作用及机制。方法:Eg5 shRNA干扰Eg5在DU145细胞内的表达,小分子抑制剂SB-743921抑制Eg5在DU145细胞内的功能。实验分为对照组、NC shRNA组、Eg5 shRNA组和SB-743921组,MTT实验和单克隆形成实验测定各组细胞生长;Annexin V-FITC和PI双染实验测定各组细胞凋亡;PI单染实验分析各组细胞周期;划痕实验分析各组细胞迁移能力;q-PCR和Western blot评价各组细胞内c-Myc、SP1、CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin、Vimentin及E-cadherin的表达情况。结果:NC shRNA组与对照组各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。Eg5 shRNA组、SB-743921组与对照组比,细胞增殖及迁移能力降低、细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G2/M期,差异均有统计学意义(P<0.05)。Eg5 shRNA组、SB-743921组与对照组相比,细胞内c-Myc和SP1的表达量降低(P<0.05),调控G2/M期基因CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1及CDC25B的表达降低(P<0.05),同时调控细胞迁移基因N-cadherin和Vimentin的表达量降低,E-cadherin的表达量增加(P<0.05)。结论:有丝分裂驱动蛋白Eg5可能通过c-Myc/SP1/CDK1通路调节去势抵抗性前列腺癌的恶性增殖和侵袭转移,是治疗前列腺癌的潜在靶点。

Eg5基因在神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡中的作用

目的探讨Eg5基因对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖和凋亡的影响。方法取2株NB细胞株SHSY-5Y和NBL-S,分别转染针对Eg5基因的小干扰RNA(siRNA),分为细胞对照组(用等体积的水代替siRNA,只含有脂质体,未转染细胞)、siRNA对照组(转染siRNA对照)和siRNA干扰组(转染Eg5 siRNA),每组6孔,每孔1×10^6个细胞。使用实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测Eg5 mRNA表达水平的变化;使用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)掺入实验和克隆形成实验检测下调Eg5表达对NB细胞增殖的影响;使用流式细胞术检测下调Eg5表达对NB细胞凋亡和细胞周期的影响。结果荧光定量PCR检测结果显示,siRNA干扰组Eg5 mRNA表达水平与细胞对照组和siRNA对照组相比显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);EdU掺入实验和克隆形成结果表明,siRNA干扰组细胞中DNA的合成量和细胞克隆数量低于细胞对照和siRNA对照组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,细胞对照组和siRNA对照组细胞的凋亡比率低于siRNA干扰组细胞的凋亡比率,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期的检测结果显示,细胞对照组和siRNA对照组细胞中G0/G1期所占比率<50%,而siRNA干扰组细胞中G0/G1期所占比率>70%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在NB细胞中使用siRNA下调Eg5表达,能够抑制NB细胞增殖,促进细胞凋亡。

EG5和BCR/ABL在慢性粒细胞白血病中表达及其临床意义

目的观察驱动蛋白EG5 mRNA在正常人外周血和骨髓中的表达情况,探讨其在各期慢性粒细胞白血病(CML)中的表达及与BCR/ABL mRNA表达的相关性,评估EG5 mRNA在CML诊断和预后分析中的应用价值。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EG5 mRNA和筑巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)检测BCR/ABL mR-NA,分别对8例正常人外周血及骨髓样本和62例CML患者的外周血样本进行检测。结果正常外周血标本中未检测到EG5的表达,正常骨髓标本中可见EG5的低丰度表达;EG5辅助诊断CML的敏感度和特异性分别为89.6%(26/29)和84.8%(28/33);BCR/ABL融合基因诊断CML的敏感度和特异性分别为96.5%(28/29)和90.9%(30/33);CML中EG5和BCR/ABL表达的差异无统计学意义,且两者之间呈高度正相关。结论EG5和BCR/ABL在慢性粒细胞白血病疾病进展中的表达情况基本一致,EG5和BCR/ABL的联合检测及动态观察,可作为CML临床辅助诊断、疗效和预后判断的指标之一。

驱动蛋白Eg5研究进展

驱动蛋白Eg5(kinesin-5),又名驱动蛋白超家簇成员11(kinesin fanmily member11,kif11),定位于纺锤体微管,参与中心体的分离和双极纺锤体的形成。在多种肿瘤细胞中Eg5高表达,并与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。检测Eg5对肿瘤的早诊早治、判断肿瘤转移及预后具有着重要意义。鉴于Eg5在有丝分裂中的特性,作为肿瘤治疗的靶点受到广泛关注,众多Eg5抑制剂正不断研发。

TRAF4及其相关蛋白Eg5与肿瘤的关系

肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor associated factor,TRAF)是一类细胞内重要的信号转导蛋白,它参与调节多种信号转导通路的激活,调节正常和肿瘤细胞的增殖、存活、凋亡、参与炎症反应。迄今已发现7种不同的TRAF,TRAF4是其中特殊的一员。通过对TRAF4结构功能的介绍,发现TRAF4的过表达可能与肿瘤形成有关。TRAF4的相关蛋白Eg5是驱动蛋白家族成员之一,它在增殖组织细胞中高表达,定位于有丝分裂期的微管,主要与细胞分裂中染色体的定位、中心体的分离以及双极纺锤体的形成和分离有关。通过对Eg5结构功能的介绍,探究其与TRAF4的相互作用以及与肿瘤形成的关系。

驱动蛋白Eg5在肝细胞癌中的表达及其意义

目的检测驱动蛋白Eg5在肝细胞癌中的表达水平,并探讨其与肝癌转移的关系。方法选取53例原发性肝癌的手术切除标本和5例正常肝脏组织,采用免疫组化检测Eg5的表达,并分析其与肝癌临床病理特征和肝癌转移间的关系;RT-PCR检测Eg5 mRNA在有门脉癌栓、无门脉癌栓、炎性假瘤的肝脏组织中的表达。结果免疫组化显示Eg5在正常肝脏组织中未见明显表达,在肝癌组织中的表达阳性率为62.3%(33/53),且与肝癌的肿瘤直径(χ2=10.162,P=0.002)、Edmondson分级(χ2=4.414,P=0.038)、pTNM分期(χ2=13.061,P=0.000)、有无门脉癌栓(χ2=4.098,P=0.041)有关;而与患者性别、年龄、肿瘤包膜有无等指标无明显的相关性。RT-PCR显示Eg5 mRNA在炎性假瘤的肝脏组织中未见表达,在无门脉癌栓的肝癌组织、有门脉癌栓的肝癌组织中表达水平为0.647±0.028、0.933±0.017,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Eg5在正常肝脏组织中未见明显表达,而高表达于肝癌组织中,Eg5的表达与肝癌转移特性有关,Eg5可能作为肝癌化学治疗的潜在靶点。

Eg5基因对膀胱癌T24细胞增殖和迁移的影响

目的通过RNA干扰阻断T24细胞中Eg5基因的表达,研究Eg5基因对T24细胞增殖和迁移的影响。方法 T24细胞株分为3组:干扰组、空白对照组、阴性对照组。化学合成针对Eg5的小干扰RNA,通过脂质体转染至T24细胞中,应用Western blot法检测转染后T24细胞中Eg5蛋白表达,采用台盼蓝拒染实验检测细胞死亡率,用噻唑蓝(MTT)比色分析法和平板克隆形成实验检测细胞增殖抑制率,通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果干扰组Eg5蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组;干扰组细胞死亡率显著升高,与空白对照组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干扰组的克隆形成率下降,与空白对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);MTT结果提示,干扰Eg5基因表达后,T24细胞的增殖率明显下降(P<0.05);划痕实验结果显示干扰组细胞迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。结论 Eg5基因在膀胱移行细胞癌起重要作用,干扰Eg5基因能有效抑制T24细胞的增殖与迁移,促进细胞死亡,以Eg5为靶点有望成为膀胱癌基因治疗的新基因靶点。

A potent chemotherapeutic strategy in prostate cancer： S-（methoxytrityl）-L-cysteine, a novel Eg5 inhibitor

Docetaxel-based combination chemotherapy remains the predominant treatment for castration-resistant prostate cancer. However, taxane-related drug resistance and neurotoxicity have prompted us to develop substitute treatment strategies. Eg5 （kinesin spindle protein）, which is crucial for bipolar spindle formation and duplicated chromosome separation during the early phase of mitosis, has emerged as an attractive target for cancer chemotherapy. The aim of this study was to investigate the anticancer efficacy of $-（methoxytrityl）-L-cysteine （S（MeO）TLC）, a novel Eg5 inhibitor in prostate cancer. Eg5 expression was examined in human prostate cancer cell lines and tissue microarrays were constructed from clinical specimens. Antiproliferative activity of S（MeO）TLC in prostate cancer cells was assessed by a cell viability assay. The anticancer effect and inhibitory mechanism of S（MeO）TLC in prostate cancer cells was further explored by Hoechst staining, flow cytometry and immunofluorescence. In addition, the antitumor effect of S（MeO）TLC on subcutaneous xenograft models was assessed. Eg5 expression was identified in PC3, DU145 and LNCaP cells. More than half of prostate cancer clinical specimens displayed Eg5 expression. S（Me0）TLC exhibited more powerful anticancer activity in prostate cancer cells compared with the other four Eg5 inhibitors tested. S（MeO）TLC induced cell death after arresting dividing cells at mitosis with distinct monopolar spindle formation. S（MeO）TLC exhibited its significant inhibitory activity （P〈0.05） on subcutaneous xenograft models also through induction of mitotic arrest. We conclude that Eg5 is a good target for prostate cancer chemotherapy, and S（MeO）TLC is a potent promising anticancer agent in prostate cancer.

驱动蛋白Eg5的抑制剂及其抗肿瘤作用机制

驱动蛋白Eg5(kinesin-5),又名驱动蛋白超家族成员11(kinesin family member 11,KIF11),是一种广泛表达于人体正常组织的蛋白,对纺锤体微管组装、染色体排列和分离具有重要作用。在有丝分裂前期,Eg5蛋白定位于纺锤体微管和中心体,且沿微管正向运动。在有丝分裂的前中期,Eg5蛋白协同驱动蛋白-14调控中心体分离,维持纺锤体结构并促进染色体排列。

PTEN和Eg5蛋白在前列腺癌中表达及相关性

目的对前列腺癌中PTEN和Eg5蛋白进行免疫组化检测,探讨PTEN和Eg5蛋白表达与前列腺癌临床病理的相关性。方法采用免疫组化SP法对2014年12月至2016年3月浙江大学医学院附属金华医院检测81例前列腺癌和45例前列腺增生PTEN和Eg5蛋白的表达,对前列腺癌临床病理资料与PTEN和Eg5表达分析,采用Spearmen对PTEN和Eg5蛋白表达进行相关性分析。结果前列腺癌中PTEN蛋白表达阳性率为25.93%(21/81),前列腺增生中表达阳性率为88.89%(40/45),二者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Eg5蛋白在前列腺癌中表达阳性率为70.37%(57/81),前列腺增生中表达阳性率为4.44%(2/45),二者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN蛋白缺失表达和Eg5蛋白增高表达与前列腺癌的Gleason评分、TNM分期、术前PSA、精囊浸润、盆腔淋巴结转移和五年生化复发密切相关(P<0.05)。Spearmen相关性分析显示PTEN与Eg5蛋白的表达呈负相关(r=-0.763,P<0.05)。结论前列腺癌中PTEN蛋白下降表达,Eg5蛋白升高表达,它们异常表达与前列腺癌发生进展有关。

S-三甲基-L-半胱氨酸对膀胱尿路上皮癌细胞Eg5基因表达和凋亡的影响

目的:体外观察纺锤体驱动蛋白Eg5抑制剂S-三甲基-L-半胱氨酸(STLC)对人膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞Eg5基因表达和凋亡的影响。方法:分别采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)比色法、TUNEL染色法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting法检测STLC对人膀胱癌BIU-87细胞的细胞周期、生长抑制率、凋亡指数、Eg5 mRNA及其蛋白相对表达水平的影响。结果:将STLC与BIU-87细胞共孵育,不同时间点收集细胞,可见随着STLC作用时间延长至16 h,细胞有丝分裂周期中G2/M期的BIU-87细胞明显增多(29.6%),且细胞发生凋亡的比例也有明显增加的趋势。统计分析显示,与0 h相比,STLC处理16 h时细胞凋亡比例升高,差异有统计学意义(P=0.020)。去除STLC后再培养,于不同时间点收集细胞,结果表明STLC去除后BIU-87细胞周期进程开始恢复,与去除1 h时G2/M期细胞比例(34.84%)相比,去除3 h后G2/M期细胞比例(24.9%)显著降低,差异有统计学意义(P=0.001);细胞凋亡比例差异也有统计学意义(P=0.049)。与对照组相比,STLC处理组细胞增殖抑制率和凋亡指数均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,STLC处理组Eg5 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:STLC可有效抑制Eg5基因表达并诱导人膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞凋亡,为膀胱尿路上皮癌的药物治疗提供了实验依据和理论基础。