表没食子儿茶素-3-没食子酸酯缓解顺铂所致大鼠急性肾损伤效果评价

【目的】评价不同浓度表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对顺铂所致大鼠急性肾损伤的保护效果,筛选出EGCG缓解顺铂肾毒性的最佳浓度。【方法】将30只Wistar大鼠随机分为5组(6只/组):正常对照组(CON)、顺铂组(CIS)、低剂量EGCG(20 mg/kg)+顺铂组(LCE)、中剂量EGCG(40 mg/kg)+顺铂组(MCE)及高剂量EGCG(80 mg/kg)+顺铂组(HCE)。CON和CIS组大鼠持续28 d灌胃生理盐水(40 mg/kg),CIS组在第26天腹腔注射CIS(7 mg/kg);LCE、MCE和HCE组大鼠持续28 d灌胃相应剂量的EGCG,在第26天腹腔注射CIS,第29天采集大鼠血清和肾脏组织。检测药物灌服期间大鼠生理和生化指标变化,病理学检测各组大鼠肾脏组织病理变化,初步评价EGCG在CIS所致大鼠急性肾损伤中保护作用,筛选出EGCG最佳有效浓度;Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3及炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和IL-10蛋白表达变化,进一步证实EGCG的保护效果。【结果】与CON组相比,CIS组大鼠采食量、饮水量和体重在第28天显著下降(P<0.05),血清中尿素氮(BUN)与肌酐(CRE)含量显著上升(P<0.05),肾小管扩张明显,有蛋白管型,肾损伤严重;与CIS组相比,MCE组大鼠采食量、饮水量和体重显著上升(P<0.05),血清中BUN、CRE含量显著下降(P<0.05),MCE组肾脏肾小管扩张程度得到明显改善,LCE和HCE组无明显变化。因此,选用40 mg/kg EGCG用于后续试验。Western blotting检测结果表明,与CON组相比,CIS组Bax、IL-6、Caspase-3蛋白表达量显著上升(P<0.05),Bcl-2、IL-10蛋白表达量显著下降(P<0.05);与CIS组相比,MCE组Bax、IL-6、Caspase-3蛋白表达量显著下降(P<0.05),Bcl-2、IL-10蛋白表达量显著升高(P<0.05)。【结论】EGCG对CIS诱导的大鼠急性肾损伤具有保护作用,以40 mg/kg为最佳,其保护机制与抑制肾细胞凋亡和炎症相关。

茶树种质资源EGCG3"Me含量及其变化规律研究

采用HPLC分析技术对国内茶树种质资源的EGCG3"Me含量及其变化规律进行了研究。结果表明:在200份高多酚茶树种质中发现EGCG3"Me的含量大于1%的茶树种质有6个;茶梢中EGCG3"Me的含量随着叶片成熟度的提高而增加,并且秋季新梢高于夏季新梢;绿茶加工过程能有效保持鲜叶中EGCG3"Me含量,而乌龙茶加工过程的萎凋工序中茶叶中EGCG3"Me含量有明显增加。

茶叶中EGCG3″Me的分析方法研究

采用制备HPLC系统进行分离纯化并进一步结合NMR、LC/MS进行结构鉴定,从茶叶中分离纯化出了EGCG3″Me;研究了不同提取条件对茶叶中EGCG3″Me含量的影响,初步建立了用反相高效液相色谱测定茶叶中EGCG3″Me含量的分析方法。结果表明,该方法重现性好,适用于常规定量分析,平均加样回收率为95.48%,RSD为3.31%;采用蒸馏水在90℃的水浴浸提5min,茶汤中EGCG3"Me的浓度可以达到最高值。

茶叶中的EGCG3″Me研究

设置茶鲜叶的不同采摘成熟度、不同采摘时间以及不同烘干温度等,制备茶样,研究不同成熟度、不同采摘时间以及不同烘干温度等对茶叶中表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)含量的影响。研究发现,随着茶鲜叶成熟度的增加,叶片中EGCG3″Me含量有增加的趋势,一般在第3叶(或者第4叶)含量达到最高;1d中,茶鲜叶中EGCG3″Me含量在中午达到最高;在90℃烘干温度下,茶叶中的EGCG3″Me含量能得到有效的保持。

茶叶中EGCG3″Me的研究与开发

茶叶中的EGCG3″Me已经引起了人们的关注。本文对国内外EGCG3″Me的研究现状进行了综述,并探讨了茶叶中EGCG3″Me的研究方向和发展前景。

茶叶中甲基化EGCG的研究

EGCG3″Me、EGCG4″Me作为茶叶中儿茶素的两种甲基化产物在抗过敏,尤其是抗花粉过敏具有非常显著的功效,本次研究通过对我国西部大量茶树品种资源的调查分析,旨在筛选出一些高含量EGCG3″Me的茶树品种.实验结果显示:No.51、No.55、No.58等EGCG3″Me含量在1%左右,进一步了解到EGCG3″Me在1芽3叶中含量最高,不同的生态环境对茶叶中EGCG3″Me也存在重要的影响.

高效液相色谱-二极管阵列法检测四川绿茶、黄茶、黑茶、红茶和青茶中甲基化儿茶素含量

采用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)对四川省雅安、成都、乐山、宜宾、绵阳23家企业生产的绿茶、黄茶、黑茶、红茶和青茶中48个茶样的(-)-表没食子儿茶素-3-O(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)含量进行了比较研究。结果表明:青茶EGCG3″Me含量最高,在3.14~6.08 mg/g之间,平均值为4.40 mg/g;黑茶EGCG3″Me含量在0~1.72 mg/g,平均值为0.35 mg/g;绿茶和黄茶中EGCG3″Me含量较低;绿茶中含量在0~0.39 mg/g之间,平均值为0.10mg/g;黄茶中含量在0~0.09 mg/g之间,平均值为0.05 mg/g;红茶中未检出。各茶类间EGCG3″Me含量差异显著,主要原因在于加工所用鲜叶原料(品种、采摘标准等)及加工工艺等不同。建议易过敏人群应适当饮用青茶。

四川茶树品种资源中EGCG3″Me研究

采用高效液相色谱法(HPLC)对四川70份茶树品种资源新梢中(-)-表没食子儿茶素-3-O(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)含量进行分析,发现3份茶树品种资源富含EGCG3″Me(含量>10 mg/g),即蜀茶5号、金观音、城西11号。对蜀茶5号新梢季节及叶位变化规律研究,发现春、夏、秋三季,随着新梢叶片成熟,EGCG3″Me含量均先增加后降低;同等叶位相比,EGCG3″Me含量均呈递增趋势;含量最高的叶位为秋梢第二叶,秋梢第一叶至第四叶均超过10 mg/g。以蜀茶5号秋梢加工成4种茶类,发现绿茶、黄茶中EGCG3″Me含量最高,与鲜叶相当,其次为青茶,而红茶中未检出,且萎凋显著增加其含量。建议四川富含EGCG3″Me茶叶将秋梢一芽二、三叶加工成绿茶或黄茶,且在加工前进行适度摊放(轻度萎凋)。

茶叶中EGCG3＂Me和EGCG4＂Me的分离制备与鉴定

采用柱色谱和高效制备液相色谱法从茶叶中分离制备2种甲基化EGCG(EGCG 3"Me和EGCG 4"Me)。用含水的乙酸乙酯提取茶叶,粗提液浓缩后经HP-20柱色谱分离,再经制备液相色谱分离,以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱得到2种甲基化EGCG。经紫外光谱、核磁共振及质谱分析,进一步确定2种甲基化EGCG分别为EGCG3"Me和EGCG4"Me。所制备的2种甲基化EGCG的纯度在98%以上。

EGCG3"Me提取与分离工艺研究

采用HPLC、聚酰胺树脂、HPTLC等技术手段,进行EGCG3"Me的提取与分离纯化研究。通过正交实验表明,EGCG3"Me最优提取工艺条件为:乙醇体积分数70%、回流时间30 min、回流温度80℃、料液比1∶10,质量分数为0.89%。采用40%酒精、60%酒精进行冼脱时,有大量EGCG3"Me富集。以甲醇∶氯仿=7∶2为洗脱剂,采用100～120目聚酰胺树脂进一步分离,可以得到纯度约为40%的EGCG3"Me。

高速逆流色谱分离纯化EGCG3″Me的研究

首次采用高速逆流色谱法对经自制聚酰胺初步分离的表没食子儿茶素-3-(3″-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)样品中的EGCG3″Me单体进行分离纯化。结果表明,选择水-甲醇-乙酸乙酯-正己烷(体积比5∶2∶9∶1)为高速逆流色谱分离的两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,在主机转速700 r/min、流速2.0 mL/min、检测波长254 nm的条件下,可对EGCG3″Me实现良好分离。经高效液相色谱检测,分离纯化后的EGCG3″Me纯度可达90%以上,产物的收率为76.53%。

EGCG EGCG4″Me和EGCG3″Me清除DPPH自由基的研究

采用DPPH自由基检测法测定了EGCG,EGCG4″Me和EGCG3″Me清除自由基的活性。在反应时间44 min和波长517 nm下测定了EGCG,EGCG4″Me和EGCG3″Me清除DPPH自由基的EC50值。结果表明,三者都具有明显的清除作用,其EC50值分别为1.208,2.499,1.632 mg/L。

乌龙茶粗多酚、EGCG和EGCG3’’Me体外抑制α-葡萄糖苷酶活性

为研究乌龙茶粗多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin gallate,EGCG)、甲基化EGCG(epigallocatechin3-O-(3-O-methyl)gallate,EGCG3’’Me)对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,采用酶动力学和紫外吸收光谱方法,探究并比较了三者的抑制活性及类型。结果表明:乌龙茶粗多酚、EGCG和EGCG3’’Me对α-葡萄糖苷酶均有较强的抑制作用,半抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)依次为0.178、0.040、0.064 mg/m L;Lineweaver-Burk双倒数作图显示乌龙茶粗多酚和EGCG的抑制类型为非竞争抑制,而EGCG3’’Me为竞争性抑制;紫外吸收光谱实验表明乌龙茶多酚样品能够使α-葡萄糖苷酶的吸收光谱发生蓝移,推测酶蛋白的构象有所变化。EGCG与EGCG3’’Me对α-葡萄糖苷酶活性的影响和抑制类型的不同可能是由于EGCG的一个羟基被甲氧基取代所引起的。

福建云霄地方茶树品种资源生化成分特征分析与评价

以福建省云霄县小帽山、梁山和南乌山3个区域共23份地方茶树品种资源为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法和超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定其儿茶素、嘌呤生物碱及氨基酸组分含量,并进行描述统计分析、差异分析和聚类分析,以筛选生化成分含量特异的茶树品种资源。结果表明:(1)23份茶树品种资源的儿茶素总量变化范围为73.54~260.31 mg·g^(-1),平均值为160.48 mg·g^(-1);表没食子儿茶素-3-O-甲基-没食子酸酯(EGCG3″Me)在所有资源中均检出,含量最高的为小帽山3号(X03),高达33.65 mg·g^(-1)。(2)23份茶树品种资源的嘌呤生物碱总量变化范围为15.28~70.42 mg·g^(-1),平均值为40.95 mg·g^(-1);苦茶碱(TC)在梁山地区的茶树品种资源(LS01-LS07)均检出,其中梁山6号(L06)和梁山7号(L07)的苦茶碱含量高于其咖啡碱含量。(3)23份茶树品种资源的氨基酸总量变化范围为6.40~47.57 mg·g^(-1),平均值为20.83 mg·g^(-1);氨基酸构成丰富,共检测出20种氨基酸物质。(4)差异分析和聚类分析结果显示,云霄县3个区域茶树资源的生化成分具有明显地域特征。其中梁山区域茶树资源富含苦茶碱(TC),小帽山茶树资源的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表没食子儿茶素-3-O-甲基-没食子酸酯(EGCG3″Me)含量较高,南乌山茶树资源的丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)含量略高于其他两地。研究发现,云霄地方茶树品种资源的儿茶素、嘌呤生物碱及氨基酸含量差异大,具有丰富的遗传多样性,区域特征明显,筛选出高儿茶素、高EGCG3″Me、高苦茶碱、高茶氨酸等18份优特茶树品种资源,为云霄地方茶树品种资源的系统开发利用奠定了基础。

福建大田茶树品种资源生化成分特征分析与评价

【目的】探明福建省大田县茶树品种资源生化成分特征,为其开发利用和茶树特异品种筛选提供科学依据。【方法】以24份大田茶树品种资源为试材,采用高效液相色谱法(HPLC)测定儿茶素组分,应用超高效液相色谱—质谱联用法(UHPLC-MS/MS)测定嘌呤生物碱组分及氨基酸组分,并进行描述性分析、主成分分析、聚类热图分析及特异资源筛选。【结果】24份大田茶树品种资源的儿茶素总量和表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me)含量分别为60.00~251.75和2.92~22.90 mg/g,其遗传多样性指数分别为2.11和2.06;咖啡碱、苦茶碱和茶氨酸含量分别为3.69~68.71、0.29~48.59和0.28~39.52 mg/g,其遗传多样性指数分别为1.98、1.99和1.96。对主要品质成分进行主成分分析,前3个主成分的累积方差贡献率超过80.00%。基于儿茶素、嘌呤生物碱及氨基酸组分共30个生化成分,可将24份大田茶树品种资源分为3个类群,A类群氨基酸组分含量较高,B类群生化成分含量均表现较低,C类群的儿茶素组分及嘌呤生物碱组分含量较高,不同类群在表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、EGCG3"Me、咖啡碱、苦茶碱和茶氨酸含量等主要指标有明显差异。综合分析结果,筛选到16份儿茶素组分特异资源(高儿茶素10份,高EGCG 5份、高EGCG3"Me 1份)、23份嘌呤生物碱组分特异资源(高嘌呤生物碱9份、高苦茶碱13份、高咖啡碱1份)及6份高茶氨酸茶树资源。【结论】大田茶树品种资源均含有EGCG3"Me和苦茶碱,儿茶素、嘌呤生物碱及氨基酸组分具有丰富的遗传多样性;通过系统的鉴定评价,筛选出一批生化成分特异资源,可作为茶树特异性状育种材料。

绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗过敏和潜在的抗癌特性.本文运用MTT试验,DAPI染色和Annexin V-FITC分析了EGCG对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导.结果表明,EGCG对Hep G2细胞具有明显的增殖抑制作用,存在剂量和时间依赖效应;EGCG能诱导Hep G2细胞凋亡,并具有剂量依赖效应.

茶树表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯研究进展

表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me)是茶叶中最常检测到的甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG"Me),具有较表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)更好的保健功效。本文对EGCG3"Me的理化性质、制备方法、保健功效、茶树EGCG3"Me含量影响因素、EGCG3"Me体内合成路径等国内外研究现状进行了综述,展望EGCG3"Me的体内代谢途径及其深加工产品研发将成为研究热点。

寿宁长叶1号等茶树新品系儿茶素和氨基酸组分分析

以寿宁长叶1号等5个茶树新品系为供试材料,以‘福鼎大白茶’为对照材料,采用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定其儿茶素及游离氨基酸等组分含量,结果表明:供试茶树新品系的主要品质成分含量差异显著(P<0.05),如茶氨酸、表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me)等。儿茶素总量为83.12~150.87 mg·g^(-1);游离氨基酸总量为26.40~56.22 mg·g^(-1),其中茶氨酸含量为15.43~41.71 mg·g^(-1)。5份茶树品系中寿宁长叶1号、芎坑大白1号和寿宁长叶2号为高茶氨酸资源,茶氨酸含量分别为36.90、40.78、41.71 mg·g^(-1);伏际大茶树和芎坑大白1号的EGCG3"Me含量较高,分别为6.49 mg·g^(-1)和5.88 mg·g^(-1)。以上结果可为优质茶树品种的选育及利用提供参考。

福建苦茶资源不同叶位儿茶素及嘌呤生物碱组分分析

以福建安溪、云霄和大田苦茶资源为研究对象,‘福鼎大白茶’为对照种,采用高效液相色谱法(HPLC)、超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定了茶树春梢不同叶位的儿茶素组分和嘌呤生物碱组分含量。结果表明:福建安溪、云霄和大田苦茶含有特异成分表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me)和苦茶碱(TC),其中云霄苦茶和大田苦茶的TC含量大于30 mg·g^(-1),属于高苦茶碱茶树种质,云霄苦茶的嘌呤生物碱总量大于70 mg·g^(-1),属于高嘌呤生物碱茶树种质;对照种福鼎大白茶不含TC,仅在第一叶中检出EGCG3"Me(含量为3.07 mg·g^(-1))。参试苦茶资源的儿茶素总量在茶树新梢上的分布是随着叶位的增加,其含量先增加再减少,在第三、第四叶位达到最大值,嘌呤生物碱含量与鲜叶成熟度呈负相关关系。不同叶位的EGCG3"Me和TC含量差异显著,安溪苦茶和云霄苦茶的EGCG3"Me和TC含量随叶位增加呈递增,而在大田苦茶中的变化规律不明显;3份苦茶资源春梢第三、第四叶的EGCG3"Me含量均大于10mg·g^(-1),本研究结果可为福建特异茶树种质资源的挖掘,苦茶资源的研究与利用提供参考。

高表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯茶树种质资源的筛选与评价

【目的】探明福建野生茶树种质资源儿茶素组分特征,为福建野生茶树种质资源的开发利用和茶树特异品种筛选提供科学依据。【方法】以43份福建野生茶树种质资源和8个栽培品种为供试材料,采用高效液相色谱(HPLC)测定其儿茶素组分含量,并进行描述统计分析、正交偏最小二乘判别分析、聚类热图分析及特异性种质资源筛选。【结果】43份福建野生茶树种质资源均检测出表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me),其中以云霄6号(YX06)含量最高,为33.65 mg·g^(-1)。43份福建野生茶树种质资源的特征物质为表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),且二者含量极显著高于8个栽培品种。聚类分析表明12份野生茶树种质资源与8个栽培品种聚为一类,其中以诏安和蕉城地区居多,其表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)和儿茶素(C)含量较高;其余31份野生茶树种质资源聚为一类,其表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3"Me)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量较高。筛选获得高EGCG3"Me茶树资源(>20 mg·g^(-1))8份,高EGCG茶树资源(>150 mg·g^(-1))9份和高儿茶素茶树资源(>200 mg·g^(-1))18份。【结论】对福建野生茶树种质儿茶素组分进行测定及系统分析,发现其富含EGCG3"Me,并筛选出大量特异种质。