利用家蚕表达合成人表皮生长因子(EGF)及产物对胃粘膜损伤的修复作用

基于家蚕杆状病毒密码子的偏爱性,对人表皮生长因子基因(hEGF)的部分密码子进行修改后合成一个新的基因,命名为CSEGF。所合成的CSEGF能编码同hEGF完全一致的氨基酸序列,并被重组进家蚕杆状病毒获得重组Bm-BacCSEGF。重组病毒感染家蚕后,该基因在家蚕中的表达量达28.4μg/mL幼虫血淋巴及33.07μg/mL蛹血淋巴。将表达CSEGF的蚕蛹经冻干直接制成EGF冻干粉胶囊,经测定冻干粉中EGF的质量比达140μg/g。动物模型试验显示该冻干粉对酸诱导的急性胃粘膜损伤的SD大鼠有显著的修复作用,对大鼠裸鼠的肾细胞生长也有明显的促进作用。

大鼠浅Ⅱ度烫伤创面EGF及受体基因的表达

取大鼠浅Ⅱ度烫伤后1、3、5、7、10d和14d及正常对照（脱毛未烫伤）的皮肤样本，采用核酸分子斑点杂交技术，观察表皮生长因子（EGF）及其受体（EGF－R）的基因表达。结果发现：EGF基因表达水平于伤后第3d明显增强，第5d达高峰；EGF受体基因表达水平于伤后第1d即明显增强，伤后第5d恢复正常。提示内源性EGF及其受体参与了调控创面修复，因子和受体之间相互制约，避免细胞过度增生。

EGF和EGFr基因在临床供皮区创面愈合中表达的研究

目的:观测临床创面愈合中表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)基因和表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFr)基因的表达,探讨EGF和EGFr基因表达变化在创面修复中的作用。方法:应用原位杂交方法对临床患者断层供皮区创面愈合中EGF、EGFr基因表达变化进行了动态观察,并进行半定量分析。结果:临床创面愈合过程中,EGF、EGFr基因表达有明显规律性的变化,伤后4天,创面内EGF基因表达较弱,EGFr基因表达很强;伤后10天,创面内EGF基因表达明显增强,分布范围增大,而EGFr基因表达较伤后4天减弱,分布范围减小;伤后16天,创面内EGF、EGFr基因表达强度均较伤后10d明显减弱,EGF表达强度接近伤后4天的水平,而EGFr基因表达已基本呈阴性。结论:EGF、EGFr基因表达变化与创面修复的过程有明显相关,EGF、EGFr基因表达变化参与了创面修复过程,合理调控其表达变化有助于创面修复。

胃粘膜组织K-ras、P16基因和EGF表达及意义

目的 检测胃粘膜组织K ras、P16基因及表皮生长因子 (EGF) ,探讨其临床意义。方法 K ras、P16基因采用单链构象多态性分析法 (SSCP) ,EGF采用免疫组化法。结果 K ras在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 5 0 %、75 % ,突变率分别为 78.6 %、72 .7% ;P16基因在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 2 1.4 %、18.2 % ,突变率分别为 6 4 .3%、6 3.6 %。与对照组 (慢性浅表性胃炎 )相比差异均有显著性。EGF在有淋巴结转移和无淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达分别为 76 .9%、38.9% ,两者有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 K ras、P16。

VEGF转基因对博莱霉素诱导幼兔肺动脉高压作用的研究

目的:研究VEGF转基因对博莱霉素(b leom yc in,BLM)诱导幼兔肺动脉高压的作用。方法:1月龄幼兔分为对照组、BLM组、脂质体组和转基因组。2周后测定肺动脉收缩压(PA SP)、舒张压(PADP)和平均压(M PAP);观测肺的大体结构、中小肺动脉病理改变以及管壁厚度指数(T I)和面积指数(A I)、肺动脉内皮细胞VEGFmRNA和eNO SmRNA的表达以及超微结构。结果:①肺动脉压力:BLM组及脂质体组肺动脉压力明显增高,转基因组肺动脉压力明显低于BLM组及脂质体组。对照组、BLM组、脂质体组和转基因组PA SP分别为16.5±2.9、25.2±7.0、24.4±6.0和18.3±2.7 mmHg;PADP分别为8.8±4.2、13.1±3.8、13.7±4.6和10.2±2.6 mmHg;M PAP分别为12.1±4.0、18.4±4.7、18.4±5.1和14.1±2.5 mmHg。②肺动脉病理:BLM组及脂质体组中小肺动脉管壁增厚、管腔变小,肺动脉管壁的T I及A I明显增加;转基因组中小肺动脉管壁增厚及管腔变小明显减轻,对照组、BLM组、脂质体组和转基因组T I分别为0.52±0.16、0.65±0.16、0.63±0.11和0.55±0.13,A I分别为0.74±0.17、0.84±0.14、0.85±0.08和0.79±0.12。③肺动脉内皮细胞VEGFmRNA及eNO SmRNA表达水平:BLM组及脂质体组VEGFmRNA和eNO SmRNA表达均减少,转基因组VEGFmRNA和eNO SmRNA表达高于BLM组及脂质体组,但低于对照组。对照组、BLM组、脂质体组和转基因组肺动脉内皮细胞VEGFmRNA分别为0.83±0.09、0.45±0.11、0.45±0.13和0.65±0.18,eNO SmRNA分别为0.79±0.12、0.45±0.12、0.50±0.14、0.56±0.08。结论:VEGF转基因能改善BLM诱导的幼兔肺动脉内皮细胞结构的改变及VEGFmRNA和eNO SmRNA表达,使中小肺动脉管壁增厚减轻,肺动脉管壁T I及A I增加减少,减轻肺动脉压力的增高。

GST-EGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

将小鼠ＥＧＦ基因克隆至谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，转化大肠杆菌ＤＨ５α，获得高效表达，融合蛋白ＧＳＴ－ｍＥＧＦ经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ－ＧＳＨ亲和层析柱纯化和凝血酶消化获得有免疫活性的ｍＥＧＦ。

EGF,EGFR和PCNA表达与大肠癌临床病理学特征及关系

目的 探讨EGF ,EGFR和PCNA表达与大肠癌临床病理学特征及预后的关系。方法 对5 0例大肠癌和 10例正常的大肠组织 ,通过免疫组化法观察EGF ,EGFR与PCNA的表达。结果 大肠癌组织中EGF ,EGFR表达阳性率分别是 76.0 7%和 84.15 % ,正常大肠组织无表达 (P <0 .0 5 ) ;大肠癌组织中PCNA表达为 ( 3 7.2 2± 14 .49) % ,正常大肠组织为 ( 15 .12± 3 .2 1) % ( P <0 .0 5 )。三者表达与大肠癌组织类型、临床Dukes分期及转移、复发有关 (P <0 .0 5 ) ,但与肿瘤大小及部位无关 (P>0 .0 5 )。结论 大肠癌组织EGF ,EGFR和PCNA的表达 ,对判断肿瘤的恶性程度、估计预后、判断复发及指导患者术后化疗具有一定的临床意义。

乳腺癌组织中HSG和EGFR的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨增殖抑制基因(HSG)、表皮生长因子受体(EGFR)在不同乳腺组织中的表达及与乳腺癌临床病理特征的相关性及意义。方法应用免疫组织化学方法检测增殖抑制基因(HSG)、表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌组织中的表达。结果 HSG的蛋白主要在细胞胞质中表达,乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于乳腺纤维腺瘤组织和正常乳腺组织,差异具有统计学意义(P<0.05);乳腺纤维腺瘤与正常乳腺组织HSG阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌组织中EGFR的阳性表达率较乳腺纤维腺瘤组织、正常乳腺组织中明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);乳腺纤维腺瘤与正常乳腺组织中EGFR的阳性表达率差异无统计学意义。HSG和EGFR的表达与淋巴结转移和病理组织学分级有关,同时也与ER、H-erb-2的表达有关,而与肿瘤类型、肿瘤大小、临床分期、年龄因素无关。乳腺癌组织中HSG的表达与EGFR的表达呈负相关,与ER、H-erb-2正相关,而与PR的表达无相关性。结论联合检测HSG和EGFR的表达对判定乳腺癌的生物学行为、预后和指导治疗有重要意义。

基于深度测序和生信分析挖掘高原汉族人群红细胞增多症变异的研究

目的通过小样本外显子测序与公用数据库比对进行生物信息挖掘,探寻汉族人群高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)变异与发病的相关性。方法纳入汉族高原红细胞增多症男性患者4例和高原健康男性5例,采集静脉血并提取DNA进行全外显子组测序;将测序数据进行功能学富集分析(gene ontology,GO&kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)构建突变基因蛋白质互作网络(protein protein interaction,PPI),选择显著性最高的基因,筛选潜在关键HAPC相关变异位点,初步探究相关变异与HAPC发病可能的机制。结果通过全外显子测序,发现HAPC相关的突变基因216个,其中表皮生长因子(epidemal growth farctor,EGF)基因在功能学富集分析(GO&KEGG),蛋白质互作网络(PPI)中具有高度显著性,初步筛选出5个潜在关键HAPC相关变异位点,通过生物信息学预测及分析,最终筛选出EGF基因上3个可能的变异c.2124G>A(p.Met708Ile)、c.2351A>T(p.Asp784Val)以及c.2759A>T(p.Glu920Val),可能是HAPC的突变位点,与HAPC发病相关。结论本研究表明汉族EGF基因的变异与HAPC发病存在相关性。EGF基因的变异可能通过干扰RNA剪接,改变RNA二级结构,影响蛋白质结构,进而影响EGF的生成及HAPC的发生发展。

全反式维甲酸对VSMC、EGF-R基因表达和[Ca^(2+)]_i的影响

应用细胞培养、斑点杂交和荧光探针技术,观察到全反式维甲酸明显抑制胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞表皮生长因子受体 mRNA 表达和[Ca^(2+)]_i 增加。

优化密码子提高EGF-PE35KDEL表达量

目的 提高EGF- PE35KDEL融合蛋白的表达量。方法 设计合成含优化密码子的EGF序列 ,定向克隆于pET2- 8a- EGF PE35KDEL的NcoⅠ和NdeⅠ位点 ,构建表达质粒pET2 8a pBEGF PE35KDEL。将两种表达质粒转化至BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,比较表达量。结果 优化密码子的EGF- PE35KDEL表达量要高于未优化的EGF -PE35KDEL。结论 优化密码子能促进EGF -PE35KDEL的表达。

体外培养神经干细胞PDGF、EGF和GDNF的表达

目的为研究体外培养小鼠神经干细胞(NSC)血小板源性生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的基因表达.方法取小鼠胚胎海马NSC培养并鉴定,提取其总RNA,用RT-PCR技术检测培养NSC内PDGF、EGF、GDNFmRNA的表达.结果培养NSC中PDGF mR-NA表达最强,EGF mRNA明显表达,但几乎未检测到GDNF mRNA.结论为了解NSC分泌神经营养因子发挥生物学作用提供了理论基础.

EGF-SEA融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化

根据基因库中查到的金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因序列和人体表皮生长因子(EGF)基因序列进行密码子优化,以适于大肠杆菌表达。人工合成SEA基因与EGF基因。将两目的基因克隆至原核表达载体pET22b中,经测序验证表明成功构建了重组表达质粒pET22b-EGF-SEA。将构建好的pET22b-EGF-SEA质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达;SDS-PAGE分析表明融合基因EGF-SEA在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式得到了高效表达,产物相对分子质量约为44kDa,与理论值大小一致。包涵体经洗涤,变性、复性后用His.BindKit进行分离纯化,所得蛋白纯度≥95%。高纯度EGF-SEA融合蛋白的获得为进一步研究其生物学活性及肿瘤治疗奠定了基础。

EGF、Gln和pGRF基因质粒对早期断奶仔猪肠道发育的影响

为研究表皮生长因子(EGF)及其与谷氨酰胺(Gln)和pGRF基因质粒的不同组合形式对早期断奶仔猪肠道发育影响的差异,选取同日龄断奶仔猪30头,等分到EGF、EGF+Gln、EGF+pGRF基因质粒、EGF+pGRF基因质粒+Gln和对照组(生理盐水)共5个处理中,每个处理3个重复,每个重复2头猪,进行对比试验,试验期21d。试验结束时,从每个处理的每个重复中随机选取1头仔猪,空腹称重后屠宰取样。结果表明:EGF与pGRF基因质粒、Gln的不同组合形式对肝脏、胰脏和胃主要消化器官重量没有显著影响(P>0.05),但均不同程度促进了仔猪小肠的发育。其中,以EGF+Gln+pGRF基因质粒的效果最为明显,小肠、空肠前部、空肠中段、空肠后段及整个空肠的重量分别超过对照组37.12%(P<0.1)、103%(P<0.05)、86.27%(P<0.05)、100%(P<0.1)和96.02%(P<0.05)。空肠绒毛长度提高89.68%(P<0.1),细菌移位率为零。但在本试验中,各处理对黏膜刷状缘碱性磷酸酶的活性都没有明显影响(P>0.05)。

EGF、Gln和pGRF基因质粒对早期断奶仔猪生产性能、免疫功能及相关激素水平的影响

为探讨表皮生长因子（EGF）、谷氨酰胺（Gln）和pGRF基因质粒不同组合形式对早期断奶仔猪生产性能、免疫功能及相关激素（皮质醇、生长激素）分泌的影响，选择同日龄断奶仔猪42头，随机分为7个处理，每个处理3个重复，每个重复2头猪，做一对比试验，试验期21d。结果表明，EGF、Gln和pGRF基因质粒的不同组合形式在促进仔猪生长、增强免疫功能及调节激素分泌方面均表现出良好效果，其中以三者联合使用的效果最为突出：仔猪末重和全期日增重分别提高48．02％（P〈0．01）与1．68倍（P〈0．01），料肉比降低50．75％（P〈0．01）；日粮粗蛋白表观消化率增加1．13倍（P〈0．01）；毛色分数提高14．03（P〈0．05），而且全期未发生腹泻，其作用远优于两两组合及各自单独使用。对免疫功能的调节效果以EGF＋pGRF基因质粒和EGF＋G1n＋pGRF基因质粒两种组合形式较为明显：断奶后第1周，试验组血清IgG水平分别比对照组增加11．71％（P〈0．05）和11．24％（P〈0．1）；第2周则分别减少9．53％（P〈0．01）和5．06％（P〈0．1）。对仔猪内分泌的影响，亦以三者联合使用的作用最为显著：其血清皮质醇水平在断奶后1～2周分别比pGRF基因质粒单独使用及其与EGF两者合用降低40．40％和88．57％；生长激素水平的变化与皮质醇呈相反趋势，但变化规律与皮质醇相似。

杂色鲍后消化道生长相关基因HdEGF1的研究

附着变态是许多海洋无脊椎动物幼体生长发育的一个必经过程,是幼体性状消失而成体性状展开的关键阶段.报道了与附着变态密切相关的杂色鲍HdEGF1基因的克隆、序列分析及其时空表达模式.运用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了HdEGF1基因全长cDNA序列.该基因全长1 239bp,含1个343个氨基酸残基的开放阅读框(ORF),推测的蛋白序列包含3个Ca2+结合类表皮生长因子(EGF-CA)结构域和1个血管性血友病因子(vWFA)结构域.通过序列相似性比较,确定其为新型表皮生长因子1(EGF1)相关蛋白.荧光定量PCR(qPCR)结果显示HdEGF1基因在幼体附着后的表达量比附着前任一时期均高19倍以上;全胚原位杂交(WMISH)结果显示HdEGF1基因集中表达在变态后幼体后消化道的表皮细胞.HdEGF1基因的这种时空表达模式表明HdEGF1受严格的时空调控,直接参与了附着后杂色鲍幼体后消化道的生长和细胞分化.推测HdEGF1蛋白与某未知的vWFA-结合蛋白一道调控着杂色鲍幼体后消化道的空间走向.因此,HdEGF1蛋白很可能在后肠的形态建成中起着非常核心的作用.本研究为贝类肠道形态建成机制的深入研究提供了切入点,HdEGF1基因可以作为重要的标志分子,用于深入研究肠道形态建成过程中的信号通路、细胞分化和细胞迁移.

PEG修饰对PLL-EGF基因载体靶向结合作用的影响

聚阳离子基因载体系统由于安全性好和便于设计等优点,近年来在基因治疗中的应用发展迅速.在进行基因药物的体内靶向输送时,目前国际上主要通过在基因输送系统中修饰聚乙二醇(PEG)和靶向分子来提高体内输送的稳定性和靶向性.PEG的修饰可能会遮蔽靶向分子的功能呈现,因此建立定量分析方法评价PEG修饰对靶向结合作用的影响非常重要.将连接有表皮生长因子(EGF)的聚赖氨酸(PLL)基因载体作为研究模型,建立BIAcore检测方法,比较PLL-EGF,PEG7000修饰的PLL-EGF,PEG20000修饰的PLL-EGF对表皮生长因子受体(EGFR)的结合和解离速率,评价PEG修饰对PLL-EGF靶向功能呈现的影响.结果表明,PEG7000的修饰降低了EGF和EGFR之间的结合速率,提高了解离速率,整体减弱了靶向分子的靶向结合能力.PEG20000的修饰进一步减弱靶向分子功能的呈现.因此在进行靶向型聚阳离子基因输送系统设计时,考察PEG修饰对靶向结合能力的影响程度非常重要.该研究结果也对其他基因载体系统的设计提供必要的参考.

Effects of estrogen on growth of breast cancer cells and expression of p185 and EGF receptor

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｏｎｇｒｏｗｔｈｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ１８５ａｎｄＥＧＦｒｅｃｅｐｔｏｒＨａｏＸｉｎｂａｏ；ＺｈａｎｇＹｉｎｇｈｕａ；ＱｉｕＦｕｈａｉ；ＹｉｎＹｉｎｇ；ＷａｎｇＬｉｌｉ...

烧伤创面内表皮生长因子、表皮生长因子受体、C-myc三种基因表达变化的临床观察

目的为探讨烧伤创面愈合机理,了解烧伤创面内表皮生长因子基因、表皮生长因子受体基因和C-myc基因的变化,为临床治疗提供依据。方法我们对25例病人烧伤创面的不同部位应用原位杂交方法,观察表皮生长因子基因、表皮生长因子受体基因和C-myc基因在烧伤创面肉芽中心部(肉芽中心部)、肉芽与愈合皮肤的交界部(创面交界部)、愈合皮肤部位(创面愈合部)和自身正常皮肤对照部位内表达强度和分布的特点。结果同一部位烧伤创面内,表皮生长因子基因和C-myc基因在交界部表达最强;烧伤创面中心部位表达次之,烧伤创面愈合部位表达较弱;表皮生长因子受体基因表达在创面中心部位表达较强,在表达交界部次之;在创面愈合部表达较弱;正常皮肤对照部位三种基因表达不明显。结论烧伤创面内表皮生长因子基因、表皮生长因子受体基因和C-myc基因在烧伤创面内有明显的规律性表达,表达与创面愈合密切相关。