表皮生长因子受体在舌癌患者常见舌苔中的表达

目的:检测表皮生长因子受体(EGF-R)在舌癌患者常见舌苔中的表达水平,探讨EGF-R与舌苔形成的关系。方法:选择口腔舌鳞癌切除术患者,根据不同舌苔分为白薄苔组、白厚苔组、黄薄苔组、黄厚苔组及无苔组;并将胎儿正常白薄苔设为对照组。应用基因芯片初筛、荧光定量PCR技术定量检测舌癌患者舌黏膜EGF-R mRNA的表达水平。结果:不同舌苔EGF-R mRNA表达水平差异明显,从高到低依次为:黄厚苔>白薄苔>黄薄苔>无苔>白厚苔,且均高于对照组。结论:不同舌苔舌上皮细胞EGF-R基因表达水平存在明显差异,EGF-R可能是影响舌苔形成的重要因素之一。

水飞蓟喷雾剂对大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复的影响

目的考察水飞蓟喷雾剂对大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复作用及机制。方法建立深Ⅱ度烫伤模型大鼠,随机分为模型组、美宝湿润烧伤膏组(24 g/kg)、水飞蓟喷雾剂小剂量组(24 g/kg)、水飞蓟喷雾剂中剂量组(48 g/kg)、水飞蓟喷雾剂大剂量组(96 g/kg)和空白组,连续给药21 d。分别在造模后第3、7、14、21天计算烫伤创面愈合率,检测血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量;免疫组化法检测烫伤创面碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、转化生长因子-β(transformating growth factor betal, TGF-β)的表达。结果与模型组相比,烫伤后第3天,水飞蓟喷雾剂小剂量组、中剂量组、大剂量组创面愈合率提高,血清SOD活性升高,MDA含量降低,且差异均具有统计学意义(P<0.05);烫伤后第7、14天,水飞蓟喷雾剂大剂量组血清SOD活性升高,MDA含量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);同时水飞蓟喷雾剂各剂量组均可不同程度诱导受损组织内bFGF、EGF、TGF-β的表达。结论水飞蓟喷雾剂对大鼠深Ⅱ度烫伤创面有修复作用,可促进烫伤创面的愈合,其机制可能与抗氧化,增加b-FGF、EGF、TGF-β的表达有关。

EGF +61基因多态性与乙型肝炎肝细胞癌的相关性

目的探讨表皮生长因子(EGF)G61A位点(EGF +61)多态性与慢性乙型肝炎肝细胞癌的相关性。方法运用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测中国人群中215例慢性乙型肝炎肝细胞癌患者和104例正常对照者EGF+61位点的基因型,分析基因型及等位基因的分布频率。结果EGF +61位点基因型及等位基因在乙型肝炎肝细胞癌患者及对照者的分布频率差异均无统计学意义。TNMⅠ、Ⅱ及TNMⅢ、Ⅳ两组的基因型及等位基因的分布频率差异也无统计学意义。结论在中国人群中,EGF +61位点的基因多态性与乙型肝炎肝细胞癌的发生和进展程度无密切关系。

慢性乙型肝炎病理舌苔形成与唾液、血清h-EGF含量变化的关系

目的研究慢性乙型肝炎患者舌苔变化与唾液、血清表皮生长因子(h-EGF)含量变化及舌苔上皮细胞表皮生长因子受体(h-EGFR)的关系,探讨唾液血清h-EGF在乙肝病理舌苔形成中的作用。方法选取128例慢性乙型肝炎患者为研究对象,以15例其它消化系统疾病、15例其它系统疾病及15例健康人做对照组,放免法检测受试者唾液、血清h-EGF含量,免疫组化法检测舌苔上皮细胞h-EGFR表达,观察并记录病理舌象进行分析。结果与正常对照组相比,病理厚苔组唾液、血清h-EGF含量明显升高(P<0.01)。乙肝组白厚(腻)苔、黄腻苔舌h-EG FR表达增强,唾液、血清h-EG F含量明显升高,与其它对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论慢性乙肝病理舌苔的形成与唾液h-EGF含量的改变有关。

不同浓度奶牛乳腺上皮细胞和奶牛脐带间充质干细胞共培养对几种细胞因子分泌的影响研究

为了研究在不同浓度下奶牛脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)共培养对共培养体系细胞增殖和细胞贴壁率的影响,并通过检测与细胞增殖有关的细胞因子来探究其作用机制,试验将P3代UC-MSCs与P3代BMECs按照浓度比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶50、1∶100、1∶1 000、2∶1等不同比例随机混合培养,同时设立UC-MSCs与BMECs单纯培养组为对照组,并分别于0,24,48,72,96,120和144小时提取上清液检测表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(b FGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、肝细胞生长因子(HGF)的分泌水平。结果表明:将UC-MSCs和BMECs按照不同浓度比混合共培养后,EGF、HGF、b FGF分泌水平在72小时时最高,且1∶2浓度组显著高于对照组(P<0.05);TGF-α、TGF-β分泌水平在72小时时最低,且1∶2浓度组显著低于对照组(P<0.05)。说明UC-MSCs和BMECs共培养能提高EGF、HGF、b FGF分泌水平,降低TGF-α、TGF-β的分泌水平。

表皮生长因子及其受体和erb-B在鼠视网膜的表达

用免疫组织化学方法,对鼠视网膜的表皮生长因子(EGF)及其受体(EGF-R),和erb-B的表达,作了研究.结果表明:①EGF,EGF-R和erb-B分别在视网膜各层有不同表达;②EGF免疫反应着色不强,但有特异性地均匀分布在节细胞层(GCL)、内核层(INL)、外核层(ONL)和视网膜色素上皮层(RPE);③EGF-R免疫反应着色以GCL和INL的细胞明显,分布于细胞浆和细胞核,以细胞核更明显;④erb-B的分布类似EGF.但在ONL内出现一条较明显的着色带.对以上结果的可能意义进行了讨论.

慢乙肝患者舌苔与舌苔细胞凋亡、唾液、血清EGF含量变化及血清HBV DNA的关系

目的:研究慢性乙型肝炎患者病理舌苔与表皮生长因子(EGF)、舌苔细胞凋亡及血清HBV DNA定量的关系,探讨表皮生长因子、细胞凋亡及HBVDNA在乙肝病理舌苔形成中的作用。方法:选取128例慢性乙型肝炎患者为研究对象,以15例其它消化系统疾病病人,15例其它系统疾病病人及15例健康人做对照组。放免法检测受试者唾液、血清EGF含量;免疫组化法检测舌苔上皮细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达;末端标记测定法检测舌苔凋亡细胞;荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量。结果:与生理性薄白苔组相比,各病理舌苔组唾液、血清EGF含量及舌上皮细胞EGFR阳性细胞率均升高,以黄腻苔和白厚苔组升高最明显,与其它组相比,差异有统计学意义(P<0.01);与生理性薄白苔组相比,除少苔或剥苔组外,各病理舌苔组凋亡细胞数目均有所增加,以黄腻苔和白厚苔组增多最明显,但黄腻苔和白厚苔组舌上皮细胞凋亡指数(AI)最低(P<0.01),少苔或剥苔组AI最高;各病理舌苔组相比,黄腻苔和白厚苔组血清HBV DNA含量最高,薄白苔组最低,与厚苔组相比,差异有统计学意义(P<0.05);薄白苔组病毒复制以少量(<105copies/ml)为主,与其它组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:慢乙肝患者病理舌苔的形成与唾液中EGF作用于舌上皮细胞引起舌苔上皮细胞不同程度的增殖、分化有关。

扩张皮肤中b-FGF和EGF的含量与扩张量的关系

目的 研究皮肤软组织扩张术中 ,扩张程度对皮肤中碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和表皮生长因子 (EGF)含量的影响。方法 以香猪为动物模型 ,实验分为 7组 :注水 1 2量组、注水 3 4量组、注水满量组、注水超量 5 0 %组、注水超量 10 0 %组、手术对照组、空白对照组。各实验组的注水时间均为 10周 ,测量各组皮肤中b FGF和EGF含量并进行统计学处理。结果 扩张皮肤中b FGF和EGF含量增加 ,与正常皮肤相比差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,超量扩张后其增加更加显著 ,与正常皮肤相比差异有非常显著性意义 (P <0 0 1)。结论 皮肤扩张可引起皮肤b FGF和EGF含量增加 ,其所导致的生物学效应 ,应可能与表皮细胞的增生和扩张皮瓣的血管化程度有关。

健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马BDNF、EGF、bFGF表达的影响

目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组。采用免疫组化法于术后7、14、28d观察海马BDNF、EGF、bFGF表达情况。结果:术后7d,中药组BDNF、EGF、bFGF表达显著高于模型组、西药组(P<0.05)。术后14d,中药组BDNF、EGF表达显著高于模型组、西药组(P<0.05);bFGF表达与西药组无差异。术后28d,中药组BDNF、bFGF表达显著高于模型组(P<0.05),与西药组无差异;EGF表达无差异。结论:健脾益智胶囊可促进BDNF、EGF、bFGF阳性细胞数量增加,提示健脾益智胶囊能可能通过诱导BDNF、EGF、bFGF以促进缺血后神经干细胞增殖分化。

银屑病患者骨髓基质细胞分泌EGF、PDGF-A和PDGF-B水平研究

目的通过比较银屑病患者与对照组骨髓基质细胞分泌表皮生长因子(EGF)、血小板源性生长因子-A(PDGF-A)和血小板源性生长因子-B(PDGF-B)水平的差异,揭示银屑病患者骨髓造血微环境的异常。方法采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传3代后又培养72h的骨髓基质细胞及培养上清,用流式细胞仪鉴定细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中EGF、PDGF-A和PDGF-B的水平。结果90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上;患者组骨髓基质细胞分泌EGF和PDGF-B均显著低于对照组(P<0.05),而PDGF-A的分泌水平两组间无统计学差异(P>0.05)。结论银屑病患者骨髓基质细胞分泌的某些细胞因子存在异常,表明患者骨髓造血微环境可能存在异常。

天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白的原核表达、纯化与发酵

目的原核表达天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白,并进行纯化和发酵。方法全基因合成带有凝血酶切割位点的天蚕素B和表皮生长因子融合基因,克隆入pET22b(+)-X表达载体中,构建重组质粒pET22b-CecropinB-EGF,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta-gami2(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE及Westernblot分析。镍离子亲和层析纯化融合蛋白并复性后,对其促表皮生长活性进行测定,最后在5L发酵罐中进行发酵。结果酶切及测序结果显示,融合蛋白基因已克隆入pET22b(+)-X表达载体中;SDS-PAGE分析显示,天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白在Rosetta-gami2(DE3)宿主菌中得到了有效表达,表达量约占全菌总蛋白的30%;Westernblot分析显示,表达产物可与表皮生长因子单克隆抗体特异结合;融合蛋白的表达形式为包涵体;纯化、复性后的融合蛋白具有促BALB/c3T3细胞生长的活性,在5L发酵罐中进行发酵,1次可收获菌体约60g。结论已成功地在大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)中表达了天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白,为研究具有抗菌和促伤口愈合的双功能药物奠定了基础。

柴芩平胃胶囊对胆汁反流性胃炎大鼠胃肠激素的影响

通过施行大鼠B Ⅱ式胃部分切除 (胃空肠吻合 )术形成胆汁反流性胃炎 ,观察柴芩平胃胶囊对胃肠激素和胃液pH的影响 ,分析其治疗残胃炎的作用机理。结果 :与空白组比较 ,模型组大鼠血清胃泌素 (Gastrin)和胃粘膜前列腺素E2 (PGE2 )显著降低 (P <0 0 1 ) ,胃液pH升高 (P <0 0 1 )。与模型组比较 ,柴芩平胃胶囊小、中剂量组可升高血清胃泌素、胃液表皮生长因子 (EGF)和PGE2 (P<0 0 5 ) ,但对胃液pH影响不大。说明长期胆汁反流可引起胃肠内分泌激素的失调 ,损伤胃粘膜营养和防御机能 ,从而损伤胃粘膜 ;柴芩平胃胶囊通过影响激素分泌而达到治疗目的。

肝素结合表皮生长因子调控核因子κB诱导卵巢上皮性癌紫杉醇耐药的作用及机制

目的探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)通过上调核因子κB(NF-κB)的表达从而诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)对紫杉醇耐药的作用及可能的机制。方法(1)NF-κB表达的检测:将卵巢癌亲本细胞系A2780细胞和紫杉醇耐药细胞系A2780/Taxol细胞及其对应的裸鼠分成4组,即A2780组、A2780+交叉反应物质197(CRM197,为HB-EGF抑制剂)组、A2780/Taxol组和A2780/Taxol+CRM197组,采用双重免疫荧光染色法检测4组卵巢癌细胞中HB-EGF和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达,蛋白印迹法(western blot法)检测4组卵巢癌细胞中NF-κB的表达,免疫组化SP法检测4组裸鼠移植瘤组织中NF-κB蛋白的表达。(2)NF-κB功能的检测:将A2780/Taxol细胞分4组,即空载体组、NF-κB小分子干扰RNA(siRNA)组、空载体+CRM197组、NF-κB siRNA+CRM197组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测4组A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐药性[以50%抑制浓度(IC50)表示],western blot法检测4组A2780/Taxol细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达,流式细胞仪检测4组A2780/Taxol细胞中P-gp的功能[以细胞内累积的若丹明(Rh123)的荧光强度表示]。结果(1)NF-κB表达的检测:A2780组、A2780+CRM197组、A2780/Taxol组和A2780/Taxol+CRM197组细胞中HB-EGF蛋白的表达水平分别为(5.6±1.3)、(2.1±1.2)、(11.7±3.5)、(6.2±1.4)分,EGFR蛋白的表达水平分别为(5.1±1.6)、(2.8±0.6)、(10.4±3.1)、(5.6±1.9)分,NF-κB蛋白的表达水平分别为1.89±0.23、0.74±0.12、3.45±0.16、1.31±0.08;4组裸鼠移植瘤组织中NF-κB蛋白的表达水平分别为(3.3±1.1)、(1.4±0.4)、(8.7±2.3)、(3.6±1.2)分。其中,A2780组和A2780/Taxol组细胞中HB-EGF、EGFR、NF-κB蛋白的表达水平及裸鼠移植瘤组织中NF-κB蛋白的表达水平分别高于A2780+CRM197组和A2780/Taxol+CRM197组,而A2780组细胞中HB-EGF、EGFR、NF-κB蛋白的表达水平及裸鼠移植瘤组织中NF-κB蛋白的表达水平低于A2780/Taxol组,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)NF-κB功能的检测:空载体组、NF-κB siRNA组、空载体+CRM197组、NF-κB siRNA+CRM197组A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50分别为(39.4±0.8)、(7.6±0.6)、(6.7±0.5)、(4.2±0.4)μmol/L,4组A2780/Taxol细胞中P-gp蛋白的表达水平分别为3.11±0.23、1.45±0.16、1.73±0.21、0.68±0.14,4组A2780/Taxol细胞内的Rh123荧光强度分别为110±15、246±19、231±22、296±24。其中,NF-κB siRNA组、空载体+CRM197组、NF-κB siRNA+CRM197组A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50及细胞中P-gp蛋白的表达水平均明显低于空载体组(P<0.01),而细胞内Rh123荧光强度明显高于空载体组(P<0.01);NF-κB siRNA组、空载体+CRM197组A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50及细胞中P-gp蛋白的表达水平均明显高于NF-κB siRNA+CRM197组(P<0.01),而细胞内Rh123荧光强度明显低于NF-κB siRNA+CRM197组(P<0.01)。结论NF-κB的表达与卵巢癌紫杉醇耐药相关,HB-EGF可能通过调控EGFR/NF-κB/P-gp信号通路诱导卵巢癌对紫杉醇产生耐药。